高靜東 李湧健 張少朋

（蘇州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇蘇州 215000）

鴉膽子油胸腔內(nèi)灌注對惡性胸腔積液患者生活質(zhì)量及胸水DNA倍體的影響

高靜東 李湧健 張少朋

（蘇州市中醫(yī)醫(yī)院，江蘇蘇州 215000）

目的：觀察鴉膽子油胸腔內(nèi)灌注對惡性胸腔積液患者生活質(zhì)量及胸水DNA倍體的影響。方法：35例惡性胸腔積液患者，胸腔內(nèi)灌注鴉膽子油，觀察患者治療前后卡氏評分、血細(xì)胞指標(biāo)變化情況，并在治療前后抽取胸水進(jìn)行DNA倍體分析。結(jié)果：鴉膽子油治療后，患者卡氏評分較治療前明顯提高，白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板指標(biāo)較治療前無明顯差異。治療前29例患者DNA倍體分析為陽性。6例患者3次灌注治療后DNA倍體轉(zhuǎn)為陰性，胸水量極少拔引流管；15例患者5次灌注后DNA倍體轉(zhuǎn)為陰性但積液量仍較多，再灌注鴉膽子油，直至24h胸水量極少時拔管。結(jié)論：鴉膽子油治療惡性胸腔積液療效顯著，毒副作用低，能有效控制惡性胸腔積液，患者易于接受。臨床可根據(jù)胸水中非整體細(xì)胞所占的比率變化來評價療效，并決定繼續(xù)使用原藥物或更換藥物。

惡性胸腔積液 鴉膽子油 DNA 倍體分析

近年來，我們采用胸腔內(nèi)注入鴉膽子油的方法治療惡性胸腔積液患者35例，獲得較好的療效，現(xiàn)報道如下。

1 臨床資料

35例均為2011年1月至2013年7月本院收治的惡性胸腔積液患者。其中男24例，女11例；年齡最大86歲，最小33歲，平均年齡（62.40±13.05）歲；肺癌21例，肝癌2例，卵巢癌3例，軟組織肉瘤3例，腮腺癌1例，結(jié)腸癌3例，宮頸癌1例，胃腸間質(zhì)瘤1例。

2 治療方法

采用廣州佛山特種醫(yī)用導(dǎo)管有限責(zé)任公司，CF-ABC 16Ga×20cm一次性使用中心靜脈導(dǎo)管，在胸部B超定位后，患者半臥位或坐位，取腋中線或腋后線7～9肋間為穿刺點。利多卡因局麻后，用中心靜脈導(dǎo)管針行胸腔穿刺，抽出液體后，送入導(dǎo)絲，拔出穿刺針，沿導(dǎo)絲將導(dǎo)管送入胸腔內(nèi)，留置導(dǎo)管總長度為10～15cm，拔出導(dǎo)絲后，如回抽有液體流出，用帶肝素帽封管，并用貼膜將導(dǎo)管固定于胸壁上，將導(dǎo)管與一次性引流袋連接，持續(xù)引流。胸片或B超示胸水排凈后，開始向胸腔內(nèi)注入鴉膽子油（沈陽藥大藥業(yè)有限責(zé)任公司，生產(chǎn)批號：Z21020639）50mL，利多卡因（徐州萊恩藥業(yè)有限公司，生產(chǎn)批號：H32023258）0.1g。灌注完閉后，封閉引流管。隔日1次，連續(xù)灌注5次。

3 療效觀察

3.1 生活質(zhì)量及安全性評價記錄患者治療前后卡氏評分，檢測治療前后白細(xì)胞（WBC）、血紅蛋白（HGB）和血小板（PLT）指標(biāo)。

3.2 DNA倍體分析每次鴉膽子油灌注前抽取胸腔積液30mL，進(jìn)行DNA倍體分析。采用美國BD Biosciences公司生產(chǎn)的BD FACSC anto TMⅡ型流式細(xì)胞儀以及DNA倍體分析配套試劑盒。取胸水30mL，予肝素抗凝后，分別裝入10mL試管中，離心5min之后棄上清液，再用生理鹽水洗滌，離心5min之后棄上清液。如沉淀中有紅細(xì)胞，則加入紅細(xì)胞溶解液1mL，混勻振蕩，避光，室溫靜置10min，離心5min之后棄上清液，再用PBS液洗滌1～2次，離心5min后棄上清液，制成單細(xì)胞懸液。取單細(xì)胞懸液1mL，加入DNA倍體分析試劑盒A液（細(xì)胞膜穿透液）250μL，室溫卵育10min，之后加入B液（RNA消化酶）200μL，室溫卵育10min，最后加入冷C液（PI染液）200μL，避光孵育10min，細(xì)胞懸液經(jīng)300目篩過濾后上機檢測。

3.3 統(tǒng)計學(xué)方法采用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，率的比較采用卡方檢驗，治療前后數(shù)據(jù)比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

3.4 治療結(jié)果

3.4.1 患者治療前后卡氏評分變化治療前患者卡氏評分（57.35±13.77）分，治療后卡氏評分（63.53±11.25）分，治療后明顯高于治療前（P＜0.05）。表明使用鴉膽子油胸腔灌注后，卡氏評分較前提高，患者生活質(zhì)量較前改善。

3.4.2 患者治療前后血常規(guī)指標(biāo)變化見表1。治療前后患者外周血白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板等指標(biāo)無明顯變化（P＞0.05）。說明鴉膽子油對骨髓抑制不明顯，對血常規(guī)影響較小，具有療效好、毒副作用小的優(yōu)點。

表1 患者治療前后外周血白細(xì)胞、血紅蛋白、血小板指標(biāo)變化

3.4.3 患者治療前后DNA倍體變化依據(jù)FCM腫瘤診斷的標(biāo)準(zhǔn)[1]，應(yīng)用ModFit LT 2.0軟件進(jìn)行分析，同時以正常人外周血淋巴細(xì)胞作為正常二倍體對照，被測標(biāo)本細(xì)胞DNA含量峰值與對照標(biāo)本細(xì)胞二倍體峰值之比為DNA指數(shù)（DI），二倍體DI為（1±0.1），DI不在（1±0.1）范圍者為異倍體。

35例患者初次DNA倍體分析陽性29例，陽性率82.8%。對胸水分析陽性的患者在每次灌注前留取胸水，進(jìn)行DNA倍體分析。6例患者3次灌注后DNA倍體轉(zhuǎn)為陰性，胸水量又極少拔引流管；15例患者5次灌注后DNA倍體轉(zhuǎn)為陰性但積液量仍較多，再灌注鴉膽子油，直至24h胸水量極少時拔管；8例患者5次灌注后DNA倍體仍為陽性給予更換藥物治療。治療過程DNA倍體分析結(jié)果變化見圖1、圖2。圖1為某患者治療前胸水DNA倍體分析，非整倍體細(xì)胞數(shù)為44.97%；圖2為同一患者5次灌注后DNA倍體分析，非整倍體細(xì)胞數(shù)下降為0.79%。

圖1 患者治療前胸水DNA倍體分析

圖2 患者治療后胸水DNA倍體分析

3.5 遠(yuǎn)期療效通過對29例初次DNA倍體分析陽性患者進(jìn)行隨訪，其中積液控制少于3個月者10例，占34.5%；3～6個月者15例，占51.7%；大于6個月者4例，占13.8%。

4 討論

惡性胸腔積液主要由于腫瘤細(xì)胞侵犯胸膜并在胸腔內(nèi)種植所致，是晚期腫瘤的常見并發(fā)癥之一，多增長迅速，壓迫縱隔、心臟及肺組織，從而影響呼吸及循環(huán)功能，影響患者的生存狀況并威脅患者的生命。

鴉膽子是一種傳統(tǒng)中藥，又名老鴉蛋、苦參子，味苦，性寒，有毒，有清熱解毒、截瘧治痢、腐蝕贅疣之功效。鴉膽子油是由鴉膽子脂肪酸中提取而成的新型抗癌藥物，具有抗腫瘤和提高機體免疫功能的作用[2]，對腫瘤細(xì)胞增殖周期具有直接殺傷和抑制作用，能抑制多種癌細(xì)胞的DNA合成。其在體內(nèi)可定向分布，對抗腫瘤藥物有增敏作用而且毒副作用低，對骨髓無抑制作用[3-5]。本研究結(jié)果表明，胸腔灌注鴉膽子油治療惡性胸腔積液，具有療效顯著、毒副作用低的優(yōu)點，能有效控制惡性胸腔積液，且無明顯胸痛，患者易于接受。其作用機制有可能在于藥物對腫瘤細(xì)胞的直接殺傷作用，鴉膽子油與癌細(xì)胞有較強親和力，能夠黏附在癌細(xì)胞周圍時間較長，從而充分發(fā)揮抗癌作用；灌注藥物后，抗癌藥物的有效成分能直接接觸胸膜組織，并產(chǎn)生化學(xué)性炎癥反應(yīng)，破壞細(xì)胞膜，使積液的產(chǎn)生減少或停止，促進(jìn)胸膜粘連、纖維化，從而封閉胸膜腔，達(dá)到控制胸水的目的。

人體正常細(xì)胞均為二倍體（23對染色體），而腫瘤細(xì)胞常常發(fā)生染色體突變，導(dǎo)致染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)目異常，在胸水中檢測到細(xì)胞DNA異倍體可高度提示為惡性腫瘤細(xì)胞，具有很高特異性。因此，DNA倍體分析在惡性胸腔積液方面有較好的臨床應(yīng)用價值[6]。目前在胸水治療中，診斷惡性胸腔積液常無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，多依據(jù)病史、胸水常規(guī)是否為滲出液和胸水中是否找到腫瘤細(xì)胞來判斷。而對胸水療效的評價，亦無統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)，更缺少對胸水中腫瘤細(xì)胞數(shù)量的變化分析。因此，我們借鑒流氏細(xì)胞檢測技術(shù)，用DNA倍體分析方法，間接判斷胸腔積液中腫瘤細(xì)胞數(shù)目，從而對惡性胸腔積液的治療效果進(jìn)行評價。我們研究發(fā)現(xiàn)，經(jīng)多次灌注鴉膽子油藥物，如果非整體倍細(xì)胞數(shù)仍較高，說明腫瘤細(xì)胞已產(chǎn)生耐藥，應(yīng)及時更換灌注藥物，如治療后倍體分析轉(zhuǎn)陰性，但積液量仍較多，說明仍有滲出，可繼續(xù)應(yīng)用灌注鴉膽子油，增加局部無菌性炎癥，減少滲出，促進(jìn)胸膜粘連、纖維化，減少或控制胸水。該方法操作簡便，靈敏性和特異性高，實用性強，值得進(jìn)一步研究。

[1]Klein FA，Herr HW，Sogani PC，et al.Detection and follow up 0f carcinoma of urinary bladder by flowcytometry.Cancer，1982，50：389

[2]朱春榮，王慶才，陳凱.鴉膽子油乳注射液治療中晚期惡性腫瘤79例.江蘇中醫(yī)藥，2002，23（11）：30

[3]韓芍亭.新編抗腫瘤藥物手冊.濟南：山東科學(xué)技術(shù)出版社，1995：240

[4]李佩文.中西醫(yī)臨床腫瘤學(xué).北京：中國中醫(yī)藥出版社，1996：111

[5]司品現(xiàn)，王君，張士霞，等.鴉膽子油乳對化療病人的骨髓保護(hù)作用.河南腫瘤雜志，1996，9（1）：71

[6]Saha I，Dey P，Vhora H，et al.Role of DNA Flow Cytometry And Image Cytometry In Effusion Fluid.Diag Cytopathol，2000，22（20）：81

編輯：韋杭吳寧

R730.6文獻(xiàn)識別碼A

1672-397X（2014）03-0032-02

高靜東（1975-），男，醫(yī)學(xué)博士，副主任中醫(yī)師，從事中西醫(yī)結(jié)合治療惡性腫瘤研究。gaojingdong10@163. com

2013-09-29