毛全貴，賴 珅，邢繼紅

（河南天方藥業(yè)股份有限公司，河南 駐馬店 463000）

氣相色譜法測定豆粉中脂肪殘留量

毛全貴，賴 珅，邢繼紅

（河南天方藥業(yè)股份有限公司，河南 駐馬店 463000）

為建立快速準確的方法測定豆粉中脂肪酸的殘留量，以氫氧化鉀甲醇溶液為酯化劑，采用氣相色譜法，測定豆粉中殘留脂肪酸組成。結果 5 種主要脂肪酸能在 15 min 內基線分離，線性、精密度、重現(xiàn)性良好。此方法簡單快捷，可用于豆粉中脂肪酸的殘留組成測定。

豆粉；脂肪酸；氣相色譜

豆粉是發(fā)酵培養(yǎng)基常用的氮源，主要分為冷軋和熱軋兩種，熱軋是采用的傳統(tǒng)的壓榨法軋油后剩下的，冷扎是溶劑提取，即浸出法提取后的渣子。由于浸出法在后道工序中為脫除溶劑，也采用了高溫蒸粕，因而兩者都經過了熱處理。熱軋餅中的脂肪相對比冷軋餅中的高，因而在培養(yǎng)基配制時能夠起到一定的消泡作用或在如吉他霉素等抗生素的發(fā)酵中作為碳源、前體被利用。在生產工藝中，豆粉中的脂肪并不能完全去除，殘留的脂肪對一些發(fā)酵生產有正面或負面的影響，且脂肪中亞油酸的含量低于 48%時會影響抗生素的發(fā)酵。為此，在豆粉質量檢測中對脂肪含量和亞油酸含量分別做了要求。

目前對豆粉中脂肪的含量測定主要是索氏抽提法，這個方法缺點主要是方法步驟繁瑣，檢測周期長，且只能檢測脂肪含量不能檢測到亞油酸、棕櫚酸等的含量；因此尋找新的檢測豆粉中脂肪含量的方法顯得尤為重要。為此建立的 GC法測定豆粉中殘留脂肪和亞油酸含量，結果 5種主要脂肪酸（油酸、亞油酸、棕櫚酸、硬脂酸、亞麻酸）能在 15min內基線分離，線性、精密度、重現(xiàn)性良好。結論 此方法簡單快捷，可用于豆粉中脂肪的殘留組成和油酸、亞油酸等成分含量的測定。

1 實驗部分

1.1 儀器

島津 GC2010 氣相色譜儀，氫焰離子檢測器；Agilent DB-wax 色譜柱（30 m×0.32 mm，0.25μm）；Varian CP-Sil 88 色譜柱（50 m×0.25 mm，0.20μm）。

1.2 對照品與試劑

棕櫚酸甲酯（批號：35571）、硬脂酸甲酯（批號：38362）、油酸甲酯（批號：37488）、亞油酸甲酯（批號：36364）、亞麻酸甲酯（批號：39451）都為 Aladdin 公司、氫氧化鉀（批號：111202，四川西隴化工有限公司）、乙醚（批號：080601，四川西隴化工有限公司）、石油醚（批號：130821，天津市大茂化學試劑廠）、甲醇（批號：130311，天津市四友精細化學品有限公司）、正己烷（批號：20120912,天津科密歐化學試劑有限公司）、豆粉（批號：20140101、20140102、20140103，河南天方科技有限公司）。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

氣化溫度 250 ℃，檢測器溫度 260 ℃，柱溫 220℃，保持 15 min；載氣氮氣，流速 179 mL/min，分流比 60∶1；氫氣流速 40mL/min；空氣流速 400 mL/min。理論塔板數(shù)按亞油酸峰計算應不低于 5 000，對照品各色譜峰之間的最小分離度應不低于 1.5。

2.2 試劑制備

乙醚-石油醚混合液：取乙醚和石油醚按 1:1 混合均勻后備用。

1 mol氫氧化鉀甲醇溶液：取氫氧化鉀 56 g，精密稱定，溶解于 1 L 甲醇中，完全溶解后備用。

對照品溶液的制備：分別精密稱取棕櫚酸甲酯對照品、硬脂酸甲酯對照品、油酸甲酯對照品、亞油酸甲酯對照品、亞麻酸甲酯對照品各 10 mg，置于 100 mL 容量瓶中，加正己烷溶解并稀釋到刻度，制成每 1 mL 中含上訴對照品各 0.1 mg 的溶液。

2.3 供試品制備

取豆粉 0.1 g，置 10 mL 具塞試管中，加 2 mL 乙醚-石油醚混合液，震蕩，加 1 mol/L 氫氧化鉀甲醇溶液 1 mL，震搖 30 s，加純化水接近管口，靜止 5 min取上清液用氣相色譜儀測定。

2.4 專屬性

取對照品溶液 1μL注入氣相色譜儀，各色譜峰分離度均大于 1.5，亞油酸理論塔板數(shù)為 32 034。如圖1。

圖 1 對照品譜圖Fig.1 The control product spectra

取供試品溶液 1μL注入氣相色譜儀，各對照品峰分離度符合要求（圖 2）。

2.5 線性

取對照品溶液稀釋至5個濃度，依次進樣，以各對照品濃度為X軸，相對應峰面積為Y軸進行線性回歸，結果見表 1、表 2。

圖 2 供試品譜圖Fig.2The test product spectra

表 1 不同濃度脂肪酸峰面積Table 1 The peak area of the fatty acid with different concentration

2.6 精密度

取對照品溶液溶液重復進樣6次，按相應面積計算各組分。各成分 RSD 均小于 2.0%，結果見表 3。

表 3 6 次進樣 RSD 結果Table 3 Six times injection RSD results

2.7 檢測限

取對照品溶液，稀釋至合適濃度，記錄信噪比為 3∶1 時相應的峰值。得各個組分的檢測限分別為棕櫚酸 1.3 ng、硬脂酸 1.2 ng、油酸 1.1 ng、亞油酸1.4 ng。

2.8 供試品鑒定結果

照 2.2 項下處理方法考察 3 批冷軋豆粉供試品（批號：20140101、20140102、20140103），按外標法計算各脂肪酸組成含量相加與索氏抽提法結果比較，結果見表4。

表 4 不同色譜柱及方法測定 3 批供試品脂肪酸含量Table 4 Determining results of fatty acid content in three test samples by using different polarity of columns and test method%

3 結 論

豆粉殘留脂肪中的硬脂酸與油酸都為 18 個碳原子脂肪酸，在色譜中保留時間比較接近，不易分離。但本實驗使用 DB-wax 色譜柱具有高極性，使五種脂肪酸在色譜中的保留時間比較短且分離效果達到要求。與索氏抽提法進行比較，GC測定法能夠在測定脂肪量的同時測定各組分的含量。在抗生素生產中亞油酸的含量對發(fā)酵有一定的促進作用，使用 GC法能同時判斷脂肪組分是否會對發(fā)酵產生影響；在試劑使用上，GC 法使用試劑較少，安全性、準確度較高；在檢測時間上 GC法比索氏抽提法速度提高了 10倍，極大的減少了測樣時間，更快捷地服務生產。

在與索氏抽提法做結果比較時，結果上存在差異。根據(jù)這種情況在實驗操作中需要注意對照品與樣品是否完全溶解在試劑中，在震搖溶液時要達到要求這，樣能減少誤差，使結果準確性更高。

在使用氣相測定時，因每次測定時氣相實際條件不能達到完全一致性，在每次測定時都要進對照品進行進樣以便外標測定各組分含量和定位。

［1］中國藥典,二部.2010:附錄 52-附錄 53[S]..

［2］ 馮慧，洪家敏.索氏抽提法測定大豆粉中脂肪含量方法改進研究[J].中國食物與營養(yǎng)，2008(8):50-51.

［3］ 李群,周淑萍,丁銳,等.氣相色譜法測定魚多烯乙酯的含量[J].中國生化藥物雜志,2002 ,23 (2) :72274.

［4］李丹華，朱圣陶.氣相色譜法測定常見植物油中脂肪酸[J].糧食與油脂，2006(8):46-

［5］侯向昶.花生油中摻偽棕櫚油、豆油、菜籽油定性、定量分析[J].質量與市場，2004(8):6-

［6］王肇慈.糧油食品品質分析[M].2 版.北京：中國輕工業(yè)出版社，2000:156-178.

Determination of Fat Residues in Soybean Flour by Gas Chromatography

MAO Quan-gui, LAI Shen, XING Ji-Hong
(Henan Topfond Pharmaceutical Co.,Ltd., Henan Zhumadian 463000, China)

A fast accurate method for determining fatty acid residues in soybean flour was established by using gas chromatography with potassium hydroxide methanol solution as esterifying agent, and composition of residual fatty acid in the flour was determined. The results showed that a baseline separation of five kinds of main fatty acids was obtained within 15 min; linearity, precision and repeatability were good. This method is simple and quick, can be used in determination of residual composition of fatty acids in soybean flour.

Soybean flour; Fatty acid; Gas chromatography

O 657

： A文獻標識碼： 1671-0460（2014）07-1400-03

2014-04-08

毛全貴（1969-），男，河南駐馬店人，高級工程師，碩士，2004 年畢業(yè)于華東理工大學，研究方向為發(fā)酵工程，從事抗生素生產及廢水處理相關工作。E-mail：maoquangui@topfond.com。

賴珅 （1980-），男，工程 師，碩士，研究方 向為生物制藥。E-mail：8176989@qq.com。