楊躍龍

（懷化市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南懷化 418000）

HPLC同時(shí)測(cè)定天麻片中羌活醇和異歐前胡素的含量

楊躍龍

（懷化市食品藥品檢驗(yàn)所，湖南懷化 418000）

目的：建立高效液相色譜法（HPLC）同時(shí)測(cè)定天麻片中羌活醇和異歐前胡素的含量。方法：色譜柱：Shimadzu C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm），流動(dòng)相：乙腈-水（44∶56），流速為1.0 mL/min，柱溫：30℃，檢測(cè)波長(zhǎng)：310 nm。結(jié)果：羌活醇和異歐前胡素進(jìn)樣濃度分別在2.4～120 μg/mL（r=0.999 9），1.21～60.5 μg/mL（r=0.999 9）范圍內(nèi)線(xiàn)性關(guān)系良好，平均加樣回收率分別為98.22%、97.82%（n=9）。結(jié)論：本法簡(jiǎn)便，準(zhǔn)確，重現(xiàn)性好，能排除其他成分的干擾，提供了更好的控制該藥質(zhì)量的方法。

高效液相色譜法；天麻片；羌活醇；異歐前胡素

WORDSHPLC；Rhizoma Gastrodiae Tablets；Notopterol；Isoimperatorin

天麻片是由羌活、天麻、獨(dú)活、杜仲等10味藥材提取制成的中藥制劑，具有祛風(fēng)除濕、舒筋通絡(luò)、活血止痛的功效，用于肢體拘攣、手足麻木、腰腿酸痛等癥[1-2]。羌活與天麻同為方中主藥，現(xiàn)行標(biāo)準(zhǔn)（部頒標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第四冊(cè)：WS3-B-0694-92）中已有關(guān)于天麻素含量測(cè)定的規(guī)定，但未規(guī)定對(duì)羌活的有效成分進(jìn)行測(cè)定。為有效控制本品的質(zhì)量，參照相關(guān)文獻(xiàn)[3-12]對(duì)方中羌活中的羌活醇和異歐前胡素同時(shí)進(jìn)行含量測(cè)定。

1 儀器與試藥

日本島津LC-20ATVP高效液相色譜儀（LC-20AT四元泵；SPD-M20A型二極管陣列檢測(cè)器；SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器，LCsolution色譜工作站）；CBL9960A超聲波清洗器（上?？茖?dǎo)超聲儀有限公司）；METTLER TOLEDO十萬(wàn)分之一電子分析天平（瑞士）。

羌活醇對(duì)照品（批號(hào)：110826-200818）、異歐前胡素對(duì)照品（批號(hào)：110827-200407），均購(gòu)自中國(guó)食品藥品檢定研究院；天麻片（懷化正好制藥有限公司，批號(hào)：140101，140102，140103；0.26 g/片）；乙腈為色譜純，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

Shimadzu C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-水（44∶56），流速：1.0 mL/min；柱溫：30℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：310 nm；進(jìn)樣量：20 μL。按羌活醇計(jì)算，理論板數(shù)均不低于5 000。

2.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱(chēng)取羌活醇對(duì)照品12.00 mg，異歐前胡素6.05 mg置同一100 mL量瓶中，加甲醇使溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為混合對(duì)照品儲(chǔ)備液。

2.3 供試品溶液制備

取本品20片，精密稱(chēng)定，研細(xì)，取2.6 g，精密稱(chēng)定，置錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱(chēng)定重量，超聲處理30 min，放冷，再稱(chēng)定重量，加甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，濾過(guò)，取濾液，即得。

2.4 線(xiàn)性關(guān)系考察

分別精密量取上述混合對(duì)照品儲(chǔ)備液1，5，10，20 mL置50 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻。分別吸取上述4種稀釋后的溶液及儲(chǔ)備液各20 μL注入液相色譜儀測(cè)定，按2.1項(xiàng)下色譜條件測(cè)定峰面積，以峰面積為縱座標(biāo)，以進(jìn)樣量為橫座標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)

2.5 陰性對(duì)照試驗(yàn)

取缺羌活的陰性制劑適量（約相當(dāng)于供試品的量），按供試品溶液制備方法制成陰性對(duì)照溶液。取對(duì)照品溶液、供試品溶液、陰性對(duì)照溶液各20 μL，按2.1項(xiàng)下的色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)定，記錄色譜圖。結(jié)果顯示，陰性對(duì)照溶液對(duì)測(cè)定結(jié)果無(wú)干擾，見(jiàn)圖1。

圖1 天麻片HPLC圖

2.6 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液20 μL，按2.1項(xiàng)下的色譜條件連續(xù)進(jìn)樣6次，結(jié)果羌活醇、異歐前胡素RSD分別為0.95%，0.86%，表明精密度良好。

2.7 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取供試品溶液20 μL，按2.1項(xiàng)下的色譜條件，于0，5，10，15，20，24 h進(jìn)樣，測(cè)定其峰面積積分值，羌活醇峰面積的RSD為0.71%；異歐前胡素峰面積的RSD為0.77%，結(jié)果表明供試品溶液在24 h內(nèi)是穩(wěn)定的。

2.8 重復(fù)性試驗(yàn)

取同一批樣品（批號(hào)：140101），按2.3項(xiàng)下的供試品溶液制備方法，平行制備6份，依法測(cè)定，羌活醇和異歐前胡素的總量為0.22 mg/片，RSD為0.92%，結(jié)果表明該方法重復(fù)性好。

2.9 加標(biāo)回收試驗(yàn)

精密稱(chēng)取本品1.3 g（批號(hào)：140101，含量：羌活醇0.15 mg/片；異歐前胡素0.07mg/片；平均片重：0.2610 g），共9份，置錐形瓶中，分別精密加入羌活醇與異歐前胡素混合對(duì)照品溶液（羌活醇0.15 mg/mL；異歐前胡素0.07mg/mL）4.0，4.0，4.0，5.0，5.0，5.0，6.0，6.0，6.0 mL，按供試品溶液制備方法制成加標(biāo)回收溶液，用0.45 μm微孔濾膜濾過(guò)，取濾液按2.1項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行含量測(cè)定并計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表2。

2.10 樣品的測(cè)定

取3批樣品，按2.3項(xiàng)下的供試品溶液制備方法制備，精密吸取20 μL，注入液相色譜儀測(cè)定，以外標(biāo)法計(jì)算樣品中羌活醇、異歐前胡素的含量。測(cè)定結(jié)果見(jiàn)表3。

表2 回收試驗(yàn)結(jié)果（n＝9）

表3 樣品含量測(cè)定結(jié)果表（n＝3）

3 討論

3.1 指標(biāo)性成分選擇

中成藥的化學(xué)成分極其復(fù)雜，而且在治療疾病中是靠多個(gè)活性成分相互作用才能起效，一個(gè)成分很難代表一味藥的效果。因此選擇盡可能多的成分來(lái)評(píng)價(jià)藥材質(zhì)量。這兩個(gè)成分是天麻片中羌活的主要有效成分[13]，測(cè)定其含量十分必要。

3.2 流動(dòng)相及檢測(cè)波長(zhǎng)相選擇

為盡可能在短時(shí)間內(nèi)獲得好的分離效果，使用了不同組成的流動(dòng)相（甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.05%冰醋酸），通過(guò)以上三種流動(dòng)相系統(tǒng)比較綜合考慮，最終確定水-乙腈為流動(dòng)相。經(jīng)紫外-可見(jiàn)光分光光度計(jì)掃描，羌活醇與異歐前胡素在310 nm都有較大的吸收。采用HPLC時(shí)，310 nm作為其檢測(cè)波長(zhǎng)，羌活醇與異歐前胡素在圖譜中能同時(shí)成為主要吸收峰，且其他物質(zhì)對(duì)羌活醇與異歐前胡素的測(cè)定沒(méi)有干擾。故選擇310 nm作為檢測(cè)波長(zhǎng)。

3.3 提取方法選擇

為能使被測(cè)化合物提取效果最佳，考察了提取溶劑（甲醇、乙醇、70%甲醇）、提取方法（超聲、回流）等影響因素，最后選擇甲醇超聲30 min。

3.4 含量測(cè)定方法選擇

考慮到羌活醇與異歐前胡素極性相差不大，可以采用恒定流動(dòng)相同時(shí)對(duì)羌活醇與異歐前胡素進(jìn)行分析。

[1]國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局.國(guó)家食品藥品監(jiān)督管理局標(biāo)準(zhǔn)（試行）YBZ10382006[S].2006-07-11.

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Simultaneous Determination of Contents of Notopterol and Isoimperatorin in Rhizoma Gastrodiae Tablets by HPLC

Yang Yuelong（Institute for Food and Drug Control of Huaihua City,Hunan Huaihua 418000，China）

Objective：To establish a HPLC method for the content determination of notopterol and isoimperatorin in rhizoma gastrodiae tablets.Methods：The column of Shimadzu C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）was used with acetonitrile-water（44∶56）as mobile phase,the flow rate was 1.0 mL/min,the column temperature was at 30℃and the detection wavelength was at 310 nm.Results：The calibration curves were linear within the range of 2.4～120 μg/mL（r=0.999 9）for notopterol and 1.21～60.5 μg/mL（r=0.999 9）for isoimperatorin.The average recovery was 98.22%and 97.82%（n=9）for notopterol and isoimperatorin respectively.Conclusion：The method is specific,accurate and reproducible,and can exclude the interference of other components.It can be used for the quality control of the product.

10.3969/j.issn.1672-5433.2014.07.006

2014-05-05）

楊躍龍，男，主管藥師。研究方向：藥品檢驗(yàn)及藥品質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。E-mail：307623361@qq.com