史鑾章，秦中華

（永勝縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，云南永勝 674200）

金雀花無菌扦插試驗初探

史鑾章，秦中華

（永勝縣農(nóng)產(chǎn)品質(zhì)量安全檢測中心，云南永勝 674200）

金雀花是一種很受群眾喜愛的無公害保健珍稀野生植物，在永勝縣有廣泛分布及馴化栽培，開發(fā)潛力很大。傳統(tǒng)繁殖方法繁殖金雀花繁殖系數(shù)低，周期長。而組織培養(yǎng)能短時間內(nèi)獲得大量苗木，且不受季節(jié)因素影響，可常年進(jìn)行，因此進(jìn)行金雀花的組織培養(yǎng)技術(shù)試驗。試驗表明，選用金雀花當(dāng)年生幼嫩莖尖和莖段作為外植體都能誘導(dǎo)培養(yǎng)成功，在試驗條件下外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)以MS+NAA0.1mg/L+6－BA1/mg/L最適宜。

金雀花；組織培養(yǎng)；無菌扦插；試驗研究

金雀花，本地名金孔雀花，學(xué)名錦雞兒（Caraganasinica）。植物學(xué)分類為豆科，錦雞兒屬，落葉灌木，高可達(dá)2m，金雀花花形優(yōu)美，色彩金黃，艷麗奪目，是一種無公害保健珍稀野生食花蔬菜，其味美清甜，風(fēng)味獨(dú)特，深受當(dāng)?shù)厝罕姷南矏?，近年來還銷往周邊地區(qū)。隨著人們生活水平不斷提高，對無公害保健食品的需求日益強(qiáng)烈，無公害保健食品的開發(fā)和利用受到關(guān)注。而大面積種植，需要大量苗木。傳統(tǒng)繁殖方法中，有性繁殖方法在永勝縣并不適宜。無性繁殖中分株繁殖成活率高，進(jìn)入開花較早，產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)效益較快，但繁殖系數(shù)過低，不能短時間內(nèi)培育出大量苗木；扦插繁殖成活也較高，但要2年以上才能開花，產(chǎn)生經(jīng)濟(jì)效益較慢，2種方法均受季節(jié)影響，也不能短時間培育大量苗木。組織培養(yǎng)技術(shù)是在室內(nèi)進(jìn)行的植物無性繁殖方法，技術(shù)先進(jìn)，繁殖系數(shù)高，不受季節(jié)影響，能短時間培育大量苗木[1]。但要求有專門的實驗設(shè)備、專業(yè)人員和相對較高的專業(yè)知識水平。

筆者對金雀花的組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行了初步探索和研究，主要對其無菌扦插技術(shù)進(jìn)行摸索，為其規(guī)?；l(fā)展提供技術(shù)支持。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料選用本地金雀花當(dāng)年生幼嫩枝條。

1.2 培養(yǎng)基

采用瓊脂固體培養(yǎng)基，基本配方為MS+白糖30 g/L，激素按試驗設(shè)計配比，pH值5.8～6.2。

1.3 接種與培養(yǎng)條件

外植體按組織培養(yǎng)操作規(guī)程接種于相應(yīng)培養(yǎng)基上，貼上標(biāo)簽，分類擺放在培養(yǎng)室的培養(yǎng)架上，定期觀察生長情況，發(fā)現(xiàn)污染記錄后揀出作報廢處理。培養(yǎng)室溫度23～28℃，光照強(qiáng)度1300lux，光照時間每天8h。

1.4 試驗方法

1.4.1 外植體選擇試驗

在晴天上午采集金雀花當(dāng)年生幼嫩枝條，要求生長正常、無病蟲。采回的枝條剪去葉片，按保留1個腋芽的要求切取莖段和莖尖，將剪切好的金雀花外植體用清水沖洗3min后分別裝入無菌瓶中，按組織培養(yǎng)操作規(guī)程進(jìn)入無菌室，在超菌工作臺上進(jìn)行消毒處理。先用75%乙醇浸搖30s，再用無菌水沖洗3次，之后用0.1%的升汞溶液浸泡消毒25min，然后用無菌水沖洗8次，最后分別接入外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)基，進(jìn)行培養(yǎng)，觀察其分化情況，確定選用外植體的優(yōu)劣。培養(yǎng)基為MS+NAA0.1mg/L+6－BA1.0mg/L，每瓶接種1株外植體，莖段200瓶，莖尖100瓶。

1.4.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基選擇試驗

消毒處理好的莖段分別接種在3種不同激素水平的初代誘導(dǎo)培養(yǎng)基上，1水平：MS+NAA0.5mg/L +6－BA5mg/L；2水平：MS+NAA0.1mg/L+6－BA1 mg/L；3水平：MS+NAA0.05mg/L+6－BA0.5mg/L。每瓶接種1株外植體，每個激素水平接種100瓶，接種后放入培養(yǎng)室培養(yǎng)，觀察分化情況，選擇適宜的培養(yǎng)基激素配方。

2 結(jié)果與分析

2.1 外植體選擇試驗

由表1可見，莖尖和莖段2種外植體材料，在金雀花無菌快繁初代誘導(dǎo)培養(yǎng)中，誘導(dǎo)分化差異不明顯。因此，莖尖和莖段都能誘導(dǎo)培養(yǎng)成功。只是在外植體材料的選用上，莖段材料選取容易，數(shù)量較多，消毒處理較莖尖容易，污染較少，污染及死亡率為10.5%，分化率稍低；而莖尖數(shù)量少，消毒處理相對難，容易導(dǎo)致死亡，污染及死亡率為18%，原因可能是莖尖幼嫩，處理時消毒藥物對其傷害較深，破壞組織細(xì)胞，影響其分生能力。但莖尖是植物的生長頂端，內(nèi)源激素較集中，因此較之莖段生長能力稍強(qiáng)，誘導(dǎo)培養(yǎng)分生能力強(qiáng)。

表1 外植體選擇試驗

2.2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基選擇試驗

從表2可以看出，金雀花組織培養(yǎng)無菌扦插外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)的培養(yǎng)基以MS+NAA0.1mg/L+6－BA1 mg/L較適宜，其次MS+NAA0.05mg/L+6－BA0.5mg/ L外植體分化能力也較強(qiáng)，而MS+NAA0.5mg/L+6－BA5mg/L配方分化率相對低，可能是添加外源激素濃度偏高，反而抑制其分化能力。

表2 誘導(dǎo)培養(yǎng)基選擇試驗

3 討論

試驗結(jié)果表明，金雀花通過組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行無菌扦插是能成功的。外植體選用當(dāng)年生幼嫩莖尖和莖段，均可培養(yǎng)成功；外植體誘導(dǎo)培養(yǎng)以MS+NAA0.1 mg/L+6－BA1mg/L和MS+NAA0.05mg/L+6－BA0.5 mg/L較適宜。本次試驗研究范圍窄，不全面，要掌握金雀花組織培養(yǎng)整套技術(shù)措施，還有許多方面要摸索，如增殖培養(yǎng)，生根培養(yǎng)，以及出瓶種植等。另外，試驗僅是組織培養(yǎng)的初級階段無菌扦插，其繁殖系數(shù)還不太高，還可以從愈傷組織的誘導(dǎo)分化、花藥誘導(dǎo)等方面進(jìn)行更加深入的研究。

[1]王連潤，楊松光，劉家迅，等.接種與非接種菌根菌條件下藍(lán)莓扦插苗生長差異比較[J].西南農(nóng)業(yè)學(xué)報，2012，25（5）：1823－1826.

2013－10－11