崔志鋼 CUI Zhi-gang；王琨 WANG Kun；

顧昌華 GU Chang-hua；徐代華 XU Dai-hua；陳濤 CHEN Tao

（銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院農(nóng)學(xué)院，銅仁 554300）

（Agronomy Institute of Tongren Polytechnic College，Tongren 554300，China）

0 引言

防治甘薯病毒病，提高甘薯產(chǎn)量和品質(zhì)的一條最有效途徑是利用莖尖分生組織培養(yǎng)繁育甘薯脫毒苗[1]。目前關(guān)于甘薯脫毒苗培養(yǎng)技術(shù)研究很多[3-8]，但現(xiàn)有的脫毒培養(yǎng)技術(shù)體系是否適合秦薯4號甘薯的脫毒繁育，一些技術(shù)參數(shù)是否需要進(jìn)一步優(yōu)化，以及脫毒苗保存、快繁過程中需要注意的一些關(guān)鍵環(huán)節(jié)都亟待闡明；本研究擬通過微莖尖剝離加變溫處理的措施，再通過優(yōu)化培養(yǎng)基中植物生長調(diào)節(jié)劑的配比，建立秦薯4號脫毒試管苗快繁的技術(shù)參數(shù)。

1 材料與方法

1.1 材料：秦薯4號種薯。

1.2 方法

1.2.1 莖尖分生組織剝離 選健壯無病，具有秦4典型特征的薯塊于溫室內(nèi)催芽，至幼苗長到30cm左右時，取頂端2cm左右的頂芽35個，剪去肉眼可見的葉片，用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇做20s表面消毒，然后以升汞浸泡6min，無菌水沖洗3～5次。在超凈工作臺上、利用體視顯微鏡切取帶有1-2個葉原基、長0.3～0.9mm的莖尖分生組織。

1.2.2 變溫處理誘導(dǎo)脫毒單株 剝離好的莖尖迅速轉(zhuǎn)入添加0.2mg/L6-BA的MS培養(yǎng)基上，遮光28℃預(yù)培養(yǎng)20h，然后轉(zhuǎn)入光照培養(yǎng)箱或人工氣候室，光照16h、溫度37℃和黑暗8h、溫度22℃交替變溫處理30-50d，待生長中心長第一真葉露出時，視培養(yǎng)基情況轉(zhuǎn)移繼代或直接轉(zhuǎn)入正常培養(yǎng)環(huán)境繼續(xù)培養(yǎng)。

1.2.3 脫毒種苗的快速繁殖 利用莖尖分生組織剝離與交替變溫處理得到的秦薯4號脫毒苗。脫毒苗在超凈臺上去葉，切割成1～2cm，帶1～2個腋芽的小段，按形態(tài)學(xué)方向分別接種于N6、B5、MB、MS基本培養(yǎng)基上，各100瓶，每瓶3段。15d后測量株高、單株葉片數(shù)、單株根數(shù)和根長和成苗率。

采用MS作為基本培養(yǎng)基，按表2中6-BA和NAA濃度添加到培養(yǎng)基中，每個處理100瓶，每瓶3株。所有培養(yǎng)基均加入30g/L蔗糖，6.0g/L瓊脂，pH值5.6～5.8。接種后，于25℃，2000～3000lx，光照16h/d條件下培養(yǎng)。15d后測量株高、單株葉片數(shù)、單株根數(shù)和根長，并記錄發(fā)根時間。

2 實驗結(jié)果及分析

2.1 脫毒單株的誘導(dǎo) 幼小的生長錐（微莖尖）接種入培養(yǎng)基后，能夠較快的適應(yīng)培養(yǎng)環(huán)境。在接種后約7d即開始膨大，14d后愈傷組織便可達(dá)到麥粒大小。半個月后，一些生長松散的黃白色愈傷組織上開始隱約出現(xiàn)一個綠色的點狀區(qū)域，隨后這一區(qū)域逐漸擴(kuò)大，至一個月左右，一些生長較快的愈傷組織中部的綠色生長中心開始分化出芽，至40天左右這些芽進(jìn)一步生長，真葉展開形成芽苗，此時，由于培養(yǎng)基中營養(yǎng)成分的損耗，同時沒有根形成，芽苗生長很緩慢，如果將芽苗轉(zhuǎn)至新鮮培養(yǎng)基上，再經(jīng)過20d左右就可以分化得到完整的再生植株。

2.2 不同基本培養(yǎng)基對秦4甘薯植株再生的影響（表1）不同基本培養(yǎng)基對脫毒苗的平均根數(shù)、平均根長有明顯影響，本實驗在所采用的4種培養(yǎng)基中，MS基本培養(yǎng)基上脫毒薯苗的平均生根數(shù)最高，達(dá)到6.4條；單株平均葉片數(shù)最多，達(dá)到8.3條，平均株高最高，達(dá)到7.1，明顯高于其它3種基本培養(yǎng)基。但是，平均根長以MB基本培養(yǎng)基中培養(yǎng)的脫毒薯苗最長，達(dá)到5.6cm。

表1 不同基本培養(yǎng)基對秦4甘薯植株再生的影響

2.3 不同6-BA和NAA濃度配比對脫毒苗生長的影響 NAA對試管苗生長的影響結(jié)果（表2）顯示：培養(yǎng)基中6-BA濃度不變，甘薯苗平均生根數(shù)、平均根長、平均葉片數(shù)和平均株高隨NAA質(zhì)量濃度的增加而變化。平均根數(shù)、平均葉數(shù)、平均株高均隨NAA質(zhì)量濃度的增加呈先高后低再升高的單峰曲線。當(dāng)NAA質(zhì)量濃度為0.5mg/L時，6-BA質(zhì)量濃度為0.1mg/L，接種莖段產(chǎn)生根原基天數(shù)最短，為6.1天；15d后平均株高最高，可達(dá)6.5cm，平均葉片數(shù)達(dá)4.5，再生植株帶有14.9條平均長度為8.0cm的白色幼根。另外，從表2中數(shù)據(jù)還可證明高質(zhì)量濃度NAA處理對幼根的形成和莖、葉的生長方面是不利的。

表2 不同6-BA和NAA濃度配比對脫毒苗生長的影響

3 討論

激素控制著細(xì)胞的分化，已經(jīng)被眾多的研究所證實。實驗發(fā)現(xiàn)，在脫毒苗莖段培養(yǎng)之初，培養(yǎng)基中僅添加的0.5mg/LNAA時，莖段發(fā)根時間最快，生根數(shù)、平均葉數(shù)、平均株高均優(yōu)于添加其它NAA濃度處理。當(dāng)培養(yǎng)基中6-BA質(zhì)量濃度不變，甘薯苗平均生根數(shù)、平均根長、平均葉片數(shù)和平均株高隨NAA質(zhì)量濃度的增加而變化。平均根數(shù)、平均葉數(shù)、平均株高均隨NAA質(zhì)量濃度的增加呈先高后低再升高的單峰曲線。另外從表2數(shù)據(jù)還可得出接種脫毒苗莖段發(fā)根長度隨NAA質(zhì)量濃度升高有逐漸變短的趨勢。

4 結(jié)束語

本研究結(jié)果表明，MS和MB基本培養(yǎng)基對甘薯脫毒苗的快繁作用比B5和N6基本培養(yǎng)基好，而在MS和MB基本培養(yǎng)基較B5和N6基本培養(yǎng)基有較高的離子濃度，說明甘薯脫毒苗適合于在較高離子濃度的培養(yǎng)基上生長，這一結(jié)論與許多研究結(jié)果一致[10-14]。試驗中也證實了付增光、陳越等人的研究[1]，MB基本培養(yǎng)基中脫毒薯苗的根部往往形成較大的愈傷組織塊，在幼苗移栽階段必須將這種愈傷組織塊用清水清洗掉，以提高移栽成活率。

試驗結(jié)果證實本研究所用的添加有6-BA0.5mg/L和0.1mg/LNAA的MS培養(yǎng)基，是適合秦薯4號脫毒種苗莖段快速繁殖的。接種莖段產(chǎn)生根原基天數(shù)最短，為6.1天；15d后平均株高最高，可達(dá)6.5cm，平均葉片數(shù)達(dá)4.5，再生植株帶有14.9條平均長度為8.0cm的白色幼根。這與周志林等[14]增加培養(yǎng)基中生長素的濃度并配合適量的細(xì)胞分裂素能有效的促進(jìn)植株的生長的研究結(jié)果一致。脫毒種苗的增值除了與基本培養(yǎng)基種類、不同激素配比、培養(yǎng)條件有關(guān)外，還與植物的基因型有關(guān)，本實驗采用的是秦薯4號作為實驗材料，存在與其它研究數(shù)據(jù)不一致的情況[15-16]。

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