辛明蔚 劉雁峰 駱斌 武穎 江媚 孫天琳 蘇恒香

隨著社會進(jìn)步、生活水平提高，人口老齡化越來越嚴(yán)重，更年期綜合征的發(fā)病率呈逐年上升趨勢，嚴(yán)重影響了患者的生活質(zhì)量。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)一般認(rèn)為卵巢功能衰退、雌激素水平過度降低是更年期綜合征的發(fā)病機制。目前西醫(yī)多采用激素替代療法來防治更年期綜合征，但有一定的副作用和局限性［1-2］。中醫(yī)藥治療本病療效顯著，副作用小，中藥“寧更丹”秉承滋腎養(yǎng)心，交通心腎之法組方，在前期臨床研究中能改善患者五心煩熱、心煩不寧、心悸驚慌等癥狀，有較滿意的臨床療效［3］。本實驗用自然衰老的雌性大鼠為動物模型，觀察藥物干預(yù)后大鼠性激素水平的變化，以探討交通心腎法防治更年期綜合征的作用機理。

1 材料和方法

1.1 試驗藥物

實驗用中藥飲片購自北京同仁堂股份有限公司。寧更丹為北京中醫(yī)藥大學(xué)東直門醫(yī)院劉雁峰教授自擬方，組成為:枸杞子15 g、生地黃15 g、丹參15 g、白芍15 g、百合15 g、郁金12 g、合歡皮12 g、蓮子心6 g、鹽知母12 g、生龍骨30 g、生牡蠣30 g。在首都醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院中藥實驗室，水煎后濃縮成2.1 g/ml 的藥液，4℃冰箱儲存?zhèn)溆?。戊酸雌二醇片? mg/片，拜耳公司生產(chǎn)，批號:257A2。更年安，0.31 g/片，天津中新藥業(yè)樂仁堂生產(chǎn)，生產(chǎn)批號:D031192。

1.2 動物

健康雌性15月齡SD 大鼠，56 只，體重337～490 g，由北京斯貝福實驗動物中心提供。青年鼠:健康雌性3月齡SD 大鼠，14 只，體重228～261 g，由北京維通利華實驗動物技術(shù)有限公司提供。

1.3 動物模型

健康雌性3月齡SD 大鼠，連續(xù)5 天陰道細(xì)胞學(xué)涂片，選用有動情期者，雌性14～15月齡SD 大鼠56 只，常規(guī)飼養(yǎng)l 周，連續(xù)5 天陰道涂片，選用角化細(xì)胞指數(shù)(CI)低于50%者，斷尾取血，放免法測定血清雌二醇(estradiol，E2)、促卵泡刺激素(follicle stimulating hormone，F(xiàn)SH)、促黃體生成素(luteinizing hormone，LH)。

1.4 動物分組

實驗動物共分為5 組，每組14 只大鼠，分別為青年鼠(3月齡)，老齡鼠空白組(15月齡)，兩組老鼠連續(xù)每天灌胃蒸餾水3 ml;老齡鼠加中藥寧更丹治療組，連續(xù)每天按20.65 g/kg 灌胃“寧更丹”藥液;老齡鼠加中藥更年安對照組，連續(xù)每天按0.65 g/kg灌胃更年安藥液;老齡鼠加西藥戊酸雌二醇對照組，連續(xù)每天按0.12 mg/kg 灌胃戊酸雌二醇藥液;灌胃飼養(yǎng)共28 天。青年鼠14 只，老齡鼠每組14 只，后4 組根據(jù)激素水平測定值平均分配，使各組分值無顯著性差異。灌胃飼養(yǎng)過程中中藥治療組和中藥對照組分別死亡一只老鼠。

1.5 生化指標(biāo)的檢測

實驗前斷尾取血，實驗結(jié)束后斷頭取血，放射免疫法測定血清E2、FSH、LH。

1.6 統(tǒng)計學(xué)處理

實驗數(shù)據(jù)用SPSS l7.0 統(tǒng)計軟件包處理，樣品測定數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s)表示。以單因素方差進(jìn)行分析，LSD 比較兩組間的情況，所有檢驗結(jié)果以P＜0.05 作為評定差異有顯著性的標(biāo)準(zhǔn)。

2 結(jié)果

由表1可知，與空白組比較，寧更丹治療組E2結(jié)果明顯升高，且有顯著性差異(P＜0.05)，且與戊酸雌二醇組結(jié)果類似。更年安對照組E2 結(jié)果略有升高，但與空白組相比無顯著性差異。

與空白組比較，寧更丹治療組、戊酸雌二醇組、更年安對照組FSH 結(jié)果均有降低，且有顯著性差異(P＜0.05)，但是戊酸雌二醇組下降更明顯。寧更丹治療組和更年安對照組之間FSH 結(jié)果無顯著性差異。

五組間LH 結(jié)果無差異。

表1 用藥前后各組E2、FSH、LH 比較

3 討論

3.1 模型的選擇及評價

目前，部分實驗研究采用去勢大鼠模型，通過切除動物卵巢，人為制造一個雌激素突然降低的環(huán)境來模擬人類更年期發(fā)生過程，但孫靜汾等［4］采用15月齡大鼠與去勢模型相比，兩模型陰道脫落細(xì)胞涂片及血清性激素水平均有圍絕經(jīng)期改變，證明本模型可以達(dá)到去勢模型同樣的造模效果，所以本模型的建立是成功的，但去勢模型鼠沒有自然衰老過程，其他各個系統(tǒng)均為青年，與圍絕經(jīng)期機體老化有一定差距;另外，去勢模型鼠卵巢的徹底切除與圍絕經(jīng)期鼠卵巢功能的衰竭有著本質(zhì)的不同，本模型比去勢模型更接近事實本身，用此模型研究圍絕經(jīng)期綜合征更具有說服力。

3.2 交通心腎法治療更年期綜合征

中醫(yī)藥治療更年期綜合征有著獨特的療效和特色，任婕等［5］分析了2006年10月至2007年6月在全國7 家三級甲等醫(yī)院就診的1584例病例(其中圍絕經(jīng)期802例，絕經(jīng)后期782例)后認(rèn)為心腎不交證是更年期綜合征的常見證型之一，該病之病機與心腎相關(guān)。腎在下焦屬水，以上升為順;心在上焦屬火，以下降為和。心中之陽下降至腎，能溫養(yǎng)腎陽;腎中之陰上升至心，則能涵養(yǎng)心陰。在正常情況下，心火和腎水就是互相升降、協(xié)調(diào)，彼此交通，保持動態(tài)平衡。如腎陰虧虛，腎水不足，不能上濟(jì)于心，心火獨亢，心腎失濟(jì)，陰陽失衡則發(fā)為更年期綜合征。因此治療上應(yīng)著重滋腎寧心，“寧更丹”方中丹參、百合清心除煩，養(yǎng)血安神;合歡皮、郁金疏肝解郁，清心安神;生龍骨、生牡蠣潛陽補陰，重鎮(zhèn)安神;枸杞子、生地黃滋補肝腎之陰，白芍平抑肝陽，養(yǎng)血斂陰，蓮子心，《本經(jīng)逢原》述其“得水之精英，補中養(yǎng)神，益氣清心，固精止瀉，除崩帶赤白濁，能使心腎交而成既濟(jì)之妙”，《本草蒙筌》謂其:“味甘、澀，氣平、寒。無毒。利益十二經(jīng)脈血氣，安靖上下君相火邪。”所以本方用其交通心腎，滋腎寧心安神。諸藥合用能使腎水充，心神寧，故前期臨床研究顯示能有效緩解潮熱汗出、急躁易怒、頭痛頭暈、失眠多夢諸癥，臨床療效頗佳［3］。

3.3 植物雌激素的作用

植物中一類具有雌激素樣或抗雌激素作用的活性成分被稱為植物雌激素(phytoestrogen，PE)，其雜環(huán)多酚類結(jié)構(gòu)類似于內(nèi)源性雌激素，能夠與哺乳動物或人的雌激素受體(estrogen receptor，ER)結(jié)合，起到微弱的雌激素樣或抗雌激素樣活性效應(yīng)［6］。本方中枸杞子可通過調(diào)控雌激素的代謝，使雌激素經(jīng)C-2 羥基化與C-16α 羥基化作用分別代謝生成2-羥雌酮與16α-羥雌酮，通過調(diào)節(jié)2-羥雌酮與16α-羥雌酮的比例而發(fā)揮藥理效應(yīng)［7］;丹參主要活性成分為黃酮類、萜類和甾醇等，主要有效成分丹參酮可以使幼齡雌鼠子宮質(zhì)量明顯增加，成年雌鼠服用丹參酮后陰道細(xì)胞學(xué)檢查呈現(xiàn)動情期變化［8］。Fan 等［9］研究表明，丹參酮IIA 通過ER 亞基(ERα或ERβ)的介導(dǎo)，使得海拉細(xì)胞中雌激素應(yīng)答元件(estrogen response element，ERE)的熒光素酶活性增加，呈現(xiàn)出一定的雌激素樣活性。但是由于植物中化學(xué)成分比較復(fù)雜，發(fā)揮雌激素樣作用的活性物質(zhì)也不止一種，故中藥中的有效成分相互之間存在協(xié)同性和多靶向性［6］，故本方是否主要通過這兩味藥發(fā)揮類雌激素樣的作用尚需進(jìn)一步研究。

3.4 交通心腎法對模型大鼠性激素的調(diào)節(jié)

目前更年期綜合征的發(fā)病機制尚未完全明了，但是大量的臨床和實驗研究表明，更年期綜合征患者血清E2 水平低于更年期無癥狀者，而FSH 則明顯高于無癥狀者，說明雌激素降低是更年期綜合征的發(fā)病基礎(chǔ)。因此，觀察E2、FSH 含量的變化，在更年期綜合征的診斷和治療中，有著十分重要的意義。前期臨床研究結(jié)果顯示［3］，更年期患者的血清FSH、LH 水平較治療前下降，E2 水平較治療前升高，由此可見，改善患者的生殖內(nèi)分泌功能可能是“寧更丹”治療更年期綜合征的機制之一。

更年期婦女由于雌激素不足，對下丘腦—垂體不能進(jìn)行有效的負(fù)反饋，致使垂體分泌促性腺激素增加。垂體FSH 的釋放受卵巢激素的反饋抑制較LH 敏感，因此FSH 的變化比LH 更明顯。本實驗結(jié)果表明，給予老齡大鼠寧更丹治療后，與空白組比較，中藥治療組雌激素明顯升高，有顯著性差異(P＜0.05)，且與西藥對照組結(jié)果類似。與文獻(xiàn)報道一致［10］，當(dāng)植物雌激素使用足夠劑量時，可以產(chǎn)生與體內(nèi)17β-雌二醇相似的效應(yīng)。中藥對照組結(jié)果略有升高，但無顯著性差異。與空白組比較，中藥治療組、西藥對照組、中藥對照組FSH 均有降低，且有顯著性差異(P＜0.05)，但是西藥對照組下降更明顯，與中藥治療組和中藥對照組相比有顯著性差異(P＜0.05)，而中藥治療組和中藥對照組之間無顯著性差異。老齡空白組FSH 水平較實驗前升高，可能與其飼養(yǎng)過程中進(jìn)一步衰老有關(guān)。可以看出交通心腎中藥治療后可以升高老齡大鼠的E2 水平，降低FSH 水平，從而延緩老齡大鼠更年期的進(jìn)程，與本課題組前期臨床研究結(jié)果一致［3］，為交通心腎法治療更年期綜合征提供了實驗依據(jù)，同時也發(fā)現(xiàn)中藥更年安對照組在降低FSH 水平方面也有明顯效果，但是對E2 水平升高作用不明顯。

［1］楊淑臻.圍絕經(jīng)期綜合征激素替代療法的利與弊［J］.中國醫(yī)藥導(dǎo)報，2008，20(5):174-175.

［2］田秦杰.如何辯證看待絕經(jīng)婦女的激素替代療法［J］.中國中西醫(yī)結(jié)合志，2008，28(3):197-198.

［3］劉雁峰，何煥娣，王榮莉，等.滋腎寧心法治療絕經(jīng)綜合征臨床觀察［J］.北京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報，2010，33 (8):567-570，574.

［4］孫靜汾，趙燁，吳素慧，等.圍絕經(jīng)期綜合征實驗動物模型的比較分析［J］.山西醫(yī)科大學(xué)學(xué)報，2007，38(1):43-45.

［5］任婕，王天芳，李力.更年期綜合征絕經(jīng)前與絕經(jīng)后臨床常見中醫(yī)癥狀及體征的分布特點［J］.中華中醫(yī)藥雜志(原中國醫(yī)藥學(xué)報)，2010，25(8):1204.

［6］朱迪娜，王磊，王思彤.植物雌激素的研究進(jìn)展［J］.中草藥，2012，43(7):1422.

［7］Li G，Sepkovic D W，Bradlow H L，et al.Lycium barbarum inhibits growth of estrogen receptor positive human breast cancer cells by favorably altering estradiol metabolism ［J］.Nutr Cancer，2009，61(3):408-414.

［8］Kato S，Endoh H，Masuhiro Y，et al.Activation of the estrogen receptor through phosphorylation by mitogen-activated protein kinase［J］.Science，1995，270(5241):1491-1494.

［9］Fan G W，Gao X M，Wang H，et al.The anti-inflammatory activities of tanshinone IIA，an active component of TCM，are mediated by estrogen receptor activation and inhibition of iNOS［J］.J Steroid Biochem Mol Biol，2009，113(3-5):275-280.

［10］Miksicek R J.Estrogenic flavonoids:structural require-ments for biological activity［J］.Proc Soc Exp Biol Med，1995，208(1):44-50.