逄世峰， 許世泉， 崔麗麗， 孫成賀， 張 浩， 王英平（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所， 吉林 長(zhǎng)春 130112）

加糖紅參對(duì)生脈飲質(zhì)量的影響

逄世峰， 許世泉， 崔麗麗， 孫成賀， 張 浩， 王英平*（中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所， 吉林 長(zhǎng)春 130112）

目的 研究加糖紅參對(duì)生脈飲中有效成分的影響。方法 采用高效液相色譜法，比較不同加糖量紅參制得生脈飲制劑中人參皂苷 Rg1、 Re、 Rb1、 五味子醇甲、 五味子醇乙、 五味子甲素、 五味子乙素的量。 結(jié)果 加糖紅參生脈飲中人參皂苷和五味子木脂素類(lèi)成分含有量均低于正常紅參生脈飲，并隨加糖量增加相應(yīng)減少。結(jié)論 當(dāng)紅參加糖量超過(guò) 10%時(shí)， 即對(duì)生脈飲質(zhì)量造成顯著影響。

生脈飲；加糖紅參；人參皂苷；木脂素；高效液相色譜

生脈飲為 《中國(guó)藥典》 2010 年版一部 “成方制劑和單味制劑”項(xiàng)下收載品種［1］， 由紅參、 麥冬、五味子組成，具有益氣復(fù)脈、養(yǎng)陰生津之功效，是治療氣陰兩虧、心悸氣短、脈微自汗等疾病常用中成藥之一。

為改善參口味，延長(zhǎng)保質(zhì)期，增加參質(zhì)量，市場(chǎng)上紅參普遍加糖，有說(shuō)法 “中藥紅參被曝約兩成加糖，加糖紅參增重兩成”。然而，加糖后無(wú)法判斷紅參是水煮還是水蒸，而水煮會(huì)使參的功效降低［2］。

紅參為生脈飲方中君藥［3］， 加糖紅參勢(shì)必對(duì)生脈飲質(zhì)量造成一定影響，本實(shí)驗(yàn)研究不同加糖量對(duì)生脈飲質(zhì)量的影響，探討加糖紅參危害程度，為中藥制劑生脈飲提供可靠質(zhì)量評(píng)價(jià)依據(jù)。

1 儀器、 試劑和材料

1.1 儀器 高效液相色譜儀 ( 島津 LC-10A)，SPD-M10A二極管陣列檢測(cè)器；DHG-9145A電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海一恒科技有限公司)； 電子天平 (上海梅特勒 -托利多儀器有限公司)； HH-6 型數(shù)顯恒溫水浴鍋 (常州澳華儀器有限公司)；SK8200H超聲波清洗器 (上?？茖?dǎo)超聲儀器有限公司)。

1.2 試藥 乙腈為色譜純， 水為超純水， 其他試劑均為分析純。五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、 五味子乙素、 人參皂苷 Rg1、 Re、Rb1均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。

1.3 材料 人參購(gòu)自吉林省撫松縣； 麥冬購(gòu)自康美藥業(yè)股份有限公司；五味子購(gòu)自吉林省通化縣。以上藥材經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院特產(chǎn)研究所藥用植物研究室許世泉副研究員鑒定， 分別為人參 Panax ginseng C.A.Mey的干燥根、 麥冬 Ophiopogon japonicus(thunb.)ker-Gawl. 的 干 燥 塊 根、 五 味 子Schisandra chinensis(Turcz.)Baill的干燥果實(shí)。

2 方法與結(jié)果

2.1 紅參制備

2.1.1 正常紅參［4-5］取大小相近鮮人參若干， 去須， 洗凈后， 蒸制 4 h， 70 ℃下烘 8 h，隨后在50℃下徹底烘干， 即得。

2.1.2 加糖紅參［6］取紅參 90 支， 隨機(jī)分 成 3組， 每組 30 支， 分別稱重； 取各組質(zhì)量 10%、20%、40%蔗糖分別溶解于 2 000 mL水中， 制成糖水； 取各組紅參于相應(yīng)糖水中浸泡 48 h， 50 ℃下徹底烘干，即得。

2.2 生脈飲制備［7-8］取紅參 100 g， 麥冬 200 g，五味子 100 g，分別粉碎成粗粉， 用 65%乙醇作溶劑， 浸漬 24 h 后進(jìn)行滲漉， 收集滲漉液約 4 500 m L， 減壓濃縮至 250 mL， 放冷， 加水 400 mL稀釋?zhuān)?濾過(guò)， 另加60%糖漿300 m L及1 g苯甲酸鈉，并調(diào)節(jié) pH值至8，加水至1 000 mL， 攪勻， 靜置，濾過(guò)，灌封，滅菌，即得。

2.3 不同生脈飲制品中人參皂苷測(cè)定

2.3.1 色譜條件［9］Agilent SB-C18色譜柱 (4.6 mm×250 mm， 5 μm)，流動(dòng)相為 0.1%甲酸乙腈溶液 (A)-0.1% 甲 酸 水 溶 液 (B) 梯 度 洗 脫(0 ～20 min， 19% ～23%A； 20 ～30 min， 23% ～25%A； 30 ～35 min， 25% ～26%A； 35 ～40 min，26% ～36%A；40 ～45 min， 36% ～42%A； 45 ～50 min， 42% ～19%A)， 體積流量 1mL/min， 檢測(cè)波長(zhǎng)為203 nm， 柱溫30 ℃， 進(jìn)樣量 10 μL。 見(jiàn)圖 1。

圖1 混合對(duì)照品 （A） 及生脈飲樣品 （B） HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms of reference substances and ShengmaiOral Liquid sample

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1對(duì)照品適量，置于 10 mL量瓶中，用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻即得。

2.3.3 供試品溶液制備［10］精密量取生脈飲溶液10mL，加20mL水稀釋?zhuān)靹颍?轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加乙醚萃取3次，棄去乙醚層，正丁醇萃取4次，每次 50 mL， 合并正丁醇層， 用 0.1 mol/L NaOH洗滌正丁醇層 2 次， 每次30 m L， 蒸干正丁醇， 甲醇定容至 10 mL。

2.3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取對(duì)照品溶液 20、50、 100、 200、 400 μL， 分別置于 10 m L量瓶中，用甲醇定容至刻度稀釋成一系列質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，注入超高效液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲 線， 得 Rg1、 Re、 Rb1回 歸 方 程 分 別 為: Y=4.3104 ×10-6X-0.029 7(r2=0.999 3)、 Y= 2.427 2 ×10-6X+0.018 9(r2=0.999 5)、 Y= 4.687 7 ×10-6X-0.009 6(r2=0.999 6)。 結(jié)果表明: 人參皂苷 Rg1在 0.338 ～6.76 μg， 人參皂苷Re在 0.182 ～3.64 μg， 人參皂苷 Rb1在 0.246 ～4.92 μg范圍內(nèi)均呈良好線性關(guān)系。

2.3.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1的 RSD 分 別 為 0.85、 0.76%、0.58%。 結(jié)果表明本實(shí)驗(yàn)儀器的精密度良好。

2.3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于 0、4、 8、 12 h 按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定， 以峰面積計(jì) 算 人 參 皂 苷 Rg1、 Re、 Rb1的 RSD 分 別 為1.81%、 1.92%、1.71%， 結(jié)果表明樣品在 12 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.3.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按 “2.3.3”項(xiàng)下制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下分別進(jìn)行 HPLC分析， 計(jì)算人參皂苷 Rg1、Re、 Rb1峰面積的 RSD分別為 3.38%、 2.76%、1.65%， 結(jié)果表明實(shí)驗(yàn)方法重復(fù)性良好。

2.3.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1對(duì)照品適量， 加甲醇稀釋制得每 1 mL含 人 參 皂 苷 Rg1、 Re、Rb1分 別 為 179.36、85.78、 416.31μg的混合對(duì)照品溶液。 精密移取已知含量的正常紅參生脈飲樣品溶液 2 mL， 分別加入上述的混合對(duì)照品溶液 2 mL， 定容至 5 mL量瓶，平行制備6份供試溶液。在上述色譜條件下注入液相色譜儀，測(cè)得3種人參單體皂苷的量，計(jì)算平均回收率在 97.08% ～100.04%之間， RSD均小于 3%， 結(jié)果見(jiàn)表 1。

表 1 人參皂苷回收率 （n=6）Tab.1 Results of recovery test for ginsenosides（ n=6）

2.3.9 試驗(yàn)結(jié)果 取各生脈飲制品 10mL(規(guī)格:每支裝 10mL)， 按 “2.3.3” 項(xiàng)制備供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定人參皂苷 Rg1、 Re、 Rb1，結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，加糖紅參生脈飲中人參皂苷Rg1、 Re、 Rb1的量均低于正常紅參生脈飲， 并隨加糖量增加， 其含有量相應(yīng)減少， 其中 40%加糖紅參組人參皂苷 Rg1、 Rb1的量與其他 3 組相比較，具有顯著性差異。

表2 加糖紅參生脈飲制品中人參單體皂苷 （n=3）Tab.2 Content of ginsenoside in Shengmai O ral Liquid of sweetened red ginseng （n=3）

2.4 不同生脈飲制品中五味子木脂素測(cè)定

2.4.1 色譜 條 件［11］Agilent SB-C18色 譜 柱 (4.6 mm×250 mm， 5 μm)， 流動(dòng)相為乙腈-水， 梯度洗脫 (0 ～30min， 45% ～75% 乙 腈； 30 ～45min，75% ～100%乙腈)，體積流量 1 mL/min， 檢測(cè)波長(zhǎng)為254 nm，柱溫30 ℃， 進(jìn)樣量 10 μL， 見(jiàn)圖 2。

圖2 混合對(duì)照品 （A） 及生脈飲樣品 （B） HPLC色譜圖Fig.2 HPLC ch romatogram s of reference substances and Shengmai Oral Liquid sample

2.4.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱量五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品適量， 置10 mL量瓶中， 用甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得。

2.4.3 供試品溶液制備［12］精密量取生脈飲溶液10mL，加20mL水稀釋?zhuān)靹颍?轉(zhuǎn)入分液漏斗中，加乙酸乙酯萃取 5 次，每次 50 mL，合并乙酸乙酯層， 蒸干乙酸乙酯， 甲醇定容至10 m L， 即得。

2.4.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線繪制 精密量取對(duì)照品溶液 20、50、 100、 200、 400 μL， 分別置于 10 m L量瓶中，用甲醇定容至刻度稀釋成一系列的混合對(duì)照品溶液，在上述色譜條件下，注入超高效液相色譜儀。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素回歸方程分別為:Y=3.510 2 ×10-7X-0.000 2(r2=0.999 8)、 Y=3.942 6 ×10-7X+ 0.005 1(r2=0.999 5)、 Y=3.786 9 ×10-7X+ 0.000 4(r2=0.999 4)、 Y=4.687 2 ×10-7X+ 0.004 5(r2=0.999 5)。 結(jié)果表明五味子醇甲在0.193 ～3.86 μg， 五味子醇乙在 0.168 ～3.36 μg，五味子甲素在 0.064 ～1.28 μg， 五味子 乙素在0.131 ～2.62 μg范圍內(nèi)均呈良好線性關(guān)系。

2.4.5 精密度試驗(yàn) 取同一供試品溶液按上述色譜條件連續(xù)進(jìn)樣5次，以峰面積計(jì)算五味子醇甲、五味子醇乙、 五味子甲素、 五味子乙素的 RSD分別為 0.46%、 0.55%、 0.67%、 0.51%。 結(jié) 果 表明本實(shí)驗(yàn)儀器的精密度良好。

2.4.6 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一供試品溶液分別于 0、4、 8、12 h 按上述色譜條件進(jìn)樣測(cè)定， 以峰面積計(jì)算五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素的 RSD分別為 1.69%、1.57%、 2.36%、1.81%。 結(jié)果表明樣品在 12 h 內(nèi)穩(wěn)定。

2.4.7 重復(fù)性試驗(yàn) 取同一批樣品， 按 “2.4.3”項(xiàng)下制備供試品溶液6份，在上述色譜條件下分別進(jìn)行 HPLC分析， 計(jì)算五味子醇甲、 五味子醇乙、五味子甲素、 五味子乙素峰面積的 RSD分別為1.67%、 3.36%、 3.65%、 2.56%。 結(jié)果表明方法重復(fù)性良好。

2.4.8 加樣回收率試驗(yàn) 分別精密稱取五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素對(duì)照品適量，加甲醇稀釋制得每1 mL含五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素分別為256.86、63.77、 25.38、58.19 μg的混合對(duì)照品溶液。精密移取已知含有量的正常紅參生脈飲樣品溶液 2 mL， 分別加入上述的混合對(duì)照品溶液 2 mL，定容至5 m L量瓶，平行制備6份供試溶液。在上述色譜條件下注入液相色譜儀，測(cè)得4個(gè)五味子木脂素的量， 結(jié)果見(jiàn)表3。

表 3 五味子木脂素回收率 （n=6）Tab.3 Recoveries of ginsenosides（ n=6）

2.4.9 結(jié)果分析 取各生脈飲制品 10mL(規(guī)格:每支裝 10mL)， 按 “2.4.3” 項(xiàng)下制備供試品溶液，在上述色譜條件下測(cè)定五味子醇甲、五味子醇乙、 五味子甲素、 五味子乙素， 結(jié)果見(jiàn)表4。

表 4 加糖紅參生脈飲制品中木脂素 （n=3）Tab.4 Content of lignans in Shengmai Oral Liquid of sweetened red ginseng （n=3）

由表4可知，加糖紅參生脈飲制劑中五味子醇甲、五味子醇乙、五味子甲素、五味子乙素的量均低于正常紅參生脈飲，除 40%加糖紅參組比 20%加糖紅參組五味子甲素量略高外，隨加糖量增加，五味子木脂素含有量相應(yīng)減少， 其中 10%加糖紅參組木脂素含有量與正常紅參組均沒(méi)有顯著性差異， 但與其他兩組有顯著性差異， 并且 20%加糖紅參組五味子醇甲含有量與 40%加糖紅參組相比較，也存在顯著差異。

3 討論

以加糖紅參為原料不但影響生脈飲制劑中人參皂苷類(lèi)成分含有量，而且對(duì)生脈飲中木脂素類(lèi)成分也有不良影響?？赡苡捎诩犹羌t參增加了藥材粗粉的黏度，影響生脈飲生產(chǎn)過(guò)程中滲漉環(huán)節(jié)，使得木脂素類(lèi)成分不能被完全浸提出來(lái)，最終造成生脈飲中五味子木脂素類(lèi)成分也相應(yīng)減少。同時(shí)，有研究表明市售與自制生脈飲質(zhì)量差異顯著［13］， 與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致，我們推測(cè)市售生脈飲所用紅參很有可能為加糖紅參。

綜上，加糖紅參不僅對(duì)其自身質(zhì)量危害嚴(yán)重，以其為原料的中藥制劑更同受其害，并造成大量資源浪費(fèi)。目前，《中國(guó)藥典》 僅規(guī)定薄層色譜檢驗(yàn)法［1］， 以此很難保證生脈飲質(zhì)量。 本研究通過(guò)實(shí)測(cè)分析，探討加糖紅參對(duì)生脈飲質(zhì)量的影響，試圖通過(guò)測(cè)定有效成分量對(duì)紅參加糖量予以間接控制，當(dāng)紅參加糖量超過(guò) 10%時(shí)， 即對(duì)生脈飲質(zhì)量造成顯著影響，為中藥制劑生脈飲質(zhì)量控制及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的完善提供依據(jù)。

［ 1 ］ 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典:2010 年版一部［S］.北京: 中國(guó)醫(yī)藥科技出版社， 2010:653-654.

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Influence of heavy sugar red ginseng on quality of Shengmai Oral Liquid

PANG Shi-feng， XU Shi-quan， CUILi-li， SUN Cheng-he， ZHANG Hao， WANG Ying-ping*
(Institute of SpecialWild Economic Animal and Plant Science， CAAS， Changchun 130112， China)

Shengmai Oral Liquid；heavy sugar red ginseng； ginsenoside； lignans； HPLC

R927.2

:A

:1001-1528(2014)02-0362-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.032

2013-04-15

吉林省科技支撐計(jì)劃 (20100926)

逄世峰 (1983—) ， 男， 研實(shí)員， 研究方向: 藥用植物質(zhì)量評(píng)價(jià)。 E-mail:psf5295@sohu.com

*通信作者: 王英平 E-mail:yingpingw@126.com