河北省青縣中醫(yī)院 李水清 郝麗霞 王競(jìng)超（滄州 062650）

牙周炎是一種以炎癥細(xì)胞浸潤(rùn)牙齦組織致炎癥性水腫出血、組織液滲出、牙槽骨的吸收及組織進(jìn)行性破壞為主要臨床表現(xiàn)的慢性感染性疾病。此疾病不僅是成年人喪失牙齒的重要原因，而且近年發(fā)現(xiàn)牙周炎易引起內(nèi)分泌系統(tǒng)、心血管系統(tǒng)及呼吸系統(tǒng)等方面的疾病。［1－2］目前，該病的病因不明，缺乏有效的治療手段。本研究以滋陰降火的治療法則，創(chuàng)制滋陰降火方藥，在臨床上化裁治療慢性牙周炎，取得較好的臨床療效。為進(jìn)一步研究滋陰降火方藥治療慢性牙周炎的作用機(jī)制，本研究選取來(lái)我院就診的124例慢性牙周炎患者作為實(shí)驗(yàn)對(duì)象，觀察慢性牙周炎致炎因子IL－1β及MMP－2細(xì)胞信號(hào)傳導(dǎo)通路中關(guān)鍵分子表達(dá)的影響，探討該方療效的作用機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 濾紙簽 （whatman，German），IL－1β及MMP－2人酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)試劑盒（R＆D，USA）。

1.2 主要儀器設(shè)備 分光光度計(jì)，電子天平，酶聯(lián)免疫檢測(cè)儀:國(guó)營(yíng)華東電子管廠。

1.3 方法

1.3.1 研究對(duì)象:來(lái)我院口腔科門診就診的124例慢性牙周炎患者隨機(jī)分為對(duì)照組和治療組，每組62人，其中每位患者均以一顆單根牙作為研究對(duì)象，并且牙齦指數(shù) （GI）≥3，附著喪失 （AL）≥2 mm，無(wú)吸煙史，無(wú)系統(tǒng)性疾病，兩組患者在年齡、性別、病情、病程等方面的差異無(wú)顯著性 （P＞0.05），具有可比性。

1.3.2 齦溝液的采樣:在采樣前，每個(gè)收集齦溝液的濾紙簽均放入0.15 mL EP管中在電子分析天平上稱重、記錄、備用。然后去除齦溝液收集部位的菌斑和牙石，用棉簽擦拭后，氣槍將牙面吹干，1 min后將濾紙簽插入齦溝或牙周袋內(nèi)，遇阻力后停止插入，停留1 min，抽出濾紙簽，迅速放回EP管中;等待3 min后再將第二個(gè)紙簽以相同的方式放入同一位點(diǎn)。將兩個(gè)紙簽放入同一個(gè)EP管內(nèi)，后置入－70℃凍存。若濾紙簽被血液浸漬則棄置不用。

1.3.3 治療:牙周基礎(chǔ)治療，齦上潔治，齦下刮治和根面平整在局麻下根據(jù)具體病情使用Gracy刮治器分次完成，調(diào)整磨牙、去除明顯咬合創(chuàng)傷等。同時(shí)給予患者刷牙頻率、方法等方面的口腔衛(wèi)生指導(dǎo)。治療組在此基礎(chǔ)之上給予滋陰降火方藥口服，組成方藥:知母25 g，黃柏10 g，生地黃30 g，牡丹皮、澤瀉各10 g，茯苓7 g，山茱萸10 g，山藥15 g，黃芩10 g，金銀花、白茅根各15 g。兩組患者均以7 d為1個(gè)療程，3個(gè)療程后，再次對(duì)牙周炎組進(jìn)行兩組患者的齦溝液采樣和對(duì)比。

1.3.4 齦溝液中IL－1β及MMP－2水平檢測(cè):將250μL含1% 牛血清白蛋白的PBS緩沖液加入裝有樣本濾紙簽的EP管中，漩渦混勻器上震蕩EP管1 min，然后2 000 r離心5 min。取出紙簽，分離上清液分裝，分別用于檢測(cè)IL－1β及MMP－2。用ELISA雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法檢測(cè)上清液中IL－1β及MMP－2的水平，按說(shuō)明書進(jìn)行操作:（1）將100μL標(biāo)準(zhǔn)液或樣品置含有單克隆抗體的96板孔中，留第一孔為底物空白;（2）除底物空白孔外，其他各孔加入200μL McAb－乙酰膽堿脂酶;（3）加入200μL底物到各孔中，在18℃ ～25℃室溫下，350 rpm振蕩30 min;（4）震蕩孵育后，每孔均加50μL反應(yīng)停止液;（5）用450 nm波長(zhǎng)檢測(cè)吸光度值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)濃度作出標(biāo)準(zhǔn)曲線，并計(jì)算出樣品的相應(yīng)濃度。IL－1β及MMP－2人ELISA檢測(cè)試劑盒的靈敏度為1.5 pg/mL及12.5 ng/mL。細(xì)胞因子水平低于試劑盒最低限的位點(diǎn)計(jì)分為 “0”。

1.3.5 統(tǒng)計(jì)分析:采用SPSS13軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，慢性牙周炎患者兩組采集位點(diǎn)的臨床指標(biāo)檢測(cè)之間比較采用ANOVA檢驗(yàn)及兩兩比較。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

兩組患者齦溝液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量結(jié)果詳見表1。從表中可以看出，在治療前對(duì)照組與治療組中患者齦溝液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量差異無(wú)顯著性 （P＞0.05），治療后，治療組基礎(chǔ)治療和運(yùn)用滋陰降火方藥的治療后，治療組患者齦溝液中炎性因子IL－1β及MMP－2含量明顯下降，與對(duì)照組比差異具有非常顯著性 （P ＜0.01）。

表1 齦溝液中炎性因子IL－1、MMP－2含量（±s）

表1 齦溝液中炎性因子IL－1、MMP－2含量（±s）

注:與對(duì)照組治療后比較，△P＜0.01

組別 IL－1含量 （pg/mL）治療前 治療后MMP－2含量 （ng/mL）治療前 治療后對(duì)照組 103.4±22.1 95.2±15.9 212.4±12.1 145.2±17.2治療組 109.5±21.6 54.3±18.5△ 209.5±21.6 64.2±15.5△

3 結(jié)論

牙周炎是人類口腔兩大疾患之一，根據(jù)我國(guó)第三次全國(guó)口腔健康調(diào)查表明，目前我國(guó)大約有80%～97%的成年人患有不同程度的牙周疾病?，F(xiàn)代臨床醫(yī)學(xué)認(rèn)為牙周炎是細(xì)菌入侵襲和肌體防御功能之間動(dòng)態(tài)失衡所引起的慢性感染性疾病，臨床表現(xiàn)為牙齦腫痛、出血等常見的炎癥反應(yīng)。牙周炎致病因素除了牙周細(xì)菌感染外，肌體對(duì)牙周細(xì)菌的反應(yīng)，其中包括招募白細(xì)胞及隨后釋放的炎癥介質(zhì)和炎性因子等，均在牙周炎病程中起著關(guān)鍵性作用。［3］引起炎癥反應(yīng)的諸多細(xì)胞因子中，尤以IL－1β及MMP－2與牙周炎的發(fā)生發(fā)展有著密切的關(guān)系?，F(xiàn)有研究證明IL－1β是介導(dǎo)牙周炎癥過程的主要因子，IL－1β協(xié)同其他炎性因子直接抑制骨形成和金屬蛋白酶因子，促進(jìn)結(jié)締組織降解，抑制膠原纖維形成，延遲牙周病灶的愈合和患牙骨的形成。［4］在肌體內(nèi)，MMP家族具有促進(jìn)炎癥細(xì)胞遷移和降解基底膜的作用，其中MMP－2在牙周組織中膠原纖維的改建和牙根吸收等方面起極其重要的作用，Ejeil等證實(shí)MMP－2含量與牙周組織中膠原纖維的破壞程度呈正相關(guān)。［5］

在中醫(yī)學(xué)中，牙周炎屬“牙宣”范疇，《仁齋直指方》認(rèn)為:“齒者骨之所終，髓之所養(yǎng)，腎實(shí)主之;故腎衰則齒豁，精固則齒堅(jiān)，虛熱則齒動(dòng)?！逼渲姓f(shuō)明牙齒與腎之間的重要關(guān)系，腎虛則齒浮動(dòng)，虛火上炎則齒衄。本臨床研究，運(yùn)用滋陰降火方藥治療陰虛火旺而致牙周炎的患者，其研究結(jié)果表明滋陰降火方藥能夠有效地降低IL－1β及MMP－2的含量，從而抑制了炎癥的發(fā)生，控制了牙周炎的病程，從而說(shuō)明滋陰降火方藥抑制或消除IL－1β及MMP－2炎性因子是治療牙周炎疾病的機(jī)制之一。隨著對(duì)牙周炎發(fā)病機(jī)理的認(rèn)識(shí)，用中醫(yī)藥調(diào)節(jié)肌體的免疫機(jī)制治療牙周炎已成為目前研究的熱點(diǎn)，本研究從牙周炎病因病機(jī)的一方面為研究牙周炎機(jī)制提供了思路，但對(duì)于滋陰降火方藥治療牙周炎的效果及作用機(jī)制還有待進(jìn)一步的研究。

［1］ 曹采芳.牙周病學(xué)［M］.北京:人民衛(wèi)生出版社，2001.43－471

［2］ 李德懿.牙周病微生物學(xué)［M］.天津:天津科技翻譯公司，1994.98－1 231

［3］ 趙玉雪，趙麗娟.白細(xì)胞介素－1及其與牙周病的關(guān)系［J］.中國(guó)實(shí)用口腔科雜志，2012，5（6）379－381

［4］ 趙麗鳳，王新革，黃紀(jì)美.齦溝液中IL－1β的監(jiān)測(cè)和臨床意義［J］.求醫(yī)問藥 （下半月刊），2012，10（3）:269－270

［5］ 左渝陵，金釗，余劍鋒.益氣升陽(yáng)法對(duì)慢性牙周炎患者齦溝液IL－6和 MMP－2含量的影響 ［J］.現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué)，2012，39（21）:5 678－5 682

（2013－12－18 收稿）