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        中央空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面真菌鑒定及溫?zé)峥刂?/h1>
        2014-04-28 03:58:43付柏淋大連理工大學(xué)建設(shè)工程學(xué)部建筑環(huán)境與新能源研究所遼寧大連116023
        中國(guó)環(huán)境科學(xué) 2014年11期
        關(guān)鍵詞:孢屬變溫青霉

        付柏淋,呂 陽(yáng)(大連理工大學(xué)建設(shè)工程學(xué)部,建筑環(huán)境與新能源研究所,遼寧 大連 116023)

        中央空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面真菌鑒定及溫?zé)峥刂?/p>

        付柏淋,呂 陽(yáng)*(大連理工大學(xué)建設(shè)工程學(xué)部,建筑環(huán)境與新能源研究所,遼寧 大連 116023)

        為研究中央空調(diào)系統(tǒng)真菌繁殖擴(kuò)散機(jī)理及控制空氣微生物污染問(wèn)題,通過(guò)溫?zé)峥刂剖侄?探究不同溫?zé)岘h(huán)境下真菌菌落、菌絲生長(zhǎng)繁殖規(guī)律.以某體育館中央空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面真菌為研究對(duì)象,通過(guò)分離、生理生化實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)鑒定確認(rèn)空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面的優(yōu)勢(shì)菌屬種類(lèi)及數(shù)量.對(duì)分離鑒定的優(yōu)勢(shì)菌屬做溫?zé)峥刂茖?shí)驗(yàn),分別在25℃恒溫及22℃~28℃變溫條件下觀察菌落和菌絲的生長(zhǎng)規(guī)律.結(jié)果顯示,該空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面真菌優(yōu)勢(shì)菌屬為青霉屬(Penicillium spp.)和枝孢屬(Cladosporium spp.),菌落形成單位分別為600, 140cfu/c m2.溫?zé)峥刂蒲芯勘砻?無(wú)論25℃恒溫或22~28℃變溫條件,青霉屬生長(zhǎng)速度都要快于枝孢菌,且菌落直徑變化和時(shí)間成線性關(guān)系;溫?zé)峥刂茖?duì)青霉屬和枝孢菌的生長(zhǎng)繁殖具有明顯的抑制作用,溫?zé)峥刂萍夹g(shù)在抑制空調(diào)系統(tǒng)真菌生長(zhǎng)上可行.

        中央空調(diào)系統(tǒng);過(guò)濾器;真菌;分離鑒定;溫?zé)峥刂?/p>

        隨著經(jīng)濟(jì)發(fā)展及建筑舒適性要求的提高,大量居住建筑及公共建筑使用空調(diào)系統(tǒng)來(lái)滿足室內(nèi)溫濕度的要求.而在空調(diào)系統(tǒng)內(nèi)部,過(guò)濾器、冷卻盤(pán)管、冷凝水積水盤(pán)、加濕器等位置都為細(xì)菌、真菌等微生物提供了極佳的繁殖環(huán)境[1-5].這些繁殖的微生物,通過(guò)空調(diào)系統(tǒng)進(jìn)入室內(nèi)后,會(huì)對(duì)暴露在室內(nèi)環(huán)境中的人群健康造成危害[6-8].多項(xiàng)醫(yī)學(xué)研究表明,真菌污染與哮喘、過(guò)敏性鼻炎及呼吸道感染有關(guān)[9].法國(guó)國(guó)家衛(wèi)生與醫(yī)學(xué)研究所研究表明,室內(nèi)真菌對(duì)嚴(yán)重哮喘患者的危害性是相對(duì)于其他過(guò)敏物質(zhì)的2倍[10]. Somers等[11]發(fā)現(xiàn)吸入污染真菌顆粒的小鼠基因發(fā)生突變,這為真菌導(dǎo)致癌變提供了間接證明.同樣,真菌孢子極易擴(kuò)散的特性也決定其危害程度,尤其當(dāng)空調(diào)系統(tǒng)風(fēng)機(jī)運(yùn)行后極易將真菌及其孢子擴(kuò)散到室內(nèi),造成生物污染[12].

        2004年衛(wèi)生部對(duì)全國(guó)近1000家賓館、商場(chǎng)等公共場(chǎng)所的中央空調(diào)系統(tǒng)進(jìn)行抽檢,微生物合格率僅為6%,其中近50%為重度污染[13].廣州于2007年抽查5家公共場(chǎng)所空調(diào)系統(tǒng),細(xì)菌總數(shù)檢出范圍27~930cfu/cm3,真菌總數(shù)檢出范圍7~6000cfu/cm3,依據(jù)《公共場(chǎng)所集中空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)衛(wèi)生規(guī)范》,送風(fēng)中的細(xì)菌總數(shù)≤500cfu/cm3,真菌總數(shù)≤500cfu/cm3,細(xì)菌、真菌合格率均值分別為71.4%和85.7%[14].2012年大連市抽查10家酒店及賓館,依據(jù)衛(wèi)生規(guī)范細(xì)菌、真菌合格率均值分別為78.3%和77.8%,雖然衛(wèi)生狀況有所改善,但風(fēng)管內(nèi)的真菌含量仍超標(biāo)數(shù)倍[15].

        而在空調(diào)系統(tǒng)易滋生的微生物中,真菌存在比例又相對(duì)較高.陳鳳娜等[16]對(duì)國(guó)內(nèi)12個(gè)省份或直轄市的空調(diào)系統(tǒng)調(diào)查表明,空調(diào)系統(tǒng)內(nèi)真菌總數(shù)是細(xì)菌總數(shù)的4.49~25.19倍.李安桂等[17]對(duì)陜西歷史博物館空調(diào)系統(tǒng)實(shí)測(cè)研究表明,空調(diào)系統(tǒng)各段中真菌濃度是細(xì)菌濃度的1.60~128.06倍.盧振等[18]對(duì)哈爾濱兩棟大型公共建筑實(shí)測(cè)研究表明,空調(diào)設(shè)備表面平均濃度真菌是細(xì)菌的4.7倍.

        綜上所述,研究中央空調(diào)系統(tǒng)真菌類(lèi)微生物生長(zhǎng)繁殖特性,并找到合適有效的控制方法極其重要.本研究通過(guò)對(duì)某體育館中央空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面真菌類(lèi)微生物鑒定分析,分離得出過(guò)濾器表面真菌類(lèi)微生物優(yōu)勢(shì)菌屬,并通過(guò)溫?zé)犴憫?yīng)實(shí)驗(yàn)對(duì)其生長(zhǎng)繁殖規(guī)律進(jìn)行研究,以期為使用溫?zé)峥刂剖侄谓鉀Q空氣微生物污染問(wèn)題提供資料.

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)測(cè)儀器與材料

        無(wú)菌無(wú)紡布(100mm×100mm)、蒸餾水、察氏培養(yǎng)基(蔗糖30g/L,硝酸鈉3g/L,磷酸氫二鉀1g/L,硫酸鎂0.5g/L,氯化鉀0.5g/L,硫酸亞鐵0.01g/L, 121 ℃滅菌20min后使用)、載玻片、蓋玻片、凡士林、恒溫培養(yǎng)箱、雙向調(diào)節(jié)溫度的培養(yǎng)搖床、高壓滅菌鍋、電子顯微鏡,TR-72i溫濕度自記儀等.

        1.2 真菌的采樣與計(jì)數(shù)

        選取某體育館中央空調(diào)系統(tǒng)作為實(shí)測(cè)對(duì)象,在空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾網(wǎng)上,用鑷子夾取無(wú)菌無(wú)紡布在5cm×5cm的區(qū)域上輕拭,采集該區(qū)域內(nèi)全部積塵后將無(wú)紡布裝入滅菌袋.在無(wú)菌操作間,將擦拭物加入到無(wú)菌水中做充分清洗,使無(wú)菌無(wú)紡布上的物質(zhì)完全溶于無(wú)菌水,制成菌原液.取原液,分別制備10倍、100倍梯級(jí)稀釋濃度的菌液.分別吸取3種不同濃度的溶液1mL,滴在培養(yǎng)基上.將培養(yǎng)基放置在28℃培養(yǎng)箱中48h后,觀察優(yōu)勢(shì)菌屬菌落數(shù).平行樣菌落數(shù)取平均值,優(yōu)勢(shì)菌屬1,菌落數(shù)為600cfu/cm2,優(yōu)勢(shì)菌屬2,菌落數(shù)為140cfu/cm2.

        1.3 優(yōu)勢(shì)菌屬的分離鑒定

        1.3.1 生理生化實(shí)驗(yàn) 菌落培養(yǎng)成型后,通過(guò)菌落表面特性及菌絲結(jié)構(gòu),結(jié)合《菌種鑒定手冊(cè)》[19]進(jìn)行初步判斷.從菌落形態(tài)、顏色等生理生化特征,可見(jiàn)優(yōu)勢(shì)菌屬1(圖1)特征為菌落空氣側(cè)白色、成絮狀;平板側(cè)菌落成翠綠色,有金色斑點(diǎn).在40倍顯微鏡下觀察菌絲及孢子結(jié)構(gòu),可見(jiàn)菌絲有隔膜、多核,菌絲體產(chǎn)生掃狀分支的分生孢子梗,分生孢子為橢圓無(wú)隔孢子.優(yōu)勢(shì)菌屬2(圖2)特征為菌落空氣側(cè)黑色,較平坦;菌絲有隔多核,具有足的結(jié)構(gòu).

        圖1 青霉屬Fig.1 Penicillium spp.

        圖2 枝孢屬Fig.2 Cladosporium spp.

        圖3 青霉屬系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.3 Phylogenetic tree of Penicillium spp.

        圖4 枝孢屬系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)Fig.4 Phylogenetic tree of Cladosporium spp.

        1.3.2 分子生物學(xué)鑒定 挑取平板上從過(guò)濾網(wǎng)上分離出的優(yōu)勢(shì)真菌,分別置于4份液體察氏培養(yǎng)基中,在28℃、150r/min下培養(yǎng)3~4d,直至培養(yǎng)基中出現(xiàn)明顯菌絲球.培養(yǎng)完成后,進(jìn)行基因組提取.待基因組樣品提取完成,將樣品保存于-20℃,進(jìn)行PCR擴(kuò)增18S rDNA片段及純化,PCR擴(kuò)增產(chǎn)物于1%瓊脂糖凝膠上電泳,在紫外線燈下切下含目的片段凝膠,用DNA膠回收試劑盒回收目的片段,將目的片段DNA與T-載體連接,置于16℃反應(yīng)12h以上.反應(yīng)后進(jìn)行轉(zhuǎn)化克隆和篩選陽(yáng)性克隆,用質(zhì)粒提取試劑盒提取質(zhì)粒.通過(guò)雙酶切法(EcoR I, Hind III)驗(yàn)證,將含18S rDNA的質(zhì)粒測(cè)序.將測(cè)序結(jié)果使用NCBI BLAST軟件和GenBank數(shù)據(jù)庫(kù)進(jìn)行同源性分析,并建立系統(tǒng)發(fā)育樹(shù).經(jīng)18S rDNA測(cè)序和同源性比較,真菌1與多株P(guān)enicillium spp. 18S rDNA的相似性水平達(dá)到99%,其系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)如圖3所示(圖3中真菌1表示為G7).生理生化判斷及分子生物學(xué)鑒定真菌1為青霉屬(Penicillium spp.);真菌2與多株Cladosporium spp. 18S rDNA的相似性水平達(dá)到99%,其系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)如圖4所示(圖4中真菌2表示為B7).生理生化判斷及分子生物學(xué)鑒定,真菌2為枝孢屬(Cladosporium spp.).

        2 結(jié)果

        2.1 實(shí)驗(yàn)方案

        為研究空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面真菌類(lèi)微生物在不同溫度下的生長(zhǎng)規(guī)律,進(jìn)行了恒溫培養(yǎng)和變溫培養(yǎng).恒溫培養(yǎng)下(Case-1),環(huán)境溫度設(shè)定為25℃,每12h記錄1次菌落直徑;變溫培養(yǎng)下(Case-2),環(huán)境溫度設(shè)定變化范圍是22~28℃,每12h將22℃和28℃互換1次并記錄菌落直徑.實(shí)驗(yàn)方案如圖5所示.所有實(shí)驗(yàn)經(jīng)過(guò)凡士林滴加蒸餾水保濕處理,相對(duì)濕度維持在恒定值90%.

        圖5 實(shí)驗(yàn)方案示意Fig.5 Experimental program

        2.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

        由圖6和圖7可見(jiàn),無(wú)論是恒溫環(huán)境或是變溫環(huán)境,青霉屬和枝孢屬的菌落直徑均隨時(shí)間延長(zhǎng)而繁殖擴(kuò)大,但兩株真菌的增長(zhǎng)速度和增長(zhǎng)形態(tài)卻表現(xiàn)各異.在恒溫條件下(圖6),青霉屬的菌落生長(zhǎng)速率大于枝孢屬.在變溫條件下(圖7),青霉屬相對(duì)于枝孢屬,真菌孢子極易擴(kuò)散.

        由圖8可知,在恒溫環(huán)境下隨著時(shí)間的推移,兩株真菌菌落直徑增殖速率成線性變化,且青霉屬的菌落生長(zhǎng)速度要遠(yuǎn)大于枝孢屬.可見(jiàn),在恒溫條件下兩株優(yōu)勢(shì)真菌呈自然增殖狀態(tài).

        圖6 25℃恒溫真菌菌落變化Fig.6 Time series of fungal colonies at constant temperature of 25℃

        圖7 22~28℃變溫兩株真菌菌落變化Fig.7 Time series of fungal colonies at variable temperature ranging from 22℃ to 28℃

        圖8 25℃恒溫真菌生長(zhǎng)曲線Fig.8 Growth curve of two fungi at constant temperature of 25℃

        由圖9可見(jiàn), 22~28℃變溫環(huán)境下,隨著時(shí)間的推移,青霉屬于培養(yǎng)108h左右出現(xiàn)了緩慢生長(zhǎng)至不再生長(zhǎng)的情況,之后菌落直徑未再發(fā)生變化;枝孢屬在培養(yǎng)180h后也出現(xiàn)平緩生長(zhǎng)的傾向.在變溫環(huán)境下,青霉屬比枝孢屬提前出現(xiàn)了生長(zhǎng)停滯,溫?zé)犴憫?yīng)較迅速.相對(duì)于恒溫環(huán)境,兩株真菌都較早出現(xiàn)了生長(zhǎng)停滯.可見(jiàn),在變溫條件下兩株優(yōu)勢(shì)真菌呈受控狀態(tài).

        圖9 22~28℃變溫真菌生長(zhǎng)曲線Fig.9 Growth curve of two fungi at variable temperature ranging from 22℃ to 28℃

        3 討論

        3.1 不同菌株在相同溫度環(huán)境下生長(zhǎng)特性分析

        對(duì)比圖8和圖9可知,在25℃恒溫環(huán)境培養(yǎng)下,青霉屬和枝孢屬兩株真菌都以一定的生長(zhǎng)速度增殖,且一周后生長(zhǎng)速度仍未出現(xiàn)放緩的趨勢(shì),菌落直徑與時(shí)間成線性關(guān)系.可見(jiàn),穩(wěn)定的溫度有利于真菌生長(zhǎng);在22~28℃變溫環(huán)境培養(yǎng)下,兩株優(yōu)勢(shì)菌屬的生長(zhǎng)速度變化率降低,生長(zhǎng)速度穩(wěn)定性也不如25℃恒溫環(huán)境下,青霉屬與枝孢屬的生長(zhǎng)都受到抑制.并且,在22~28℃變溫下青霉屬的孢子更易擴(kuò)散(圖7A),推斷這與溫度變化有關(guān).

        3.2 相同菌株在不同溫度環(huán)境下生長(zhǎng)特性分析

        由圖8和圖9可知,在恒溫環(huán)境下,青霉屬快速生長(zhǎng);但在變溫環(huán)境下,經(jīng)過(guò)96h后,青霉屬的生長(zhǎng)明顯受到抑制,108h后青霉屬菌落不再變化.在恒溫環(huán)境下,枝孢屬的生長(zhǎng)速度要快于變溫環(huán)境.在變溫環(huán)境下,經(jīng)過(guò)180h后,枝孢屬的生長(zhǎng)均有受到抑制的傾向.由此可見(jiàn),溫?zé)峥刂茖?duì)青霉屬的生長(zhǎng)具有明顯抑制作用,對(duì)枝孢屬也有此傾向.

        3.3 青霉屬和枝孢屬的菌落直徑變化分析

        由表1可知,在恒溫和變溫環(huán)境下,192h后青霉屬菌落直徑分別達(dá)到36mm和24mm,而枝孢屬菌落直徑只能達(dá)到21mm和16mm.由此可知,無(wú)論在何種環(huán)境下,真菌種類(lèi)特性的不同決定了青霉屬的生長(zhǎng)速度均快于枝孢屬,溫?zé)峥刂撇荒芨淖兙N這一特性.但對(duì)于同一菌株,無(wú)論是青霉屬還是枝孢屬,在變溫環(huán)境下菌落的增殖速率均要落后于恒溫環(huán)境,由此可見(jiàn),通過(guò)溫?zé)峥刂瓶梢砸种普婢鲩L(zhǎng).

        表1 不同環(huán)境下兩株真菌直徑變化(mm)Table 1 Change of two fungal diameter in different environment (mm)

        4 結(jié)論

        4.1 經(jīng)生理生化實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)鑒定,本研究中央空調(diào)系統(tǒng)過(guò)濾器表面真菌類(lèi)微生物優(yōu)勢(shì)菌屬為青霉屬(Penicillium spp.)和枝孢屬(Cladosporium spp.),菌落數(shù)分別為600cfu/cm2和140cfu/cm2.

        4.2 無(wú)論恒溫25℃或變溫22~28℃條件,青霉屬生長(zhǎng)速度都要快于枝孢屬,這是溫?zé)峥刂扑荒芨淖兊?

        4.3 通過(guò)恒溫和變溫實(shí)驗(yàn)對(duì)比發(fā)現(xiàn),無(wú)論是青霉屬還是枝孢屬,在變溫環(huán)境下菌落的生長(zhǎng)速度變化率均要落后于恒溫環(huán)境,這一作用對(duì)青霉屬的生長(zhǎng)更加明顯,對(duì)枝孢屬也有此傾向,可以通過(guò)溫控抑制某些菌屬的真菌繁殖.

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        致謝:研究得到大連理工大學(xué)生命科學(xué)與技術(shù)學(xué)院包永明教授、袁文杰副教授大力支持,在此向所有相關(guān)研究人員表示感謝.

        Identification and thermal control on fungi from the filter of central air conditioning system.

        FU Bai-lin, Lü Yang*(Laboratory of Building Environment and New Energy Resource, Department of Building Engineering, Dalian University of Technology, Dalian 116023, China). China Environmental Science, 2014,34(11):2917~2921

        To explore the propagative and diffused mechanism of fungi in central air conditioning system and control air microorganism contamination problem, growth rhythms of fungal colony and mycelium were researched in different thermal environments by thermal control. Fungi separated from the filter surface of the central air conditioning system in a gym were chosen as the research objects. By isolation, physiology and biochemistry experiments, and molecular biological identification, dominant fungi on the filter of central air conditioning system were confirmed. In order to conduct thermal control experiment of separated dominant fungi, growth rhythms of fungal colony and mycelium were observed at temperature of 25℃ and 22~28℃, respectively. As a result, it was shown that the dominant fungi were Penicillium spp. and Cladosporium spp., colonies were 600 and 140 cfu/cm2respectively. It was indicated that regardless of constant or variable temperature conditions, the reproduction rate of Penicillium spp. was faster than Cladosporium spp., with a liner correlation between colony diameter and time. Penicillium spp. and Cladosporium spp were obviously restrained by temperature change control. Thermal control was feasible for restraining fungal growth in air conditioning system.

        central air conditioning system;filter;fungi;isolation and identification;thermal control

        X172

        A

        1000-6923(2014)11-2917-05

        付柏淋(1988-),男,遼寧大連人,大連理工大學(xué)碩士研究生,主要從事室內(nèi)空氣品質(zhì)研究.

        2014-02-17

        國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(51308088);高等學(xué)校博士點(diǎn)專(zhuān)項(xiàng)基金(20120041120003);北京市重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室研究基金(NR2013K05);大連理工大學(xué)基本科研業(yè)務(wù)費(fèi)專(zhuān)項(xiàng)(DUT14QY24).

        * 責(zé)任作者, 副教授, lvyang@dlut.edu.cn

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