石驍昵，李 玲

(1.烏魯木齊市疾病預(yù)防控制中心，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆大學(xué)，新疆 烏魯木齊 830000)

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高效液相色譜法測(cè)定肉類(lèi)食品中常見(jiàn)合成著色劑檢測(cè)方法探討

石驍昵1，李 玲2

(1.烏魯木齊市疾病預(yù)防控制中心，新疆 烏魯木齊 830000；2.新疆大學(xué)，新疆 烏魯木齊 830000)

目的：通過(guò)高效液相色譜法對(duì)肉類(lèi)食品中五種常用的合成著色劑的檢測(cè)方法進(jìn)行研究并確定最佳洗脫條件。方法：以甲醇-0.02mol/L乙酸銨(pH=6)為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫；檢測(cè)條件：二極管陣列檢測(cè)器檢測(cè)檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃，檢測(cè)波長(zhǎng)為250nm，亮藍(lán)檢測(cè)波長(zhǎng)為310nm，將沉淀劑亞鐵氰化鉀和乙酸鋅引入到食物樣品中分析。結(jié)果：對(duì)肉類(lèi)食品中檸檬黃、莧菜紅、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)五種著色劑檢出限為2～12ng，回收率為89%～104%。結(jié)論：本研究實(shí)現(xiàn)了一站式快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)檢測(cè)肉類(lèi)食品樣品中常見(jiàn)的五種著色劑。

高效液相色譜法；前處理；合成著色劑；肉類(lèi)食品檢測(cè)

食品是人們生存的必需品。在社會(huì)高速發(fā)展的今天，隨著生活水平的逐步提高，人們對(duì)食品的要求也越來(lái)越高。除了最基本的衛(wèi)生要求外，更多地要求色、香、味和健康，而近年來(lái)的食品安全問(wèn)題也日益突出。食品添加劑是食品工業(yè)的重要組成部分，沒(méi)有食品添加劑就不會(huì)有現(xiàn)代的食品工業(yè)[1]。但并非所有的食物都能使用食品添加劑，當(dāng)前在市售的各類(lèi)食品中，濫用食品添加劑的違法行為有加大趨勢(shì)。本文通過(guò)對(duì)肉類(lèi)食品中五種常用的合成著色劑的檢測(cè)方法進(jìn)行評(píng)價(jià)，探索快速、準(zhǔn)確、經(jīng)濟(jì)檢測(cè)常用合成著色劑的優(yōu)化方法。

1 材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)儀器

液相色譜儀：島津10AVP液相色譜儀(二極管陣列檢測(cè)器，兩個(gè)高壓泵，柱溫箱，手動(dòng)進(jìn)樣器)；離心機(jī)：TGL-16G上海安亭科學(xué)儀器廠制造(最大轉(zhuǎn)速可達(dá)160 000r/min)；超聲機(jī)：奧特賽恩斯儀器有限公司；層析柱管：10cm×1cm玻璃管，有砂芯；色譜柱：Phenomenon Synergi 4u Hydro-RP 80A 150mm×4.6mm；恒溫干燥箱：MEMMERT UFE600；筒式微孔濾膜過(guò)濾器；天津市騰達(dá)過(guò)濾器件廠微孔濾膜；砂芯層析柱：定制，玻璃，直徑26mm，高200mm；實(shí)驗(yàn)室常用玻璃器皿等。

1.2 實(shí)驗(yàn)試劑

1.2.1 甲醇-甲酸洗脫液 甲醇與甲酸按6∶4(V/V)配制，混勻；乙醇-氨水洗脫液：用20% 氨水與乙醇按1∶9(V/V)配成；甲醇-氨水洗脫液：用20%氨水與甲醇按1∶9(V/V)配成；尿素-甲醇洗脫液：用4mol/L 尿素溶液與甲醇按1∶1(V/V)配成；10%亞鐵氰化鉀溶液：稱(chēng)取Fe(CN)·2H2O 114.6g溶于500mL水中；30%乙酸鋅溶液：稱(chēng)取Zn(SO4)2·7H2O 239.2g溶于500 mL水中。

1.2.2 標(biāo)準(zhǔn)品 檸檬黃、莧菜紅、靛藍(lán)、胭脂紅、日落黃、亮藍(lán)均為國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)中心購(gòu)買(mǎi)，濃度為1mg/mL。

1.2.3 聚酰胺固相萃取柱制備 稱(chēng)取10g聚酰胺粉，用少量超純水調(diào)勻成糊狀，倒入砂芯層析柱中，用超純水反復(fù)沖洗備用，臨用前用少量pH=4的水溶液(2mol/L鹽酸調(diào)pH值至4)活化。

1.3 色譜條件確立

流動(dòng)相：A：0.02mol/L乙酸銨(pH=6)，B：甲醇 ；室溫：25℃；流速：1mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：250nm。梯度洗脫條件見(jiàn)表1。

表1 流動(dòng)相梯度洗脫條件

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

方法一：稱(chēng)取粉碎樣品10g，取少量石油醚分三次沖洗樣品，揮干石油醚后，將樣品加至50mL離心管中再加入20mL乙醇-氨水溶液，超聲15min，5 000r/min離心10min取上清液。重復(fù)上述步驟，以10mL、10mL、10mL、20mL再提取四次，合并上清液。水浴揮干至10mL，用2mol/L鹽酸調(diào)pH=6，將2g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品中，攪拌片刻使著色劑充分吸附，用墊好濾紙的漏斗過(guò)濾，用60℃、pH=4的水洗滌3～5次，再用甲醇-甲酸溶液洗滌至流出液無(wú)色，接著用超純水洗滌至中性，上述洗滌過(guò)程中的流出液全部棄去。最后用乙醇-氨水溶液洗滌至流出液無(wú)色，收集所有解吸液，水浴蒸發(fā)至1～2mL，用超純水定容至10mL，取1mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測(cè)。

方法二：稱(chēng)取粉碎樣品10g，取少量石油醚分三次沖洗樣品，揮干石油醚后，將樣品加至50mL離心管中再加入20mL尿素-甲醇(1∶1)，超聲15min，5 000r/min離心10min取上清液。重復(fù)上述步驟，以20mL、10mL再提取兩次，合并上清液。水浴揮干至10mL，用2mol/L鹽酸酸調(diào)至pH=6，將2g聚酰胺粉加少許水調(diào)成粥狀，倒入樣品中，攪拌片刻使著色劑充分吸附，水浴至60℃，保溫30min，趁熱連同聚酰胺粉一起傾入層析柱中，用超純水洗滌保持流速20～30滴/min，洗至流出液為中性，且無(wú)色，棄去流出液。再用甲醇-氨水洗滌解析著色劑，流速控制在20～30滴/min，至流出液無(wú)色，收集流出液，60℃水浴蒸發(fā)至1～2mL，定容至10mL，取1 mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測(cè)。

方法三：用方法二處理的樣品處理至“合并上清液”處，水浴揮發(fā)至近干，加水定容至5mL，加入亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液各1mL進(jìn)行沉淀，定容至10mL,搖勻后放置過(guò)夜，取上清液1mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測(cè)。

方法四：用方法二處理的樣品處理至“合并上清液”處，水浴揮發(fā)至近干，加水定容至5mL，加入亞鐵氰化鉀溶液和乙酸鋅溶液各0.5mL進(jìn)行沉淀，定容至10mL,搖勻后放置過(guò)夜，取上清液1mL于離心管經(jīng)10 000r/min離心10min，待測(cè)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用 SPSS 17.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。

2 結(jié)果

表2 肉制品樣品四種前處理方法回收率比較

表3 肉制品前處理方法比較

注：“+”表示用，“-”表示未用。

表4 肉制品樣品的回收率及精密度

以市售某品牌的紅腸為樣品，準(zhǔn)確稱(chēng)取5.00g樣品。加入含量為0.50mg、1.00mg、2.00mg的標(biāo)準(zhǔn)溶液，按照固體類(lèi)食品方法四方法進(jìn)行樣品處理，測(cè)定。從表2和表3中可以看出：方法二、四的回收率高于方法一、三；從表4看出，肉制品中四種著色劑高、中、低三個(gè)濃度的平均回收率為90%～101%，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于5%。此方法顯示了良好的準(zhǔn)確度和精密度。

3 討論

從蘇丹紅事件、三聚氰胺事件到果脯話(huà)梅中二氧化硫超標(biāo)；從米粉中非法添加吊白塊超標(biāo)到皮革奶，這些非法或是過(guò)量添加的食品添加劑讓國(guó)人聞之色變，難道食品添加劑就是百害而無(wú)一利嗎？世界各國(guó)對(duì)食品添加劑的定義都有所不同，世界衛(wèi)生組織(WHO)和聯(lián)合國(guó)糧農(nóng)組織(FAO)聯(lián)合食品法規(guī)委員會(huì)對(duì)食品添加劑定義為：是有意識(shí)地一般以少量添加于食品，以改善食品的外觀、風(fēng)味、組織結(jié)構(gòu)或貯存性質(zhì)的非營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。在我國(guó)對(duì)其定義為：指為改善食品品質(zhì)和色、香、味以及為防腐、保鮮和加工工藝的需要而加入食品中的人工合成或者天然物質(zhì)[2]。目前，我國(guó)批準(zhǔn)使用的著色劑有21個(gè)品種，其中最常用的合成著色劑有胭脂紅、莧菜紅、檸檬黃、日落黃和亮藍(lán)等，使用范圍限于飲料、配制酒、糖果、糕點(diǎn)和青梅等，禁止用于肉類(lèi)、魚(yú)類(lèi)、水果及其制品(紅腸腸衣除外)[3]。肉類(lèi)食物是人們餐桌上最為常見(jiàn)的食物之一，因此肉類(lèi)食物的安全食用與人們的健康息息相關(guān)。

本研究方法二中甲醇氨水洗脫液的洗脫能力大于方法一中乙醇氨水洗脫液。由于運(yùn)用了甲醇氨水洗脫液提高了被測(cè)物的溶解性，提取劑甲醇里加尿素是為了防止合成著色劑與蛋白質(zhì)結(jié)合，一般用氨水提取不能真正完全提取實(shí)際樣品中的合成著色劑，因?yàn)楹铣芍珓┮子谂c蛋白質(zhì)結(jié)合，而尿素是一種蛋白質(zhì)變性劑，能破壞氫鍵，導(dǎo)致蛋白質(zhì)分子結(jié)構(gòu)松弛，使蛋白質(zhì)變性，蛋白質(zhì)和著色劑更容易分離,著色劑更容易與甲醇相結(jié)合，提高了提取率[4]，回收率也隨之提高。方法二優(yōu)于方法一。

研究顯示方法三、四基本相同，只是在沉淀劑的用量上有區(qū)別，方法四沉淀劑用量少，從回收率上看，明顯減少了對(duì)著色劑的包裹。方法四優(yōu)于方法三。方法四和方法二回收率相差不大，但方法四在樣品處理的時(shí)間上明顯優(yōu)于方法二。方法四在實(shí)驗(yàn)過(guò)稱(chēng)中減少了試劑對(duì)環(huán)境和檢測(cè)人員的危害，是較為優(yōu)化的檢測(cè)方法。

食品合成著色劑含量分析的特殊性和復(fù)雜性在于待測(cè)物的基質(zhì)復(fù)雜、干擾物質(zhì)多。由于樣品基質(zhì)和待測(cè)組分的不確定性，因此要求分析方法具有靈敏度高、選擇性或分離能力強(qiáng)和線(xiàn)性范圍寬等特點(diǎn)。所謂精密度是表示測(cè)定結(jié)果中隨機(jī)誤差的大小程度，指在一定條件下進(jìn)行多次測(cè)定時(shí)所得各次檢測(cè)結(jié)果彼此之間的符合程度，一般用相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD,%)表示。本研究中以市售某品牌的紅腸為樣品，結(jié)果顯示四種著色劑高、中、低三個(gè)濃度的平均回收率為90%～101%，說(shuō)明該方法顯示了較好的準(zhǔn)確度和精密度。

近年來(lái)，隨著食品安全問(wèn)題越來(lái)越被人們關(guān)注，能快速、便捷、準(zhǔn)確檢測(cè)食品，是相關(guān)實(shí)驗(yàn)室工作者的努力方向，本文通過(guò)對(duì)肉類(lèi)食品合成著色劑檢測(cè)方法的探討及優(yōu)化，以期進(jìn)一步運(yùn)用到其它食品上，為其檢測(cè)提供參考依據(jù)。

[1] 郭順堂,謝焱.食品加工業(yè)[M].北京：化學(xué)工業(yè)出版社,2004:356-360.

[2] 第八屆全國(guó)人大常委.中華人民共和國(guó)食品衛(wèi)生法[S].北京：法律出版社,2009:4-15.

[3] 中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部，中國(guó)國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)化委員會(huì).GB2760-2007 食品添加劑使用衛(wèi)生標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用指南[S].北京：中國(guó)標(biāo)準(zhǔn)出版社,2007.

[4] 沈堅(jiān),潘旭,王全林,等.魚(yú)子醬中的合成色素反相高效液相色譜法同時(shí)測(cè)定[J].分析測(cè)試學(xué)報(bào),2010,29(6):584-588.

(責(zé)任編輯：魏 曉)

2014-03-31

石驍昵(1977-)，女，新疆烏魯木齊市疾病預(yù)防控制中心主管檢驗(yàn)技師，研究方向?yàn)樾l(wèi)生理化檢驗(yàn)。

R284

A

1673-2197(2014)15-0028-02