劉為民

（海安縣中醫(yī)院，江蘇海安 226600）

抗炎合劑的定性定量方法研究

劉為民

（海安縣中醫(yī)院，江蘇海安 226600）

目的：建立抗炎合劑的定性定量測(cè)定方法。方法：采用薄層色譜法對(duì)抗炎合劑中的黃芩、連翹進(jìn)行定性鑒別，采用高效液相色譜法測(cè)定制劑中黃芩苷的含量。結(jié)果：薄層色譜斑點(diǎn)清晰，黃芩苷的含量鑒別方法專(zhuān)屬性強(qiáng)，黃芩苷在0.84～8.4μg線性關(guān)系良好（r=0.9996），加樣回收率為99.31%，RSD為0.31%（n=6）。結(jié)論：該方法可行，結(jié)果準(zhǔn)確，可有效控制抗炎合劑的質(zhì)量。

抗炎合劑 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn) 黃芩 連翹

抗炎合劑是本院研制的純中藥制劑，方由黃芩、連翹、銀花藤、皂角刺、蒲公英、野菊花、甘草組成，具有清熱涼血、消腫排毒作用，用于痔瘡、肛裂、肛竇炎、肛乳頭炎及婦科炎癥。多年臨床研究表明，抗炎合劑療效顯著，無(wú)明顯不良反應(yīng)。為了保證藥品質(zhì)量和療效，本研究采用薄層色譜法對(duì)抗炎合劑中的黃芩、連翹進(jìn)行定性鑒定，采用高效液相色譜法測(cè)定抗炎合劑中黃芩苷的含量，制訂了切實(shí)可行的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 儀器與試藥

硅膠G薄層板（青島海洋化工廠）；高效液相色譜儀；黃芩對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)研究所）；連翹對(duì)照藥材（中國(guó)藥品生物制品檢驗(yàn)研究所）；甲醇、乙腈為色譜純，其余試劑為分析純；抗炎合劑為本院制劑室制備。

2 方法與結(jié)果

2.1 薄層鑒別方法參考文獻(xiàn)[1]。

2.1.1 黃芩的薄層鑒別取本品20mL，蒸干，殘?jiān)右颐?0mL，冷浸4h，濾過(guò)，將濾液濃縮至干，殘?jiān)?mL氯仿溶解，作為供試品溶液。另取黃芩對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照品溶液。按處方量，取除黃芩外其余藥味按工藝要求制成缺黃芩的樣品，按供試品溶液的制備方法，制備陰性供試品溶液。按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各5μL，分別點(diǎn)于同一氧化鋁-CMC薄層板上，以石油醚-氯仿（1∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干。噴以碘化鉍鉀試劑顯色。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品不顯斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1-A。

2.1.2 連翹的薄層鑒別取本品20mL，蒸干，殘?jiān)靡颐?0mL超聲提取10min，乙醚揮散至干，殘?jiān)苡谝掖?.5mL中，作為供試品溶液。另取連翹對(duì)照藥材1g，同法制成對(duì)照藥材溶液。按處方量，取除連翹外其余藥味按工藝要求制成缺連翹的樣品，按供試品溶液的制備方法，制備陰性供試品溶液。按照薄層色譜法試驗(yàn)，吸取上述溶液各10μL，分別點(diǎn)于同一硅膠H薄層板上，以氯仿-甲醇（20∶1）為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，10%硫酸噴霧后，于110℃加熱10min。供試品色譜中，在與對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的斑點(diǎn)，陰性對(duì)照品不顯斑點(diǎn)，見(jiàn)圖1-B。

圖1 抗炎合劑中黃芩、連翹的薄層鑒別

2.2 含量測(cè)定

2.2.1 色譜條件色譜柱為Dikma Diamonsil C18（250mm×4.6mm，5μm）。流動(dòng)相：乙腈（A）-0.02mol/L、磷酸二氫鉀（B）作梯度洗脫——A：0～20min，25%；20～25min，50%；25～30min，25%。流速1.0mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)278nm；柱溫：室溫（25℃）。

2.2.2 樣品溶液的制備方法參考文獻(xiàn)[2]。對(duì)照品溶液的制備：稱(chēng)取黃芩苷對(duì)照品約10.01mg，精密稱(chēng)定，甲醇溶解并定容于25mL容量瓶中，即得黃芩對(duì)照品溶液。供試品溶液的制備：取抗炎合劑20mL，置三角燒瓶中，精密加入70%乙醇溶液50mL，回流提取1h，放冷，濾過(guò)，取濾液1mL，甲醇稀釋定容于5mL容量瓶。陰性對(duì)照溶液的制備：取除黃芩外的處方量藥材，按照制劑制備工藝同法制得陰性樣品，取此陰性樣品50mL，按供試品溶液方法制備，即得。

2.2.3 系統(tǒng)適用性試驗(yàn)在上述色譜條件下，分別吸取20μL對(duì)照品溶液、供試品溶液和陰性對(duì)照溶液依次進(jìn)樣。在供試品中黃芩苷成分得到較好分離，黃芩苷色譜峰的保留時(shí)間與對(duì)照品溶液中黃芩苷的保留時(shí)間一致，缺黃芩藥材的陰性對(duì)照溶液色譜圖中未出現(xiàn)黃芩苷色譜峰[3]，見(jiàn)圖2。

圖2 各樣品色譜峰

2.2.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制精密吸取對(duì)照品2、4、6、8、10、20μL進(jìn)樣，按以上色譜條件測(cè)定。以進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，峰面積為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程為y=2653.72x+0.28，r=0.9996。結(jié)果表明，黃芩苷在進(jìn)樣量為0.84～8.4μg時(shí)線性關(guān)系良好。

2.2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)取同一供試品溶液，在2、4、8、12、18、20、24h分別進(jìn)樣，黃芩苷的RSD為0.93%，說(shuō)明供試品在24h內(nèi)穩(wěn)定。

2.2.6 精密度試驗(yàn)精密吸取供試品10μL進(jìn)樣，連續(xù)進(jìn)樣6次，進(jìn)行測(cè)定。以峰面積計(jì)算黃芩苷的RSD為1.9%，結(jié)果表明精密度良好。

2.2.7 重復(fù)性試驗(yàn)按“2.2.2”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備同一批號(hào)樣品供試品溶液5份（n=5），按上述色譜條件，分別精密吸取20μL進(jìn)樣，平均峰面積為277221，RSD＝1.31%。表明重復(fù)性良好。

2.2.8 加樣回收試驗(yàn)取已知含量的供試品約5g，精密稱(chēng)定，共6份，分別置于具塞錐形瓶中，精密加入黃芩苷對(duì)照品溶液適量，依法測(cè)定。結(jié)果見(jiàn)表1。

表1 抗炎合劑黃芩苷加樣回收率測(cè)定

2.2.9 樣品含量測(cè)定按對(duì)照品方法，對(duì)抗炎合劑3個(gè)樣品進(jìn)行測(cè)定，并計(jì)算含量，結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 3個(gè)批號(hào)抗炎合劑中黃芩苷含量測(cè)定

3 討論

抗炎合劑方中黃芩性寒味苦，具清熱燥濕、瀉火解毒之效，為本方主要起效藥物，故以黃芩中黃芩苷的含量作為本制劑的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版規(guī)定，黃芩苷的含量不得低于9.0%，根據(jù)處方計(jì)算黃芩苷含量應(yīng)不得低于0.72%，經(jīng)測(cè)定三個(gè)樣品的含量分別為1.53%、1.56%、1.51%，均符合此要求，故黃芩苷的含量可作為本制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)控制。

經(jīng)多批次檢驗(yàn)，證明抗炎合劑質(zhì)量穩(wěn)定，本檢驗(yàn)法快速簡(jiǎn)便，適合醫(yī)院制劑生產(chǎn)。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中國(guó)藥典（一部）.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2010：282

[2]駱?lè)缴?舒肝排石膠囊的制備與質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn).時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥，2001，75（12）：1095

[3]苗仁華，許倩.HPLC法測(cè)定茵梔黃注射液中黃芩苷的含量.中國(guó)醫(yī)藥指南，2012，10（24）：447

編輯：吳寧

R289.5

A

1672-397X（2014）11-0056-02

劉為民（1962-），男，本科學(xué)歷，副主任中藥師，主要從事中藥制劑、藥品檢驗(yàn)工作。haianzdm@163.com

2014-04-10