吳文輝，馮 健，耿媛媛，趙 玲，胡昌江*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 611930)

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十四個產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷含量測定

吳文輝1,2，馮 健2，耿媛媛1，趙 玲1，胡昌江1*

(1.成都中醫(yī)藥大學(xué)，四川 成都 610075；2.四川新綠色藥業(yè)科技發(fā)展股份有限公司，四川 成都 611930)

目的：比較14個產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷的含量。方法：采用高效液相色譜法(HPLC)，以Phenomenex C18柱( 250mm×4.6mm, 5μm) 為分析柱，流動相為乙腈-水(30∶70) ，檢測波長為270nm，流速為1.00mL/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量為10μL。結(jié)果：14個產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷含量范圍為1.871 6～11.422 2mg/g。結(jié)論：14個產(chǎn)地中僅有6個產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷含量符合《中國藥典》標(biāo)準(zhǔn)，合格率為42.9%。

淫羊藿；淫羊藿苷；藥物含量測定

淫羊藿為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens.Maxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。其為中醫(yī)臨床常用藥，具有補(bǔ)腎陽、強(qiáng)筋骨、祛風(fēng)濕的功效，主要用于腎陽虛衰、陽痿遺精、筋骨痿軟、風(fēng)濕痹痛、麻木拘攣的治療[1]。淫羊藿屬植物在中國有40余種，廣泛分布于除新疆、西藏、內(nèi)蒙古、河北、山東以外的各個省份，藥材主產(chǎn)區(qū)種類復(fù)雜[2]。中醫(yī)臨床使用過程中發(fā)現(xiàn)，在相同用量下，某些產(chǎn)地淫羊藿療效偏低，而某些產(chǎn)地淫羊藿療效甚好。故有必要對市面上不同產(chǎn)地的淫羊藿進(jìn)行對比，為其臨床合理用藥提供參考依據(jù)。

1 儀器與試藥

Agilengt 1200 型高效液相色譜儀；Agilengt1200 化學(xué)工作站；BP-211D 型電子天平( 德國Satorius ) ；KQ3200B 型超聲波清洗器(昆山市儀器有限公司)；BJA-500型高速多功能粉碎機(jī)(浙江愛雪廚房設(shè)備有限公司)。

淫羊藿苷對照品(批號為110737-200415，中國食品藥品檢定研究院) ；淫羊藿藥材購自成都荷花池中藥材市場，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院胡昌江教授鑒定為小檗科植物淫羊藿EpimediumbrevicornuMaxim.、箭葉淫羊藿Epimediumsagittatum(Sieb.et Zucc.)Maxim.、柔毛淫羊藿Epimediumpubescens.Maxim.或朝鮮淫羊藿EpimediumkoreanumNakai的干燥葉。乙腈( 色譜純，迪馬公司)，水為樂百氏純凈水，其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適應(yīng)性

色譜柱：Phenomenex C18柱(250mm×4.6mm,5μm)，流動相：乙腈-水(30∶70) ，檢測波長：270nm，流速：1.0mL/min，柱溫：30℃。在上述色譜條件下，淫羊藿苷和樣品中其他組分色譜峰可基線分離，淫羊藿苷與相鄰色譜峰的分離度 R > 1.50，按淫羊藿苷色譜峰計算，理論塔板數(shù)( N) >1 500[3-6]。對照品溶液和供試品溶液色譜見圖1。

圖1 淫羊藿HPLC色譜

2.2 供試品制備

取淫羊藿苷對照品適量，精密稱定，置于100mL棕色量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品溶液( 每1mL 含淫羊藿苷對照品0.106 4mg) 。取淫羊藿粉末(過三號篩)約0.2g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇20mL，稱定重量，超聲處理1h，再稱定重量，用稀乙醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm) 濾過，即為供試品[7-10]。

2.3 方法學(xué)考察

2.3.1 線性關(guān)系考察 按照上述色譜條件，配置不同濃度的淫羊藿苷對照品溶液，分別為21.28、42.56、63.84、85.12、106.40、127.68μg/mL，分別吸取10μL注入液相色譜儀，測定峰面積。以峰面積值(A)對進(jìn)樣量(C)進(jìn)行線性回歸，得標(biāo)準(zhǔn)曲線方程A=2 287.7X-8.533 3(r=0.999 9) 。結(jié)果表明，淫羊藿苷進(jìn)樣量在0. 212 8～1.276 8mg進(jìn)樣量范圍內(nèi)與峰面積積分呈良好的線性關(guān)系。

2.3.2 精密度試驗 精密吸取上述對照品溶液10μL，重復(fù)進(jìn)樣5次，結(jié)果表明淫羊藿苷的色譜峰峰面積RSD 為1.63%，表明儀器的精密度良好。

2.3.3 重現(xiàn)性試驗 取同一批樣品5份，分別按照供試品溶液制備方法制備，取供試品溶液進(jìn)樣10μL，測定峰面積，計算淫羊藿苷含量。結(jié)果測得淫羊藿苷含量RSD為1.02%，表明該方法重現(xiàn)性良好。

2.3.4 穩(wěn)定性試驗 取同一供試品溶液，分別于0、2、4、6、8h 進(jìn)樣10μL，測定峰面積，計算淫羊藿苷含量。結(jié)果測得淫羊藿苷含量RSD 為1.10%，表明供試品溶液在8h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.5 加樣回收率試驗 取9份已知淫羊藿苷含量的樣品(淫羊藿苷含量為5.388 9mg/g)，精密稱定，分為3組，每組3份，分別添加樣品淫羊藿苷含量50%、100%、150%的對照品溶液( 淫羊藿苷為0.112 5mg/mL的乙醇溶液)。按上述方法制備供試品溶液，進(jìn)樣10μL，測定峰面積，計算加樣回收率，結(jié)果見表1。

表1 淫羊藿苷加樣回收實驗結(jié)果 (n=6)

2.4 樣品含量測定

取14個產(chǎn)地淫羊藿樣品，按照上述方法制備供試品溶液，分別進(jìn)樣10μL，測定峰面積，每個產(chǎn)地測定平行2次，計算淫羊藿苷平均含量，結(jié)果見表2。

表2 淫羊藿14個產(chǎn)地中淫羊藿苷含量

3 討論

本實驗采用HPLC法測定了14個產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷的含量，結(jié)果表明該法精密度、重現(xiàn)性、穩(wěn)定性均較好。《中國藥典》2010版淫羊藿含量測定項下規(guī)定本品按干燥品計算，含淫羊藿苷(C33H40O15)不得少于0.50%[1]。但結(jié)果表明14 個產(chǎn)地中僅有6個產(chǎn)地淫羊藿符合《中國藥典》含量測定標(biāo)準(zhǔn)，合格率為42.9%。因此在臨床選用中藥時，為保證臨床效果，應(yīng)盡量選用道地藥材。

[1] 國家藥典委員會.中國藥典[M].一部.北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:306.

[2] 裴利寬,郭寶林.近10年淫羊藿藥材及飲片研究進(jìn)展[J].中國中藥,2007,32(6):466-471.

[3] 雷永濤,梁妍,郝小燕,等.不同產(chǎn)地淫羊藿中4種活性成分含量的高效液相色譜法測定[J]. 時珍國醫(yī)國藥,2013,24(6):1404-1405.

[4] 于宵,宋靜,熊志立,等.一測多評法測定淫羊藿中朝藿定A、朝藿定B、朝藿定C 及淫羊藿苷的含量[J].中國中藥雜志,2010,35(24):3310.

[5] 鄧曉君,曹晴,龍秀紅.不同品種淫羊藿的淫羊藿苷含量研究[J].廣東化工,2014,41(5):65-66.

[6] 李曉龍,劉虹宇.HPLC 同時測定21 種淫羊藿中朝藿定C 和淫羊藿苷的含量[J].藥物分析雜志,2011,31(5):931-934.

[7] 李玉山,鄔應(yīng)龍.川產(chǎn)淫羊藿屬植物中淫羊藿苷的提取分離工藝研究[J].食品科技,2008,33(11):206-208.

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[9] 朱升,歐海軍,趙淑兒,等.高效液相色譜法法測定不同產(chǎn)地淫羊藿中淫羊藿苷的含量[J].時珍國醫(yī)國藥,2008,9(19):2080-2081.

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

Determination of the Icariin in 14 Areas of the Epimedium

Wu Wenhui1,2,Feng Jian2,Geng Yuanyuan1,Zhao Ling1,Hu Changjiang1*

(1.Chengdu University of TCM,Chengdu 610075,China;2.Neo-Green Pharmaceutical Co.Ltd.,Chengdu 611930,China)

Objective:Comparison of the icariin in 14 areas of the Epimedium.Methods:Using high performance liquid chromatography (HPLC), the analytical columnPhenomenex C18column (250mm×4. 6mm, 5μm), mobile phase acetonitrile water (30∶70), the detection wavelength was 270nm; the flow rate was 1.0mL/min; column temperature is 30℃.Results:The content of icariin in 14 varieties of 1.871 6～11.422 2mg/g.Conclusion:Epimedium 14 origin in only 6 different regions with "standard" Chinese Pharmacopoeia 2010 edition content.

Epimedium; Icariin; Area

2014-05-21

國家中醫(yī)藥管理局行業(yè)專項(No. 20110700717)

吳文輝(1986-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)博士研究生，研究方向為中藥炮制與臨床。

胡昌江(1952-)，男，成都中醫(yī)藥大學(xué)教授，博士生導(dǎo)師。E-mail：hhccjj@hotmail.com。

R284.1

A

1673-2197(2014)18-0008-02