孫中洋，李東韜,2 綜述 張 舒 審校

1第四軍醫(yī)大學(xué) 航空航天生物動(dòng)力學(xué)教研室，航空航天醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710032；2海軍總醫(yī)院 心臟中心，北京 100048

綜 述

成骨細(xì)胞鉀、鈣離子通道的研究進(jìn)展

Advances in research on osteoblast potassium and calcium ion channels

孫中洋1，李東韜1,2綜述 張 舒1審校

1第四軍醫(yī)大學(xué) 航空航天生物動(dòng)力學(xué)教研室，航空航天醫(yī)學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，陜西西安 710032；2海軍總醫(yī)院 心臟中心，北京 100048

骨質(zhì)疏松的發(fā)病率呈現(xiàn)逐年上升的趨勢(shì)，患者生活質(zhì)量下降，其所帶來(lái)的危害已引起全世界的廣泛關(guān)注。骨質(zhì)疏松的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，涉及因素較多，但成骨細(xì)胞功能障礙處于中心環(huán)節(jié)。研究發(fā)現(xiàn)成骨細(xì)胞表達(dá)多種離子通道，本文將對(duì)鉀離子和鈣離子通道進(jìn)行綜述分析。

成骨細(xì)胞；骨質(zhì)疏松；鉀離子通道；鈣離子通道

骨質(zhì)疏松癥(osteoporosis，OP)是一種最常見的代謝性骨病，病理特征為骨量減低，骨組織微結(jié)構(gòu)退行性變和骨脆性增加。OP主要癥狀是骨痛和肌無(wú)力，嚴(yán)重者可發(fā)生骨折和脊柱變形。成骨細(xì)胞在骨重建過(guò)程中起到核心作用。成骨細(xì)胞不僅調(diào)節(jié)骨的礦化，還間接調(diào)節(jié)破骨細(xì)胞的骨吸收功能，它的數(shù)量和功能變化直接影響代謝性骨病的發(fā)生、發(fā)展和預(yù)后[1]。作為骨代謝治療藥物的靶細(xì)胞，成骨細(xì)胞功能受許多激素和骨組織局部調(diào)節(jié)因子的影響。因此，成骨細(xì)胞的功能及調(diào)節(jié)機(jī)制已成為OP研究的重中之重。現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)，成骨細(xì)胞存在多種離子通道，尤以K+通道和Ca2+通道的研究最為深入。這些離子通道不僅調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的分化和增殖等生理活動(dòng)，還參與機(jī)械信號(hào)感知、傳遞及轉(zhuǎn)導(dǎo)過(guò)程，進(jìn)而影響其成骨功能。本文針對(duì)成骨細(xì)胞上K+通道和Ca2+通道的結(jié)構(gòu)和特性等相關(guān)研究進(jìn)行綜述。

1 成骨細(xì)胞上鉀、鈣離子通道的分類與特征

K+是細(xì)胞內(nèi)的重要離子，有很高的電化學(xué)活性。在成骨細(xì)胞的收縮過(guò)程起始階段起作用。其在成骨細(xì)胞的線粒體上也有分布，并且和細(xì)胞的凋亡關(guān)系密切[2]。依據(jù)拓?fù)浣Y(jié)構(gòu)，成骨細(xì)胞上K+通道可劃分為3大類，分別為電壓依賴性鉀離子通道(voltage-dependent potassium channels)，內(nèi)向整流鉀離子通道(inwardly rectifying potassium channels，Kir)和雙孔鉀離子通道(two-pore domain potassium channel，2PK+)。

1.1 電壓依賴性鉀離子通道 具有6個(gè)跨膜段和1個(gè)孔區(qū)的K+通道亞型。成骨細(xì)胞上表達(dá)的電壓依賴性鉀離子通道主要有以下4種。電壓門控性鉀離子通道(voltage-gated potassium channels，Kv)由4個(gè)孔道形成亞基α和4個(gè)輔助亞基β組成，α亞基有6個(gè)穿膜結(jié)構(gòu)域，其主要負(fù)責(zé)細(xì)胞膜的復(fù)極化[2-3]。大電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道(large-conductance calcium activated potassium channels，BK)由α亞單位和β亞單位組成，其中α亞單位組成孔道，β亞單位可調(diào)節(jié)通道的電學(xué)和藥理學(xué)特點(diǎn)。BK屬于機(jī)械敏感性通道，因其在成骨細(xì)胞上高表達(dá)和可在膜牽張時(shí)開放，能夠使機(jī)械牽張轉(zhuǎn)變成為胞內(nèi)反應(yīng)，可將其看作是骨組織的機(jī)械感受器[4]。BK參與許多胞內(nèi)活動(dòng)，比如細(xì)胞容積的調(diào)節(jié)，控制細(xì)胞的黏附，在機(jī)械負(fù)荷下調(diào)節(jié)細(xì)胞膜電位，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子釋放和細(xì)胞遷徙等[5-7]，并參與細(xì)胞形態(tài)的保持[8]。此外，成骨細(xì)胞上BK還可快速持續(xù)地反饋調(diào)節(jié)細(xì)胞膜去極化[9]。BK可被奎尼丁、粉防己堿和四乙胺阻斷，被異松脂酸、甲狀旁腺素和前列腺素E2激活，表現(xiàn)為Ca2+和電壓依賴[10]。BK通道的活性還受到動(dòng)態(tài)聚合狀態(tài)或解離狀態(tài)肌動(dòng)蛋白等細(xì)胞骨架的影響[4]。中電導(dǎo)鈣激活鉀離子通道(intermediateconductance calcium activated potassium channels，IK)與BK相似，在成骨細(xì)胞上廣泛表達(dá)，而且有著相似的電生理性質(zhì)。即使在ATP足夠的情況下，BK調(diào)控細(xì)胞膜電位的作用也較?。?相反，IK可在激動(dòng)劑的作用下促進(jìn)Ca2+的移動(dòng)，從而調(diào)控細(xì)胞膜電位。ATP介導(dǎo)的細(xì)胞內(nèi)Ca2+濃度增加主要是激活I(lǐng)K，引起細(xì)胞膜的超極化。IK通道表現(xiàn)為Ca2+依賴，可被環(huán)磷酰胺阻斷[11]。瞬時(shí)外向鉀離子通道(transient outward potassium channels)電流在去極化刺激時(shí)被引出，表現(xiàn)出激活快，失活慢的特點(diǎn)[12]。細(xì)胞膜的去極化和細(xì)胞內(nèi)Ca2+的濃度增加都可激活此通道，從而緩沖胞內(nèi)Ca2+濃度。瞬時(shí)外向鉀離子通道在成骨細(xì)胞中Ca2+信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制起到重要作用，由于它的存在，細(xì)胞內(nèi)Ca2+增加是暫時(shí)的[13]。

1.2 內(nèi)向整流鉀離子通道 具有2個(gè)跨膜段和1個(gè)孔區(qū)，這2個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域形成了孔道。Kir是由4個(gè)α亞基組成的同聚體或異聚體[2]。Kir負(fù)責(zé)當(dāng)膜電位小于K+平衡電位時(shí)內(nèi)向轉(zhuǎn)運(yùn)K+，從而使電流進(jìn)入細(xì)胞比出細(xì)胞更容易。這種內(nèi)向電流伴隨著細(xì)胞外K+濃度的增加而增加。它還可增加K+膜電導(dǎo)，有效地控制膜電位接近K+的平衡電位。值得注意的是Kir雖具有整流作用，但無(wú)電壓依賴性[14]。Kir的門控特性不僅受到膜電位的影響也受到細(xì)胞外K+濃度的調(diào)節(jié)[13]。其最具確定意義的特點(diǎn)是可被細(xì)胞外Ba2+可逆性阻斷。

1.3 雙孔鉀離子通道 雙孔鉀離子通道是20世紀(jì)90年代發(fā)現(xiàn)的具有4個(gè)跨膜段和2個(gè)孔區(qū)的K+通道亞型。由于該通道無(wú)電壓依賴性，可在靜息電位時(shí)開放，故也被稱為背景K+通道或漏流通道[4,14]。2PK+的表達(dá)分布非常廣泛，與細(xì)胞增殖和細(xì)胞膜靜息電位的關(guān)系密切。在成骨細(xì)胞中與在神經(jīng)系統(tǒng)中的作用相似，調(diào)節(jié)靜息電位和細(xì)胞電興奮性。2PK+對(duì)機(jī)械作用敏感，與電壓門控和Ca2+激活的K+通道配合，使細(xì)胞膜的復(fù)極化速率與機(jī)械作用的影響相偶聯(lián)。2PK+還可作為機(jī)械信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)下游通路信號(hào)[14]。2PK+對(duì)細(xì)胞膜的牽張、pH、溫度等因素敏感，而對(duì)于傳統(tǒng)K+通道阻斷劑不敏感，但又能被前列腺素和cAMP阻斷[15]。

除此以外，最近還發(fā)現(xiàn)一類特殊的K+通道-EAG(ether a go-go related)通道。傳統(tǒng)觀點(diǎn)認(rèn)為K+通道通過(guò)控制膜電位，調(diào)節(jié)K+內(nèi)流從而促進(jìn)細(xì)胞的增殖，但EAG通道能夠抑制細(xì)胞的增殖[16]。K+通道對(duì)成骨細(xì)胞的數(shù)量、形態(tài)和礦化等能力的影響是復(fù)雜的，在調(diào)節(jié)其生理活動(dòng)過(guò)程中扮演了極為重要的角色。

2 鈣離子通道

Ca2+在成骨細(xì)胞中發(fā)揮了至關(guān)重要的作用。Ca2+的增加可來(lái)自細(xì)胞外也可來(lái)自細(xì)胞內(nèi)鈣庫(kù)釋放。細(xì)胞內(nèi)的鈣庫(kù)在成骨細(xì)胞是指內(nèi)質(zhì)網(wǎng)。為了了解成骨細(xì)胞中的Ca2+穩(wěn)態(tài)，要區(qū)分一個(gè)重要的概念，信號(hào)Ca2+和無(wú)機(jī)Ca2+。在細(xì)胞外的礦化作用中，無(wú)機(jī)Ca2+作為細(xì)胞內(nèi)其他信號(hào)通路的下游被調(diào)控，和羥基磷灰石晶體一同沉積在蛋白質(zhì)支架上。在第二信使作用中，信號(hào)Ca2+在激活細(xì)胞反應(yīng)中起到基礎(chǔ)作用。作為主要的細(xì)胞內(nèi)離子，Ca2+已經(jīng)被證明和細(xì)胞內(nèi)的許多功能相關(guān)，但更重要的是，Ca2+信號(hào)的微小變化可以在細(xì)胞中產(chǎn)生不同的信號(hào)通路，從而產(chǎn)生不同的作用。任何原因、任何形式的細(xì)胞內(nèi)Ca2+長(zhǎng)時(shí)程的增多都會(huì)引起細(xì)胞的死亡或凋亡[17]。成骨細(xì)胞膜片鉗研究集中在2大類Ca2+通道，即電壓敏感性鈣離子通道(voltage-sensitive calcium channels，VSCC)和配基門控性鈣離子通道(ligand-gated calcium channels)。

2.1 電壓敏感性鈣離子通道 電壓敏感性鈣離子通道是蛋白質(zhì)復(fù)合體，可調(diào)節(jié)Ca2+內(nèi)流等生理功能。根據(jù)通道的動(dòng)力學(xué)和藥理學(xué)特性，可以將VSCC超家族分為5個(gè)亞群： L，T，P，N和Q。其中L型是細(xì)胞中發(fā)現(xiàn)分布最廣研究最透徹的Ca2+通道，其次是T型，而P、N和Q型少有報(bào)道[18-20]。VSCC是異質(zhì)二聚體，由4個(gè)亞單位組成，分別是α1、α2、β和δ[21-22]。α亞單位組成通道的孔道，這個(gè)亞單位由4個(gè)跨膜結(jié)構(gòu)域組成，每個(gè)結(jié)構(gòu)域又是由6穿膜結(jié)構(gòu)組成[23]。α亞單位既有電壓敏感的序列，也有二氫吡啶結(jié)合的序列?？烧J(rèn)為α亞單位是產(chǎn)生通道活性的唯一亞單位，在其他亞單位缺失的情況下，α仍然可以發(fā)揮作用，但此時(shí)膜電流密度變低，電壓激活更加緩慢[18,24]。分子克隆證明VSCC具有非常大的多態(tài)性，α亞基就由至少3個(gè)基因調(diào)控。根據(jù)α1亞基藥理學(xué)和生理學(xué)功能的不同，VSCC可以分為以下兩類，高電壓激活型(L，P/Q，N和R亞型)和低電壓激活型(T亞型)[25]。低電壓激活的通道和高電壓激活的通道在蛋白質(zhì)水平序列的相似性＜25%，并且在功能特性上有著顯著的差異[22]。其他輔助亞基，特別是β亞基，調(diào)節(jié)VSCC的門控特性和控制通道的裝配和運(yùn)輸。β亞基可促進(jìn)VSCC的正確折疊，并幫助其在細(xì)胞膜上定位。研究發(fā)現(xiàn)β亞基與和細(xì)胞膜鏈接的鳥苷酸激酶蛋白結(jié)構(gòu)相似[26-28]。β亞基通過(guò)許多不同蛋白質(zhì)的相互作用影響細(xì)胞間的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)。成骨細(xì)胞上有3種β亞基，其中β2亞基的密度最大，并起到主要作用[29]。δ亞基的分子量有24 kU和27 kU兩種。

成骨細(xì)胞上表達(dá)的VSCC是可興奮細(xì)胞上的特征性通道，但又很難引起鈣誘導(dǎo)的鈣釋放現(xiàn)象，而此現(xiàn)象又是絕大多數(shù)可興奮細(xì)胞的重要特征[30]。成骨細(xì)胞上VSCC表達(dá)與一般可興奮細(xì)胞的最大不同在于其表達(dá)的數(shù)量要少得多。比如，成熟的橫紋肌細(xì)胞上VSCC的數(shù)量是成骨細(xì)胞數(shù)十倍，VSCC數(shù)量上的不同也體現(xiàn)在mRNA水平[31]。推測(cè)成骨細(xì)胞可根據(jù)其功能需要的不同，表達(dá)出數(shù)量介于可興奮細(xì)胞和不可興奮細(xì)胞之間的VSCC。其功能是隨著激素和機(jī)械刺激的影響，調(diào)節(jié)多種細(xì)胞外基質(zhì)蛋白的分泌[32-33]。VSCC在成骨細(xì)胞乃至骨骼系統(tǒng)的生理作用中起到核心作用。

L型VSCC在細(xì)胞體外培養(yǎng)7 ～ 8 d后才能被檢測(cè)出來(lái)，在1 ～ 2周時(shí)活性達(dá)到峰值。但如果用無(wú)血清的培養(yǎng)基來(lái)培養(yǎng)成骨細(xì)胞，L型的活性可更早出現(xiàn)。然而，T型在培養(yǎng)2 ～4 d后就可檢出，而且活性在8 d后就減低或消失[34]。由此產(chǎn)生一個(gè)假設(shè)，T型在細(xì)胞分化的早期發(fā)揮作用，而L型和分化一直相關(guān)。L型是高電壓激活且電流持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)，可被二氫吡啶特異性阻斷。而T型能夠在微小去極化的情況下被激活且很快失活，T型對(duì)二氫吡啶不敏感但可被Ni2+阻斷，此為T型通道的主要特征[35]。

胞膜去極化、VD3、PTH和表皮生長(zhǎng)因子可調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞上VSCC的功能。VSCC的功能是根據(jù)Ca2+進(jìn)入細(xì)胞的時(shí)空方式不同而改變。而Ca2+進(jìn)入細(xì)胞的時(shí)空方式不同主要是因?yàn)榧?xì)胞膜上表達(dá)不同亞型的VSCC，每種亞型都具有不同的激活和失活動(dòng)力學(xué)特征、藥理學(xué)特征和組織的分布特征[36]。

2.2 配基門控性鈣離子通道 代謝型谷氨酸受體和離子型谷氨酸受體在成骨細(xì)胞上功能性表達(dá)。離子型谷氨酸受體作為谷氨酸門控型離子通道，它的激活可引起Ca2+內(nèi)流。而代謝型谷氨酸受體可和G蛋白偶聯(lián)，進(jìn)而激活磷脂酶C合成二酰甘油和三磷酸鹽，或被動(dòng)地與腺核苷酸環(huán)化酶結(jié)合[37]。

離子型受體根據(jù)激活受體的配體不同，可以將其分為N-methyl-D-aspartate (NMDA)，a-amino-3-hydroxy-5-methyl-4-isoxazole propionic acid (AMPA)和Kainate (KA)等不同型別，研究主要集中在NMDA上[37-38]。

成骨細(xì)胞上離子型受體的激活引起細(xì)胞膜去極化和Ca2+內(nèi)流，進(jìn)而增加谷氨酸釋放和激活第二信號(hào)通路，同時(shí)也會(huì)影響成骨細(xì)胞表型。離子型谷氨酸受體的阻斷會(huì)使骨質(zhì)合成減少，減緩成骨細(xì)胞的分化，降低骨基質(zhì)蛋白的翻譯，說(shuō)明谷氨酸信號(hào)的調(diào)控可促進(jìn)骨質(zhì)形成[39]。

3 問(wèn)題與展望

綜上所述，鉀、鈣離子通道通過(guò)調(diào)節(jié)成骨細(xì)胞的增殖和分化等功能影響骨組織的生長(zhǎng)和發(fā)育，揭示了鉀、鈣離子通道，成骨細(xì)胞和骨質(zhì)疏松的密切關(guān)系。成骨細(xì)胞上鉀、鈣離子通道的進(jìn)一步研究將對(duì)理解和治療骨質(zhì)疏松有積極意義。

1 呂厚辰，唐佩福．胎球蛋白 A 在骨礦化早期的抑制作用［J］.解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2013，34（1）：98-100．

2 Pangalos M， Bintig W， Schlingmann B， et al. Action potentials in primary osteoblasts and in the MG-63 osteoblast-like cell line［J］. J Bioenerg Biomembr， 2011， 43（3）： 311-322.

3 Li GR， Deng XL， Sun H， et al. Ion channels in mesenchymal stem cells from rat bone marrow［J］. Stem Cells， 2006， 24（6）： 1519-1528.

4 Rezzonico R， Cayatte C， Bourget-Ponzio I， et al. Focal adhesion kinase pp125FAK interacts with the large conductance calciumactivated hSlo Potassium Channel in human osteoblasts： potential role in mechanotransduction［J］. J Bone Miner Res， 2003， 18（10）：1863-1871.

5 Ehrhardt AG， Frankish N， Isenberg G. A large-conductance K+ Channel that is inhibited by the cytoskeleton in the smooth muscle cell line DDT1 MF-2［J］. J Physiol， 1996， 496 （ Pt 3）（Pt 3）： 663-676.

6 Kraft R， Benndorf K， Patt S. Large conductance Ca（2+）-activated K（+） channels in human meningioma cells［J］. J Membr Biol，2000， 175（1）： 25-33.

7 Huang H， Rao Y， Sun P， et al. Involvement of actin cytoskeleton in modulation of Ca（2+）-activated K（+） channels from rat hippocampal CA1 pyramidal neurons［J］. Neurosci Lett， 2002，332（2）： 141-145.

8 Martin DK， Bootcov MR， Campbell TJ， et al. Human macrophages contain a stretch-sensitive Potassium Channel that is activated by adherence and cytokines［J］. J Membr Biol， 1995， 147（3）：305-315.

9 Wu SN， Jan CR， Chiang HT. Fenamates stimulate BKCa channel osteoblast-like MG-63 cells activity in the human［J］. J Investig Med， 2001， 49（6）：522-533.

10 Henney NC， Li B， Elford C， et al. A large-conductance （BK）Potassium Channel subtype affects both growth and mineralization of human osteoblasts［J］. Am J Physiol Cell Physiol， 2009， 297（6）：1397-1408.

11 Weskamp M， Seidl W， Grissmer S. Characterization of the increase in ［Ca（2+）］（i） during hypotonic shock and the involvement of Ca（2+）-activated K（+） channels in the regulatory volume decrease in human osteoblast-like cells［J］. J Membr Biol， 2000， 178（1）：11-20.

12 Chesnoy-Marchais D， Fritsch J. Potassium currents and effects of vitamin D-3 metabolites and cyclic GMP in rat osteoblastic cells［J］. Biochim Biophys Acta， 1993， 1148（2）： 239-248.

13 Yellowley CE， Hancox JC， Skerry TM， et al. Whole-cell membrane currents from human osteoblast-like cells［J］. Calcif Tissue Int，1998， 62（2）： 122-132.

14 Hughes S， Magnay J， Foreman M， et al. Expression of the mechanosensitive 2Pk+ Channel TREK-1 in human osteoblasts［J］. J Cell Physiol， 2006， 206（3）： 738-748.

15 Rezzonico R， Schmid-Alliana A， Romey G， et al. Prostaglandin E2 induces interaction between hSlo Potassium Channel and Syk tyrosine kinase in osteosarcoma cells［J］. J Bone Miner Res， 2002， 17（5）：869-878.

16 Hernandez L， Park KH， Cai SQ， et al. The antiproliferative role of ERG K+ channels in rat osteoblastic cells［J］. Cell Biochem Biophys， 2007， 47（2）： 199-208.

17 McDonald F. Ion channels in osteoblasts： a story of two intracellular organelles［J］. Surgeon， 2004， 2（2）： 63-69.

18 Duncan RL， Akanbi KA， Farach-Carson MC. Calcium signals and Calcium channels in osteoblastic cells［J］. Semin Nephrol， 1998，18（2）： 178-190.

19 Dolmetsch RE， Lewis RS， Goodnow CC， et al. Differential activation of transcription factors induced by Ca2+ response amplitude and duration［J］. Nature， 1997， 386（6627）： 855-858.

20 王維，馮澤國(guó)．RNA干擾用于疼痛治療的離子通道靶點(diǎn)［J］.軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院學(xué)報(bào)，2009，30（5）：747-749．

21 Bergh JJ， Shao Y， Akanbi K， et al. Rodent osteoblastic cells Express voltage-sensitive Calcium channels lacking a gamma subunit［J］. Calcif Tissue Int， 2003， 73（5）： 502-510.

22 Bergh JJ， Shao Y， Puente E， et al. Osteoblast Ca（2+） permeability and voltage-sensitive Ca（2+） Channel expression is temporally regulated by 1，25-dihydroxyvitamin D（3）［J］. Am J Physiol Cell Physiol， 2006， 290（3）： 822-831.

23 Perez-Reyes E， Kim HS， Lacerda AE， et al. Induction of Calcium currents by the expression of the alpha 1-subunit of the dihydropyridine receptor from skeletal muscle［J］. Nature， 1989，340（6230）： 233-236.

24 Gu X， Spitzer NC. Distinct aspects of neuronal differentiation encoded by frequency of spontaneous Ca2+ transients［J］. Nature， 1995，375（6534）： 784-787.

25 Reuter H. Diversity and function of presynaptic Calcium channels in the brain［J］. Curr Opin Neurobiol， 1996， 6（3）： 331-337.

26 Black JA， Westenbroek RE， Catterall WA， et al. Type II brain Sodium Channel expression in non-neuronal cells： embryonic rat osteoblasts［J］. Brain Res Mol Brain Res， 1995， 34（1）： 89-98.

27 Arikkath J， Campbell KP. Auxiliary subunits： essential components of the voltage-gated Calcium Channel complex［J］. Curr Opin Neurobiol， 2003， 13（3）： 298-307.

28 Hullin R， Khan IF， Wirtz S， et al. Cardiac L-type Calcium Channel beta-subunits expressed in human heart have differential effects on single Channel characteristics［J］. J Biol Chem， 2003， 278（24）：21623-21630.

29 Shao Y， Czymmek KJ， Jones PA， et al. Dynamic interactions between L-type voltage-sensitive Calcium Channel Cav1.2 subunits and ahnak in osteoblastic cells［J］. Am J Physiol Cell Physiol， 2009， 296（5）：1067-1078.

30 Caffrey JM， Farach-Carson MC. Vitamin D3 metabolites modulate dihydropyridine-sensitive Calcium currents in clonal rat osteosarcoma cells［J］. J Biol Chem， 1989， 264（34）： 20265-20274.

31 Caffrey JM， Brown AM， Schneider MD. Mitogens and oncogenes can block the induction of specific voltage-gated ion channels［J］. Science， 1987， 236（4801）： 570-573.

32 Meszaros JG， Karin NJ， Akanbi K， et al. Down-regulation of L-type Ca2+ Channel transcript levels by 1，25-dihyroxyvitamin D3. Osteoblastic cells Express L-type alpha1C Ca2+ Channel isoforms［J］. J Biol Chem， 1996， 271（51）： 32981-32985.

33 Duncan RL， Kizer N， Barry EL， et al. Antisense oligodeoxynucleotide inhibition of a swelling-activated cation Channel in osteoblast-like osteosarcoma cells［J］. Proc Natl Acad Sci U S A， 1996， 93（5）：1864-1869.

34 Gu Y， Preston MR， el Haj AJ， et al. Osteoblasts derived from loadbearing bones of the rat Express both L- and T-like voltage-operated Calcium channels and mRNA for alpha 1C， alpha 1D and alpha 1G subunits［J］. Pflugers Arch， 1999， 438（4）： 553-560.

35 Ertel SI， Ertel EA， Clozel JP. T-type Ca2+ channels and pharmacological blockade： potential pathophysiological relevance［J］. Cardiovasc Drugs Ther， 1997， 11（6）： 723-739.

36 Liu R， Li W， Karin NJ， et al. Ribozyme ablation demonstrates that the cardiac subtype of the voltage-sensitive Calcium Channel is the molecular transducer of 1， 25-dihydroxyvitamin D（3）-stimulated Calcium influx in osteoblastic cells［J］. J Biol Chem， 2000， 275（12）：8711-8718.

37 Patton AJ， Genever PG， Birch MA， et al. Expression of an N-methyl-D-aspartate-type receptor by human and rat osteoblasts and osteoclasts suggests a novel glutamate signaling pathway in bone［J］. Bone， 1998， 22（6）： 645-649.

38 Hinoi E， Fujimori S， Takemori A， et al. Demonstration of expression of mRNA for particular AMPA and kainate receptor subunits in immature and mature cultured rat calvarial osteoblasts［J］. Brain Res， 2002， 943（1）： 112-116.

39 Mason DJ. Glutamate signalling and its potential application to tissue engineering of bone［J］. Eur Cell Mater， 2004， 7：12-25.

R 348

A

2095-5227(2014)02-0186-04

10.3969/j.issn.2095-5227.2014.02.026

2013-10-24 10:19

http://www.cnki.net/kcms/detail/11.3275.R.20131024.1019.002.html

2013-09-02

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(31170889；30870595)；教育部留學(xué)回國(guó)啟動(dòng)基金(HG4406)

Supported by the National Natural Science Foundation of China(31170889; 30870595); Project-sponsored by SRF for ROCS, SEM(HG4406)

孫中洋，男，在讀碩士。研究方向：航空航天醫(yī)學(xué)。Email: szylpxt@163.com

張舒，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師。Email: shuzhang@ fmmu.edu.cn