李聰然，肖 漓，石炳毅，李州利，王 爽，詹勝利，蔡 明

解放軍第309醫(yī)院 全軍器官移植研究所，北京 100091

人類白細胞抗原-G5對移植腎功能延遲恢復的影響

李聰然，肖 漓，石炳毅，李州利，王 爽，詹勝利，蔡 明

解放軍第309醫(yī)院 全軍器官移植研究所，北京 100091

目的觀察和比較人類白細胞抗原-G5(human leukocyte antigen G5，HLA-G5)不同表達水平對腎移植術后移植腎功能延遲恢復(delayed graft function，DGF)的影響。方法應用酶聯(lián)免疫方法(ELISA)檢測HLA-G5在腎移植受者體內表達情況，分析對比HLA-G5不同表達組移植腎功能延遲恢復的發(fā)生率。結果腎移植術后HLA-G5高表達組無1例發(fā)生DGF，而低表達組發(fā)生率為57%(P＜0.05)。結論DGF的發(fā)生與HLA-G5表達水平密切相關，HLA-G5可能通過減少排斥反應減少DGF的發(fā)生。

人類白細胞抗原-G5；腎移植；移植腎功能延遲恢復

人類白細胞抗原-G(human leukocyte antigen G，HLA-G)具有多重免疫調節(jié)特性，在正常生理條件下，HLA-G表達于妊娠期的絨毛膜外的細胞滋養(yǎng)層，在誘導和維持母胎耐受機制中發(fā)揮十分重要的作用，另外在胸腺髓質間上皮細胞、眼球角膜部分等免疫赦免區(qū)也有表達[1-2]。在病理條件下，尤其在腫瘤、器官移植、病毒感染等情況下，HLA-G在血清、血漿中水平明顯升高[3-4]，其表現(xiàn)出的免疫調節(jié)作用也受到越來越多的關注。HLA-G初始轉錄物經(jīng)過選擇性剪接產(chǎn)生7種異構體，HLA-G5為其中的一種可溶性抗原，它能直接或間接調節(jié)機體免疫細胞的生物學功能。已有研究發(fā)現(xiàn)，HLA-G高表達受者急性排斥反應發(fā)生率低，且無慢性排斥反應發(fā)生[5-6]。在觀察和比較腎移植術后HLA-G5表達水平與移植腎功能時，我們發(fā)現(xiàn)HLA-G5表達水平與移植腎功能密切相關，而HLA-G5與移植腎功能延遲恢復少有報道。本文旨在回顧我院腎移植術后HLA-G5不同表達水平組間DGF發(fā)生率，研究HLA-G5在移植腎功能延遲恢復中的重要作用。

資料和方法

1 研究對象 2008年1月- 2010年12月本院腎移植受者40例，均為初次腎移植受者，且腎移植術后3個月內無明顯感染病灶。

2 實驗材料 單抗MEM-G/9mb(ALEXIS公司)；抗體Anti-β2-microglobulin HRP(Dako公司)；ELISA包被液為0.05 mol/L碳酸鹽緩沖液，洗滌液為磷酸鹽吐溫緩沖液(phosphate buffered saline with tween，PBST)，封閉液、抗體稀釋液為1%牛血清白蛋白的PBST，pH 5.0碳酸鹽-檸檬酸鹽緩沖液按常規(guī)方法配制，底物溶液為鄰苯二胺(OPD)-H2O2，終止液為2 mol/L的H2SO4。

3 血清樣品的ELISA檢測 使用EDTA抗凝采血管抽取外周血5 ml，血樣采集時間點為術前應用免疫誘導藥物前(d0)、術后1 d、4 d、7 d、14 d、28 d、56 d、84 d。常規(guī)MEM-G/9抗體包被，洗滌，加入被檢血清。設陰性和陽性對照。加入HRP標記的β2微球蛋白，顯色。在490 nm波長下測定各反應孔A值，依據(jù)標準曲線查相對含量。

4 分組 根據(jù)腎移植后84 d時HLA-G5值分組，＞300 ng/ml為高表達組，＜100 ng/ml為低表達組，余為中表達組。根據(jù)HLA-G5不同表達水平組間分析DGF發(fā)生率的不同。

5 術后免疫抑制劑的應用 術后采用環(huán)孢素軟膠囊/他克莫司膠囊(FK506) +嗎替麥考酚酯膠囊+醋酸潑尼松片免疫誘導方案；術后免疫抑制藥物濃度的早期控制與調整的目標濃度：他克莫司組，術后1個月他克莫司血藥谷值濃度維持在10 ～ 15 ng/ml，術后2 ～ 3個月他克莫司血藥谷值濃度維持在8 ～12 ng/ml；環(huán)孢素軟膠囊組，術后1個月環(huán)孢素軟膠囊血藥谷值濃度維持在250 ～ 300 ng/ml，峰濃度1 000 ～ 1 200 ng/ml，術后2 ～ 3個月他克莫司血藥谷值濃度維持在200 ～ 250 ng/ml，峰濃度800 ～1 000 ng/ml。

6 DGF臨床表現(xiàn)與診斷 臨床表現(xiàn)以腎移植術后少尿為特征，移植腎超聲除外有血管及尿路并發(fā)癥引起的血肌酐值在腎移植術后1周內不能降至正常(＞400 μmol/L)，并呈進行性上升，而且依賴于透析治療過渡即可診斷。停止透析標準尿量≥2 000 ml/d，不透析狀態(tài)下連續(xù)監(jiān)測血肌酐值呈下降趨勢。

7 統(tǒng)計學分析 采用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件處理，計量資料以-±s表示。組間樣本采用均數(shù)t檢驗或方差分析，多組間的多個樣本均數(shù)比較采用Kruskal-Wills檢驗，雙變量相關關系分析采用Pearson χ2檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 ELISA檢測HLA-G5表達 腎移植后84 d HLA-G5＞300 ng/ml 9例(高表達組)，HLA-G5 100 ～ 300 ng/ml 24例(中表達組)，HLA-G5＜100 ng/ml 7例(低表達組)。其中高、低表達組的變化趨勢見圖1。

2 HLA-G不同表達組間DGF發(fā)生率 40例腎移植受者中，DGF 10例(25%)，其中9例HLA-G5高表達組無1例發(fā)生DGF，7例HLA-G5低表達組有4例發(fā)生DGF(57%)，24例HLA-G5中表達組有6例發(fā)生DGF(25%)，差異有統(tǒng)計學意義。見表1。

圖 1 腎移植術后受者血清ELISA檢測HLA-G5高低表達組表達趨勢Fig. 1 ELISA showing HLA-G5 expression in serum of renal transplantation recipients

討 論

DGF是同種異體腎移植術后的一種常見并發(fā)癥，在除外有血管及尿路并發(fā)癥引起的血肌酐值在腎移植術后1周內不能降至正常(＞400 μmol/L)，并呈進行性上升，而且依賴于透析治療過渡，對移植腎的短期和長期存活有著重要的影響，DGF的發(fā)生率通常在10% ～ 50%，DGF的發(fā)生使腎移植受者的管理更加復雜，與亞臨床排斥反應的診斷與鑒別診斷更加困難，使住院時間延長、住院費用增加和移植物存活率降低[7-9]。

影響移植腎功能恢復的因素較多，急性排斥反應、熱缺血、冷缺血時間延長、高齡供者、腦死亡供者、尸體供腎者供腎前血流動力學的穩(wěn)定性、受者的體質量指數(shù)、免疫抑制劑腎毒性均對DGF的發(fā)生有顯著影響[10-13]。本實驗結果顯示在全部40例腎移植受者中，DGF 10例，發(fā)生率25%，在腎移植術后HLA-G5不同表達組間DGF的發(fā)生率與HLA-G5表達水平密切相關。Crispim等[14]在研究HLA-G表達與腎移植術后排斥反應關系時發(fā)現(xiàn)，未發(fā)生急性排斥反應組的HLA-G5表達明顯高于發(fā)生排斥組(P＜0.000 1)。且相關研究發(fā)現(xiàn)HLA-G可能通過兩方面機制影響移植病程，一方面HLA-G可同時抑制自然殺傷細胞和CD8+T細胞介導的細胞毒性，另一方面，HLA-G可能抑制了CD4+T細胞的增殖反應，這兩方面機制顯示HLA-G對排斥反應的作用主要是影響移植排斥反應的主要效應細胞[15-17]。既往研究表明急性排斥反應是臨床最常見的排斥反應，是造成移植腎損傷的主要免疫因素，發(fā)生率20% ～ 40%。Moore和Qureshi等[18-19]研究發(fā)現(xiàn)急性排斥反應可導致DGF的發(fā)生以及延長DGF的恢復時間。我們研究結果發(fā)現(xiàn)HLA-G高表達組中急性排斥和DGF發(fā)生率為0，而HLA-G低表達組中急性排斥發(fā)生率為42.85%，DGF發(fā)生率為57.14%。急性排斥反應作為影響DGF發(fā)生的重要因素，HLA-G5可能通過減少急性排斥反應以減少DGF的發(fā)生。

表1 不同HLA-G5表達水平患者臨床資料比較Tab. 1 Clinical data about patients with different HLA-G5 expression levels

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Effect of HLA-G5 on delayed graft function of kidneys

LI Cong-ran, XIAO Li, SHI Bing-yi, LI Zhou-li, WANG Shuang, ZHAN Sheng-li, CAI Ming
Organ Transplantation Center, Chinese PLA 309 Hospital, Beijing 100091, China

CAI Ming． Email: caiming309@gmail．com

ObjectiveTo study the effect of HLA-G5 expression levels on delayed graft function (DGF) of kidneys． Methods Expression levels of HLA-G5 in kidney transplantation recipients were measured by ELISA． Effects of HLA-G5 expression levels on DGF of kidneys were comparatively analyzed． Results DGF did not occur in any kidney transplantation recipient with a high HLA-G5 expression level． However, the incidence of DGF was 57% in those with a low HLA-G5 expression level (P＜0．05)． Conclusion DGF is closely related with HLA-G5 expression level in kidney transplantation recipients． HLA-G5 can reduce the incidence of DGF by decreasing the reject reaction．

human leukocyte antigen G5; kidney transplantation; delayed graft function

R 692

A

2095-5227(2014)01-0046-03

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.01.015

時間：2013-11-19 09:17

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20131119.0917.001.html

2013-03-20

李聰然，男，主治醫(yī)師。研究方向：器官移植與移植免疫。Email: licongran711@gmail.com

蔡明。Email: caiming309@gmail.com