許文平，李來(lái)來(lái)，王艷艷，孟笑瑋，王 怡

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

通脈養(yǎng)心丸對(duì)異丙腎上腺素所致大鼠心肌肥厚的影響

許文平，李來(lái)來(lái)，王艷艷，孟笑瑋，王 怡

（天津中醫(yī)藥大學(xué)，天津 300193）

[目的]觀察通脈養(yǎng)心丸對(duì)異丙腎上腺素（ISO）所致大鼠心肌肥厚的影響。[方法]健康雄性Wistar大鼠隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組，心肌肥厚模型組、通脈養(yǎng)心丸2.0、1.0、0.5 g/kg組和倍他樂(lè)克組。ISO 5 mg/（kg·d）連續(xù)皮下注射7 d建立大鼠心肌肥厚模型。造模的第2天起灌胃給藥通脈養(yǎng)心丸2.1、1.0、0.5 g/（kg·d），連續(xù)給藥4周。超聲心動(dòng)檢測(cè)大鼠心臟功能和結(jié)構(gòu)的變化，測(cè)量大鼠心臟和左心室系數(shù)、血清丙二醛（MDA）及脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH－Px）活性來(lái)判斷通脈養(yǎng)心丸對(duì)ISO所致大鼠心肌肥厚的保護(hù)作用。[結(jié)果]模型組大鼠室間隔厚度（IVID）和左室內(nèi)徑（IVS）值均不同程度增大，模型組射血分?jǐn)?shù)（EF%）和短軸縮窄率（FS%）顯著降低，心臟和左心室系數(shù)顯著增加，血清SOD和GSH-Px的活性顯著降低，血清MDA和LPO含量顯著升高。通脈養(yǎng)心丸治療4周后，大鼠心臟EF%、FS%值和血清SOD活性不同程度升高，MDA和LPO含量不同程度降低，通脈養(yǎng)心丸2.0、1.0 g/kg不同程度升高GSH-Px活性。[結(jié)論]通脈養(yǎng)心丸對(duì)ISO誘導(dǎo)的大鼠心肌肥厚具有保護(hù)作用，其作用機(jī)制可能與提高大鼠的抗氧化能力有關(guān)，提高大鼠的抗氧化功能可能是通脈養(yǎng)心丸抗心肌肥厚的機(jī)制之一。

通脈養(yǎng)心丸；異丙腎上腺素；心肌肥厚；抗氧化作用

心肌肥厚是指心臟在長(zhǎng)期超負(fù)荷的情況下，心肌組織出現(xiàn)的代償性增大的病理變化[1]。心肌肥厚是心血管疾病的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，與冠心病、充血性心力衰竭等密切相關(guān)[2]。異丙腎上腺素（ISO）是非選擇性的β受體激動(dòng)劑，具有正性肌力作用，可以加快心率和加速傳導(dǎo)，增加心肌耗氧量、環(huán)磷酸腺苷（cAMP）生成和糖原合成，從而促進(jìn)心肌細(xì)胞總蛋白和非收縮蛋白合成，心肌細(xì)胞肥大[3]。研究報(bào)道：通脈養(yǎng)心丸具有抗心律失常作用[4]、抗心肌細(xì)胞缺氧損傷[5]和抗凋亡作用[6]。通脈養(yǎng)心丸能否通過(guò)提高機(jī)體的抗氧化能力起到抑制心肌肥厚的作用未見(jiàn)文獻(xiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)采用皮下注射ISO復(fù)制大鼠心肌肥厚模型，通過(guò)觀察大鼠心臟結(jié)構(gòu)和功能的變化、全心臟和左心室質(zhì)量及系數(shù)、血清丙二醛(MDA)及脂質(zhì)過(guò)氧化物（LPO）含量、超氧化物歧化酶（SOD）和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶（GSH－Px）活性，研究其抗心肌肥厚作用，為臨床用藥提供一定的理論參考。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)藥物及配制 通脈養(yǎng)心丸由天津中新藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司樂(lè)仁堂制藥廠提供，每10丸重1 g，批號(hào)：C107074，給藥劑量分別為2.0、1.0、0.5 g/kg，實(shí)驗(yàn)前稱取一定的通脈養(yǎng)心丸，用雙蒸水配制成200、100、50 g/L的藥液。陽(yáng)性對(duì)照藥倍他樂(lè)克，阿斯利康制藥有限公司生產(chǎn)，每片 25 mg，批號(hào)：1310106，藥液濃度為1 g/L，配制方法同上。

1.2 主要試劑與儀器 ISD（購(gòu)于Sigma公司，貨號(hào)I5627），SOD、MDA、GSH-Px檢測(cè)試劑盒均購(gòu)于南京建成生物工程研究所，過(guò)氧化脂質(zhì)（LPO）Elisa試劑盒（貨號(hào)：CSB－E13786r，購(gòu)于Cusabio公司），多功能酶標(biāo)儀（Enpire，美國(guó)PerkinElmer公司），超高分辨率小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像系統(tǒng)（Vevo2100，Visual Sonics公司）等。

1.3 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康Wistar雄性大鼠120只，體質(zhì)量（170±10）g，購(gòu)于北京華阜康生物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)：SCXK（京）2009-0004。飼養(yǎng)于天津生物醫(yī)學(xué)工程研究所普通實(shí)驗(yàn)室，環(huán)境設(shè)施符合《中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部實(shí)驗(yàn)動(dòng)物環(huán)境設(shè)施標(biāo)準(zhǔn)》二級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

1.4 實(shí)驗(yàn)方法

1.4.1 動(dòng)物分組與模型的建立 健康雄性Wistar大鼠126只，按隨機(jī)數(shù)字表隨機(jī)分為6組：空白對(duì)照組、心肌肥厚模型組、通脈養(yǎng)心丸2．0、1．0、0．5 g/kg劑量組和陽(yáng)性對(duì)照藥倍他樂(lè)克組。模型組和各給藥組頭頸部皮下注射ISO 5 mg/kg，每日1次，連續(xù)注射7 d，建立心肌肥厚模型?？瞻讓?duì)照組給予同等體積的生理鹽水。注射ISO的第2天，各給藥組開(kāi)始灌胃給藥，給藥體積為1 mL/100 g體質(zhì)量，空白對(duì)照組和模型組給予同等體積溶劑，每日1次，連續(xù)給藥4周。

1.4.2 超聲心動(dòng)圖檢測(cè) 實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)動(dòng)物采用超高分辨率小動(dòng)物超聲實(shí)時(shí)影像系統(tǒng)Vevo2100行超聲心動(dòng)圖檢測(cè)。動(dòng)物以水合氯醛（300 mg/kg）腹腔注射麻醉后，仰臥位固定，剔除胸前區(qū)毛，涂耦合劑。參照文獻(xiàn)方法[7-8]，選用9 MHz高頻矩陣探頭，探頭垂直于左胸壁，并與胸骨成10～30度夾角，顯示心臟沿二尖瓣口至心尖方向的左室長(zhǎng)軸像。將探頭轉(zhuǎn)動(dòng)，顯示垂直于左室長(zhǎng)軸的左室短軸像。在左室長(zhǎng)軸像引導(dǎo)下，左室內(nèi)徑最大處（即乳頭肌水平）顯示M型圖像，測(cè)量左室內(nèi)徑及室壁厚度，進(jìn)行左室功能分析。每項(xiàng)指標(biāo)均測(cè)量3個(gè)心動(dòng)周期，取平均值。心臟形態(tài)學(xué)指標(biāo)：舒張期末期室間隔厚度（IVS，d），收縮末期期室間隔厚度（IVS，s），舒張末期左室內(nèi)徑（LVID，d），收縮末期左室內(nèi)徑（LVIS，s），舒張末期左室后壁厚度（LVPW，d），收縮末期左室后壁厚度（LVPW，s）。心臟功能指標(biāo)：射血分?jǐn)?shù)（EF%），短軸縮窄率（FS%）等。

1.4.3 全心臟和左心室質(zhì)量及系數(shù)檢測(cè) 大鼠麻醉后分離出心臟，分別稱取全心質(zhì)量和左心室質(zhì)量，計(jì)算全心臟及左心室系數(shù)。心臟系數(shù)=全心質(zhì)量（g）/取材時(shí)體質(zhì)量（g），左心室系數(shù)數(shù)=左心室質(zhì)量（g）/體質(zhì)量（g）。

1.4.4 血清SOD、GSH-Px活性和MDA及LPO含量測(cè)定 大鼠麻醉后，腹主動(dòng)脈取血并分離上清液，嚴(yán)格按照試劑盒要求測(cè)定SOD、GSH-Px活性和MDA及LPO含量。

1.5 數(shù)據(jù)處理 采用SPSS18．5統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，正態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用單因素方差分析，偏態(tài)分布計(jì)量資料組間比較采用秩和檢驗(yàn)，P＜0．05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠心臟結(jié)構(gòu)和形態(tài)的影響與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠室間隔厚度（IVID）和左室內(nèi)徑（IVS）值均不同程度增大，EF%和FS%顯著降低（P＜0．05或P＜0．01）。與模型組比較，通脈養(yǎng)心丸各劑量組不同程度提高EF%值，其他指標(biāo)無(wú)顯著改善。

2.2 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠心臟和左心室系數(shù)的影響 與空白對(duì)照組比較，模型組大鼠的心臟和左心室系數(shù)顯著升高（P＜0．01），與模型組比較，通脈養(yǎng)心丸各給藥組心臟和左心室系數(shù)無(wú)明顯降低。見(jiàn)表3。

2.3 各組大鼠血清SOD、GSH-Px活性和MDA及LPO含量的比較 與空白對(duì)照組比較,模型組大鼠血清中SOD及GSH-Px活性顯著降低，MDA及LPO含量顯著升高（P＜0．01）。與模型組比較，通脈養(yǎng)心丸各劑量組均不同程度升高大鼠血清SOD的活性，降低MDA和LPO含量，通脈養(yǎng)心丸2．0、1．0 g/kg組GSH-Px不同程度升高活性（P＜0．05或P＜0．01）。見(jiàn)表4。

3 討論

表1 通脈養(yǎng)心丸對(duì)各組大鼠左室結(jié)構(gòu)和形態(tài)的影響（±s）Tab.1 Effects of Tongmai Yangxin pill on left ventricle structure and morphology of rats in each group（±s）

表1 通脈養(yǎng)心丸對(duì)各組大鼠左室結(jié)構(gòu)和形態(tài)的影響（±s）Tab.1 Effects of Tongmai Yangxin pill on left ventricle structure and morphology of rats in each group（±s）

注：與空白對(duì)照組相比，#P＜0．05；與模型組相比，*P＜0．05，**P＜0．01。

組別 n 劑量（g/kg） LVIDd（mm） LVIDs（mm） IVSd（mm） IVSs（mm） LVPWd（mm） LVPWs（mm）空白對(duì)照組 10 - 6．19±0．68 2．59±0．72 1．77±0．28 3．05±0．47 2．08±0．62 3．32±0．45模型組 10 - 6．54±0．97#3．58±1．18 2．05±0．25#3．12±0．43 1．96±0．37 3．00±0．54通脈養(yǎng)心丸 10 2．00 6．14±0．73 3．34±0．84 1．95±0．29 2．96±0．34 2．29±0．84 3．45±0．75通脈養(yǎng)心丸 10 1．00 6．54±0．70 3．54±0．69 1．87±0．25 3．05±0．49 2．15±0．69 3．18±0．40通脈養(yǎng)心丸 10 0．50 7．00±0．50 4．20±0．69 1．82±0．23* 2．87±0．42 1．85±0．27 2．79±0．40倍他樂(lè)克 10 0．01 6．24±0．48 3．70±0．51 1．86±0．24 2．60±0．35** 1．97±0．36 2．99±0．27

心肌肥大是心肌細(xì)胞從成熟的“收縮狀態(tài)”向“胚胎型合成狀態(tài)”轉(zhuǎn)化的一種現(xiàn)象，是多種心血管疾病的一種共同的病理生理變化，是心肌對(duì)各種刺激產(chǎn)生的一種適應(yīng)性反應(yīng)，其主要病理改變是心肌細(xì)胞表型變化，體積增大，心肌細(xì)胞蛋白合成增加，心肌細(xì)胞內(nèi)收縮蛋白類型發(fā)生改變，同時(shí)伴有或不伴間質(zhì)細(xì)胞增殖[9]。早期的心肌肥厚是機(jī)體的一種自我保護(hù)的代償性反應(yīng)，心肌應(yīng)激能力增強(qiáng)，但是長(zhǎng)期的應(yīng)激導(dǎo)致的失代償性心肌肥厚最終也導(dǎo)致心力衰竭甚至猝死[10]。心肌肥大已成為心血管事件的獨(dú)立危險(xiǎn)因素，如缺血性心臟病、心律失常和心源性猝死。

表2 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠左室功能的影響（±s）Tab.2 Effects of Tongmai Yangxin pill on left ventricle function of rats（±s）

表2 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠左室功能的影響（±s）Tab.2 Effects of Tongmai Yangxin pill on left ventricle function of rats（±s）

注：與空白對(duì)照組相比，#P＜0.05，##P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

組別 n 劑量（g/kg） EF（%） FS（%）空白對(duì)照組 10 - 86.10±7.80 56.31±12.86模型組 10 - 65.84±6.38##46.45±11.92#通脈養(yǎng)心丸 10 2.00 73.31±4.83* 43.10±10.16通脈養(yǎng)心丸 10 1.00 76.25±9.58* 45.44±09.85通脈養(yǎng)心丸 10 0.50 68.78±9.44 39.96±08.29倍他樂(lè)克 10 0.01 73.22±5.54** 39.54±07.34

表3 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠心臟和左心室系數(shù)的影響（±s）Tab.3 Effects of Tongmai Yangxin pill on heart and left ventricle coefficient of rats（±s）

表3 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠心臟和左心室系數(shù)的影響（±s）Tab.3 Effects of Tongmai Yangxin pill on heart and left ventricle coefficient of rats（±s）

注：與空白對(duì)照組相比，##P＜0.01。

組別 n 劑量（g/kg） 心臟系數(shù) 左心室系數(shù)空白對(duì)照組 10 - 0.283±0.015 0.224±0.011模型組 10 - 0.309±0.009##0.239±0.008##通脈養(yǎng)心丸 10 2.00 0.318±0.025 0.261±0.026通脈養(yǎng)心丸 10 1.00 0.300±0.015 0.241±0.015通脈養(yǎng)心丸 10 0.50 0.311±0.028 0.249±0.025倍他樂(lè)克 10 0.01 0.296±0.015 0.244±0.016

表4 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠血清SOD、GSH-Px活性和MDA及LPO含量的影響（±s）Tab.4 Effects of Tongmai Yangxin pill on serum SOD GSH-Px activity,MDA and LPO contents of rats（±s）

表4 通脈養(yǎng)心丸對(duì)大鼠血清SOD、GSH-Px活性和MDA及LPO含量的影響（±s）Tab.4 Effects of Tongmai Yangxin pill on serum SOD GSH-Px activity,MDA and LPO contents of rats（±s）

注：與空白對(duì)照組相比，##P＜0.01；與模型組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。

LPO（U/mL）空白對(duì)照組 10 - 324.29±44.19 7.79±3.87 341.67±97.22 0.74±0.19模型組 10 - 288.52±38.49##21.72±9.45##227.50±57.24##1.41±0.56##通脈養(yǎng)心丸 10 2.00 333.82±39.68** 5.62±2.81**333.21±131.83*0.92±0.31*通脈養(yǎng)心丸 10 1.00 330.14±42.81* 4.89±3.17**283.13±128.83 1.07±0.20通脈養(yǎng)心丸 10 0.50 318.67±30.57* 5.67±4.81**211.88±62.59 1.03±0.38倍他樂(lè)克 10 0.01 276.66±62.11 5.30±2.34**260.00±168.62 0.81±0.17**組別 n 劑量（g/kg）SOD（U/mL）MDA（uM/mL）GSH-Px（μmol/L）

心臟由冠狀動(dòng)脈供應(yīng)血液，冠脈細(xì)小分支穿入心肌組織內(nèi)，在心臟內(nèi)膜下層分支形成網(wǎng)狀，使得冠脈在心肌收縮時(shí)容易受到壓迫。皮下注射β受體激動(dòng)劑ISO后，可以使心肌收縮力增強(qiáng)，心率加快，cAMP的生成和糖原的合成增加，最終促進(jìn)心肌細(xì)胞總蛋白和非收縮蛋白合成，心肌細(xì)胞發(fā)生肥大[11]。

心肌肥厚的發(fā)生發(fā)展與氧化應(yīng)激有著密切的關(guān)系[12]，氧自由基（OFR）的大量生成是導(dǎo)致心肌肥厚的重要機(jī)制之一[13]。正常情況下，機(jī)體內(nèi)的氧自由基的產(chǎn)生和清除是動(dòng)態(tài)平衡的，當(dāng)生成酶系活性增強(qiáng)或消除酶系的活性降低，就會(huì)導(dǎo)致氧化應(yīng)激狀態(tài)，使得OFR的產(chǎn)生與清除失衡，大量OFR堆積，引起脂質(zhì)、蛋白質(zhì)和核酸的過(guò)氧化，細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)遭到破壞，蛋白質(zhì)降解，核酸主鏈斷裂、透明質(zhì)酸解聚、細(xì)胞崩解、細(xì)胞發(fā)生不可逆改變，導(dǎo)致心肌梗死、重構(gòu)，直至最后惡化為心力衰竭。因此，清除OFR的抗氧化治療成為抑制心肌肥厚的重要方法之一。

SOD、MDA含量的高低直接反應(yīng)體內(nèi)脂質(zhì)過(guò)氧化的強(qiáng)度和速率，一直作為自由基產(chǎn)生和脂質(zhì)過(guò)氧化損傷程度的重要指標(biāo)[14]。此外，GSH-Px活性[15]和LPO含量[16]可以反映機(jī)體自由基和脂質(zhì)氧化程度，亦是衡量機(jī)體抗氧化力的重要指標(biāo)。

本實(shí)驗(yàn)大鼠經(jīng)皮下注射ISO后，模型組大鼠室間隔厚度（IVID）和左室內(nèi)徑（IVS）值均不同程度增大，心臟和左心室系數(shù)顯著增加，表明異丙腎上腺素可以造成心臟體積增大；模型組EF%和FS%顯著降低，表明模型組大鼠左心室功能受到抑制；模型組大鼠血清SOD和GSH-Px的活性顯著降低，血清MDA和LPO含量顯著升高，提示氧化應(yīng)激與心肌肥厚的形成密切相關(guān)。通脈養(yǎng)心丸治療4周后，各劑量組大鼠心臟EF%和FS%值和血清SOD活性不同程度升高，血清MDA和LPO含量不同程度降低，通脈養(yǎng)心丸2.0、1.0g/kg不同程度升高GSH-Px活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，通脈養(yǎng)心丸具有清除氧自由基，提高心肌的抗氧化能力，從而改善心肌肥厚病理狀態(tài)，這也可能是其逆轉(zhuǎn)心肌重構(gòu)的機(jī)制之一。

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Effects of Tongmai Yangxin pill on myocardial hypertrophy caused by isopropylarterenol

XU Wen-ping,LI Lai-lai,WANG Yan-yan,MENG Xiao-wei,WANG Yi
（Tianjin University of Traditional Chinese Medicine,Tianjin 300193,China）

[Objective]To explore the effects of Tongmai Yangxin pills on myocardial hypertrophy caused by isopropylarterenol(ISO)in rats.[Methods]The myocardial hypertrophy was reproduced by hypodermic injection of ISO,5 mg/（kg·d）for 7 days at back skin in rats.Tongmai Yangxin pills 2.0,1.0,0.5 g/(kg·d)were administrated by gavaging from the second day for total 4 weeks.After the last administration，echocardiography was performed to detect the changes in cardiac structure and function in rats,calculate the quality and the indexes of whole heart and left ventricle,detect the superoxide dismutase(SOD)and glutathione peroxidase(GSH-Px)activity,malondialdehyde(MDA)and lipid peroxide(LPO)concentration in serum.[Results]In the model group the values of septal thickness(IVID)and left ventricular internal diameter(IVS)were increased in varying degrees,the ejection fraction (EF%)and minor narrowing rate(FS%) were significantly lower,left ventricular heart coefficient was significantly increased,serum SOD and GSH-Px activity were significantly reduced,the serum levels of MDA and LPO were significantly increased 4 weeks after treatment by Yongmai Yangxin pills.The value of FS%,EF%and SOD activity were increased in varying degrees,the MDA and LPO were reduced in varying degrees.Tongmai Yangxin pills at 2.0,1.0 g/kg could elevate GSH-Px activity in varying degrees.[Conclusion]Tongmai Yangxin pill has a protective effect against myocardial hypertrophy induced by ISO in rats through enhancing the anti-oxidative activity.

Tongmai Yangxin pill;isopropylarterenol;myocardial hypertrophy;anti-oxidation

R285.5

A

1672-1519（2014）09-0552-04

2014-03-28）

（本文編輯：馬 英，張震之）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.09.13

許文平（1988-），女，碩士研究生，從事中醫(yī)藥防治心血管疾病的藥理研究。

王 怡，E-mail:vip_wangyi@126.com。