許真玉

（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品審評(píng)中心,北京 100038）

依達(dá)拉奉注射液雜質(zhì)譜分析

許真玉

（國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理總局藥品審評(píng)中心,北京 100038）

雜質(zhì)控制是注射劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一，而雜質(zhì)譜分析是建立合理可行的雜質(zhì)檢測(cè)方法的基礎(chǔ)。本文結(jié)合依達(dá)拉奉制備方法、穩(wěn)定性特征、依達(dá)拉奉注射液處方分析、原研廠產(chǎn)品介紹文件、國(guó)外藥典等對(duì)依達(dá)拉奉注射液的雜質(zhì)譜分析進(jìn)行討論，供相關(guān)研究者參考。

依達(dá)拉奉注射液；雜質(zhì)譜；分析

依達(dá)拉奉注射液是田邊三菱制藥株式會(huì)社開發(fā)的腦保護(hù)劑，具有自由基清除作用及過氧化反應(yīng)抑制作用，2001年4月在日本上市，規(guī)格為20 m L∶30 mg，商品名為“RADICUT”，適應(yīng)證為改善急性腦梗死所致的神經(jīng)癥狀、日常生活活動(dòng)能力和功能障礙，用法用量為每次30 mg，加入適量生理鹽水中稀釋后靜脈滴注，30分鐘內(nèi)滴完，每日2次，14日為一個(gè)療程，盡可能在發(fā)病后24小時(shí)內(nèi)開始給藥。

原研廠依達(dá)拉奉注射液尚未進(jìn)口我國(guó)，目前已有多家國(guó)產(chǎn)依達(dá)拉奉注射液上市，也有多家申報(bào)單位在進(jìn)行依達(dá)拉奉注射液的仿制申請(qǐng)。作為注射液，有關(guān)物質(zhì)檢查是非常重要的一項(xiàng)質(zhì)量控制指標(biāo)，而雜質(zhì)譜分析是有關(guān)物質(zhì)檢查方法學(xué)研究和檢測(cè)方法建立的基礎(chǔ)。本文結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)和日常審評(píng)工作經(jīng)驗(yàn)，對(duì)依達(dá)拉奉注射液的雜質(zhì)譜分析進(jìn)行討論。

1 藥物制劑雜質(zhì)來源

通常情況下，作為藥物制劑，其雜質(zhì)來源主要包括兩方面。

第一是藥物制劑各組成成分引入的雜質(zhì)，包括原料藥、輔料等引入的雜質(zhì)?？紤]到原料藥是組成制劑的活性成分，而輔料通常為穩(wěn)定性相對(duì)較好的惰性物質(zhì)，所以需要重點(diǎn)關(guān)注原料藥可能引入的雜質(zhì)，可以結(jié)合原料藥雜質(zhì)譜分析進(jìn)行這方面雜質(zhì)情況的分析。

對(duì)于原料藥引入的雜質(zhì)，在進(jìn)行制劑質(zhì)量控制時(shí)，可以有兩種控制方式。一種是在原料藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)行嚴(yán)格控制，通過嚴(yán)格保證原料藥的質(zhì)量來保證制劑的質(zhì)量，當(dāng)然，這種控制方式的前提條件是這些雜質(zhì)在制劑生產(chǎn)、貯藏過程中不發(fā)生變化。另一種方式是一并在制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)行控制，這種方式更適用于原料藥雜質(zhì)控制不夠完善的情況。

第二是藥物制劑在生產(chǎn)和貯藏過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)，包括各種降解雜質(zhì)、原輔料相互作用產(chǎn)生的雜質(zhì)等。這類雜質(zhì)是制劑雜質(zhì)研究和控制的重點(diǎn)，可以結(jié)合原料藥的結(jié)構(gòu)特點(diǎn)和降解途徑、原輔料相容性研究情況、制劑處方工藝情況、制劑包裝和貯藏情況、強(qiáng)制破壞試驗(yàn)情況、對(duì)比研究情況、相關(guān)文獻(xiàn)資料等，研究分析在制劑生產(chǎn)和貯藏過程中可能生產(chǎn)的雜質(zhì)。通常這類雜質(zhì)需要在制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)行有效的控制。

2 依達(dá)拉奉注射液雜質(zhì)譜分析

如上所述，依達(dá)拉奉注射液雜質(zhì)的主要來源，包括原料藥依達(dá)拉奉引入的雜質(zhì)以及在依達(dá)拉奉注射液生產(chǎn)和貯藏過程中產(chǎn)生的雜質(zhì)，下面將分別從這兩個(gè)方面開展討論。

2.1 原料藥依達(dá)拉奉引入的雜質(zhì)

對(duì)于原料藥依達(dá)拉奉引入的雜質(zhì)，可以結(jié)合原料藥依達(dá)拉奉的雜質(zhì)譜進(jìn)行分析。通常原料藥本身的雜質(zhì)譜包括工藝雜質(zhì)和降解雜質(zhì)兩方面，考慮到依達(dá)拉奉原料藥在固體狀態(tài)下穩(wěn)定性較好，不容易產(chǎn)生降解雜質(zhì)[1]，本文將重點(diǎn)對(duì)其工藝雜質(zhì)進(jìn)行討論。

2.1.1 依達(dá)拉奉的制備方法依達(dá)拉奉的制備方法比較成熟，有很多相關(guān)的文獻(xiàn)報(bào)道[2-3]，最常見的制備方法是等摩爾的乙酰乙酸乙酯和苯肼反應(yīng)制得依達(dá)拉奉，反應(yīng)方程式如下：

圖1 依達(dá)拉奉反應(yīng)方程式

2.1.2 依達(dá)拉奉原料藥工藝雜質(zhì)分析根據(jù)上述依達(dá)拉奉制備方法，在依達(dá)拉奉原料藥中可能存在的工藝雜質(zhì)包括未反應(yīng)完全的起始原料乙酰乙酸乙酯和苯肼以及起始原料中含有的雜質(zhì)、反應(yīng)副產(chǎn)物二聚體等。其中，對(duì)于起始原料中含有的雜質(zhì)，可以通過進(jìn)一步追溯所使用的起始原料乙酰乙酸乙酯和苯肼的制備方法而進(jìn)行分析。乙酰乙酸乙酯可以采用雙乙烯酮與乙醇酯化法，或者乙酸乙酯與乙醇鈉Claisen縮合法制得粗品，通過減壓蒸餾得到成品[4]。苯肼通常以苯胺為起始原料，經(jīng)重氮化、還原、酸析成鹽、中和等反應(yīng)制得[5]。

2.1.3 依達(dá)拉奉原料藥引入雜質(zhì)的控制對(duì)于上述分析中提到的雜質(zhì)，二聚體雜質(zhì)在依達(dá)拉奉注射液的生產(chǎn)和貯藏過程中也會(huì)產(chǎn)生，需要在依達(dá)拉奉注射液中進(jìn)行研究和控制。苯肼屬于潛在遺傳毒性雜質(zhì)，為更好地保證依達(dá)拉奉注射液質(zhì)量，建議一并在依達(dá)拉奉注射液中進(jìn)行研究和控制，根據(jù)歐洲藥品管理局（EMA）指導(dǎo)原則[6]，每日攝入量應(yīng)低于1.5 μg，依達(dá)拉奉注射液的日劑量為60 mg，據(jù)此計(jì)算，建議將其控制在25 ppm以內(nèi)。未反應(yīng)完全的起始原料乙酰乙酸乙酯以及起始原料中含有的雜質(zhì)，建議在原料藥依達(dá)拉奉的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)中進(jìn)行控制。

2.2 依達(dá)拉奉注射液降解雜質(zhì)的分析

2.2.1 原料藥依達(dá)拉奉理化性質(zhì)的分析文獻(xiàn)報(bào)道，依達(dá)拉奉在固體狀態(tài)下穩(wěn)定性較好，田邊三菱制藥株式會(huì)社的依達(dá)拉奉注射液產(chǎn)品介紹（interview form，IF）文件顯示，依達(dá)拉奉無引濕性，在50℃高溫條件下放置3個(gè)月、在40℃/75%相對(duì)濕度的高濕條件下放置6個(gè)月、在1 000 lx的光照條件下放置4周、在室溫下長(zhǎng)期放置36個(gè)月，除顏色稍有變化外，性狀、熔點(diǎn)、純度、干燥失重、含量等基本無變化[1]。

但依達(dá)拉奉在水溶液狀態(tài)下穩(wěn)定性較差，易被氧化、對(duì)高熱不穩(wěn)定、在堿性條件下穩(wěn)定性差、在酸性條件下穩(wěn)定性較好[7-8]。

2.2.2 依達(dá)拉奉注射液處方分析田邊三菱制藥株式會(huì)社的依達(dá)拉奉注射液處方組成包括依達(dá)拉奉、亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸、氯化鈉、氫氧化鈉、磷酸、注射用水，同時(shí)進(jìn)行充氮處理[1]。在日本上市的大部分依達(dá)拉奉注射液仿制產(chǎn)品，其處方組成與原研產(chǎn)品基本一致。也有部分仿制產(chǎn)品的處方與原研產(chǎn)品不同，如處方組成為依達(dá)拉奉、亞硫酸氫鈉、枸櫞酸、氯化鈉、氫氧化鈉、磷酸、注射用水，同時(shí)進(jìn)行充氮處理[9]。

已上市的產(chǎn)品中，處方中大多添加了抗氧劑等穩(wěn)定劑，如亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸等，以保證依達(dá)拉奉注射液中主成分的穩(wěn)定性。

2.2.3 原研廠IF文件中的雜質(zhì)分析在田邊三菱制藥株式會(huì)社的依達(dá)拉奉注射液IF文件[1]中，較詳細(xì)地討論了產(chǎn)品中可能含有的雜質(zhì)，如表1所示。

表1 田邊三菱制藥株式會(huì)社依達(dá)拉奉注射液IF文件中的雜質(zhì)

根據(jù)表1雜質(zhì)結(jié)構(gòu)信息可知，化合物a為依達(dá)拉奉二聚體雜質(zhì)，降解物P1和降解物P3為依達(dá)拉奉與輔料發(fā)生相互作用而產(chǎn)生的雜質(zhì)，降解物P2為苯肼。

同時(shí)，原研廠IF文件中提供的穩(wěn)定性研究結(jié)果顯示，依達(dá)拉奉注射液采用無色玻璃安瓿包裝，在不同條件下放置時(shí)，雜質(zhì)有變化的趨勢(shì)。如25℃長(zhǎng)期放置穩(wěn)定性試驗(yàn)中，降解物P1由0時(shí)的0.04%～0.06%變?yōu)?.21%～0.25%（12個(gè)月）、0.25%～0.28%（36個(gè)月），但其他雜質(zhì)變化不明顯，大多由0.01%～0.04%變?yōu)?.06%～0.08% （36個(gè)月），均能夠維持在0.1%以下；在40℃/75%相對(duì)濕度條件下進(jìn)行的6個(gè)月加速穩(wěn)定性試驗(yàn)中，可以檢測(cè)到化合物a、降解物P1、降解物P2分別為0.23%、0.27%、0.05%；在影響因素試驗(yàn)中，在50℃放置3個(gè)月可以檢測(cè)到降解物P1、降解物P2分別為0.43%、0.09%，在2 000 lx/25℃放置4周，未觀察到變化。

以上信息顯示，化合物a和降解物P1是依達(dá)拉奉注射液中含有的主要雜質(zhì)，降解物P2為苯肼，屬于潛在遺傳毒性雜質(zhì)，也需要進(jìn)行研究和控制。

2.2.4 依達(dá)拉奉注射液日本藥典標(biāo)準(zhǔn)的分析在依達(dá)拉奉注射液日本藥典標(biāo)準(zhǔn)[10]中，采用兩套高效液相色譜法（HPLC）系統(tǒng)進(jìn)行有關(guān)物質(zhì)檢查。

系統(tǒng)一采用C18柱（5 μm，4.6 mm×15 cm），流動(dòng)相為水-甲醇-醋酸（100∶100∶1），紫外檢測(cè)器240 nm檢測(cè)，柱溫約40℃，調(diào)整流速使主成分依達(dá)拉奉保留時(shí)間為4 m in左右，色譜圖記錄時(shí)間為主成分峰保留時(shí)間的7倍，采用主成分自身對(duì)照法，檢出的雜質(zhì)不得大于0.2%。

系統(tǒng)二采用C18柱（5 μm，4.6 mm×15 cm），流動(dòng)相為稀醋酸（1→100）-甲醇（3∶1，氨水溶液調(diào)整pH值為5.5），紫外檢測(cè)器240 nm檢測(cè)，柱溫約40℃，調(diào)整流速使主成分依達(dá)拉奉保留時(shí)間為11 m in左右，色譜圖記錄時(shí)間為主成分峰保留時(shí)間的2.5倍，采用主成分自身對(duì)照法，相對(duì)保留時(shí)間0.3的雜質(zhì)不得大于0.4%，相對(duì)保留時(shí)間0.4的雜質(zhì)不得大于0.1%，其他雜質(zhì)不得過大于0.2%。

在依達(dá)拉奉注射液日本藥典標(biāo)準(zhǔn)中，對(duì)兩個(gè)特定雜質(zhì)進(jìn)行了單獨(dú)控制，由于僅提供了相對(duì)保留時(shí)間，目前還不能確定這兩個(gè)特定雜質(zhì)的種類。

2.2.5 依達(dá)拉奉注射液降解雜質(zhì)的控制綜合以上各方面信息，由于依達(dá)拉奉在水溶液狀態(tài)下穩(wěn)定性較差，需要在處方中添加抗氧劑等穩(wěn)定劑。在依達(dá)拉奉注射液的生產(chǎn)和貯藏過程中，可能產(chǎn)生二聚體等降解雜質(zhì)，同時(shí)依達(dá)拉奉可能與輔料亞硫酸氫鈉、鹽酸半胱氨酸等發(fā)生相互作用而產(chǎn)生雜質(zhì)。另外作為潛在遺傳毒性雜質(zhì)的苯肼，也需要進(jìn)行嚴(yán)格控制。

對(duì)于特定雜質(zhì)的研究和控制，通常建議采用外標(biāo)法進(jìn)行，雜質(zhì)對(duì)照品可以外購(gòu)，也可以自行制備。對(duì)于外購(gòu)的雜質(zhì)對(duì)照品，需要關(guān)注該對(duì)照品的用途、質(zhì)量控制情況，在有效期內(nèi)使用。對(duì)于自行制備的雜質(zhì)對(duì)照品，需要建立制備方法，并對(duì)制得的對(duì)照品進(jìn)行結(jié)構(gòu)確證研究、純度標(biāo)定研究，并建立質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)和有效期。

3 討論

以上結(jié)合依達(dá)拉奉制備方法、依達(dá)拉奉穩(wěn)定性特征、依達(dá)拉奉注射液處方、原研廠IF文件、國(guó)外藥典等對(duì)依達(dá)拉奉注射液的雜質(zhì)譜分析進(jìn)行了討論。雜質(zhì)控制是注射劑質(zhì)量控制的重要指標(biāo)之一，而雜質(zhì)譜分析是建立合理可行的雜質(zhì)檢測(cè)方法的基礎(chǔ)。作為注射劑生產(chǎn)者，需要高度關(guān)注雜質(zhì)譜分析工作，不斷提升產(chǎn)品質(zhì)量控制水平。

[1]PMDA.ラジカット注30 mg.[EB/OL].http://www.info.pmda.go. jp/go/pack/1190401A1023_3_04.

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[9]PMDA.エダラボン點(diǎn)滴靜注液30 mg「ケミファ」.[EB/OL]. http：//www.info.pmda.go.jp/go/pack/1190401A1171_1_02.

[10]Supplement I，JP XVI.Edaravone Injection[S].2011：2401-2402.

Analysis on Impurity Profile of Edaravone Injection

Xu Zhenyu（Center forDrug Evaluation of the State Food and Drug Administration，Beijing 100038，China）

Impurity control isone of the important itemsof quality control of injections，and impurity profile analysis is thebasis for theestablishmentof a reasonable and feasiblemethod for detection of impurities.In thisarticle，impurity profile analysis of edaravone injection was discussed based on the preparation technique，stability characteristics，and formulation analysisof edaravone injection，and referring to the research documentof the productand foreign pharmacopoeia，etc.

Edaravone Injection；Impurity Profile；Analysis

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.08.007

2014-04-21）

許真玉，女，博士。研究方向：藥物技術(shù)審評(píng)。E-mail：xuzhy@cde.org.cn