王 坤， 謝強(qiáng)勝

（山東省食品藥品檢驗(yàn)所， 山東 濟(jì)南 250101）

安宮止血顆粒的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究

王 坤， 謝強(qiáng)勝

（山東省食品藥品檢驗(yàn)所， 山東 濟(jì)南 250101）

目的 完善安宮止血顆粒 (益母草、 馬齒莧) 的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)， 以控制藥品質(zhì)量。 方法 修訂原標(biāo)準(zhǔn)中益母草薄層色譜法鑒別， 增加馬齒莧的薄層色譜鑒別； 采用 HPLC-ELSD法測(cè)定鹽酸水蘇堿， Venusil HILIC色譜柱， 流動(dòng)相為乙腈-0.2%冰醋酸 (80 ∶20) ， 體積流量 1.0 mL/min， 漂移管溫度為 90 ℃。 結(jié)果 定性鑒別方法專(zhuān)屬性強(qiáng)、 特征斑點(diǎn)清晰。 鹽酸水蘇堿進(jìn)樣量在 1.275 ～10.20 μg范圍內(nèi)， 積分值的自然對(duì)數(shù)與進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)線性關(guān)系良好， r= 0.999 5， 平均回收率 99.52%， RSD為 1.26%。 結(jié)論 本方法操作簡(jiǎn)單， 結(jié)果準(zhǔn)確， 能夠有效地控制安宮止血顆粒的質(zhì)量。

安宮止血顆粒； HPLC-ELSD； 鹽酸水蘇堿

安宮止血顆粒為山東東阿阿膠股份有限公司獨(dú)家生產(chǎn)品種。由益母草、馬齒莧二味中藥材經(jīng)過(guò)提取，濃縮至稠膏，干燥，粉碎，過(guò)篩，制成中藥顆粒劑。為了更好地控制藥品質(zhì)量，提高質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在原標(biāo)準(zhǔn)的基礎(chǔ)上修訂了薄層色譜法對(duì)益母草的鑒別， 增 加 了 馬 齒 莧 的 TLC定 性 鑒 別， 并 采 用HPLC-ELSD法， 測(cè)定益母草中鹽酸水蘇堿的量，方法簡(jiǎn)單，靈敏，重復(fù)性好。

1 儀器與試藥

Agilent1200 高 效 液 相 色 譜 儀， Mettler AE240電子天平。 乙腈、 甲醇為色譜純 (天津康科德)，無(wú)水乙醇、乙酸乙酯為分析純 (國(guó)藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司)， 薄層色譜硅膠 G預(yù)制板 (青島海洋化工廠分廠)，鹽酸水蘇堿 (購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所， 供含量測(cè)定用， 批號(hào) 110712-200508)，馬齒莧對(duì)照藥材 (企業(yè)提供)。 安宮止血顆粒由山東東阿股份有限公司生產(chǎn)， 規(guī)格為 4g/袋； 安宮止血顆粒缺益母草陰性對(duì)照、缺馬齒莧陰性對(duì)照均由山東東阿股份有限公司提供。

2 方法與結(jié)果

2.1 益母草薄層鑒別 原標(biāo)準(zhǔn)中益母草薄層鑒別項(xiàng)下供試品溶液制備繁瑣［1］， 展開(kāi)時(shí)間較長(zhǎng)， 本實(shí)驗(yàn)對(duì)其進(jìn)行驗(yàn)證并進(jìn)行修改。取本品 1 g或 1.5 g(加糖型)， 研細(xì)，加 70%乙醇 25 mL， 超聲 30 min， 取出， 放冷， 濾過(guò)， 濾液蒸干， 殘?jiān)蛹状? m L使溶解，作為供試品溶液。 另取鹽酸水蘇堿對(duì)照品， 加乙醇制成每1 mL含5 mg的溶液， 作為對(duì)照品溶液。 照薄層色譜法［1］試驗(yàn)， 吸取上述兩種溶液各 10 μL， 分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上，以丙酮-無(wú)水乙醇-鹽酸 (10 ∶6 ∶1) 為展開(kāi)劑， 展開(kāi)， 取出，晾干， 在 105 ℃加熱 15 min，放冷， 噴以稀碘化鉍鉀試液-三氯化鐵試液 (10 ∶1) 混合溶液至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置 上， 顯相同 顏色的 熒光斑 點(diǎn)［2-3］， 陰性對(duì)照無(wú)干擾。 見(jiàn)圖1。

圖1 益母草的薄層色譜鑒別圖Fig.1 TLC chromatogram of Leonuri Herba

2.2 馬 齒 莧 的 薄 層 鑒 別［4-7］取 本 品 4 g或 5 g (加糖型)， 研細(xì)，加稀鹽酸 3 mL與乙醇 25 mL，超聲處理 30 min， 濾過(guò)， 濾液蒸干， 殘?jiān)蛹状?2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取馬齒莧對(duì)照藥材 2 g， 同法制成對(duì) 照 藥材溶液［8］。 照薄層色譜法［1］試驗(yàn)， 吸取上述兩種溶液各 2 μL， 分別點(diǎn)于同一硅膠 G薄層板上， 以乙酸乙酯-丁酮-甲酸-水(5 ∶3 ∶1 ∶1) 為展開(kāi)劑，展開(kāi)，取出，晾干，噴以 0.2%茚三酮乙醇溶液，在 105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。供試品色譜中，在與對(duì)照品藥材相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)，陰性對(duì)照無(wú)干擾。見(jiàn)圖2。

2.3 鹽酸水蘇堿的測(cè)定［9-14］

2.3.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以丙基酰胺鍵合硅膠為填充劑； 乙腈-0.2%冰醋酸溶液 (80 ∶20) 為流動(dòng)相； 蒸發(fā)光散射檢測(cè)器檢測(cè)； 柱溫35 ℃，體積流量 1.0 mL/min。 理論板數(shù)按鹽酸水蘇堿峰計(jì)算為 15 192。 色譜圖見(jiàn)圖 3。

圖2 馬齒莧的薄層色譜鑒別圖Fig.2 TLC chrom atogram of Portulacae Herba

2.3.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)取鹽酸水蘇堿12.75 mg， 至 25 mL量瓶，加 70%乙醇定容， 搖勻， 即得 0.51 mg/mL的對(duì)照品溶液。

2.3.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項(xiàng)下本品，研細(xì)， 取約 0.5 g(加糖型 0.75 g)， 精密稱(chēng)定， 置具塞錐形瓶中， 精密加入70%乙醇25 mL， 稱(chēng)定質(zhì)量， 超 聲 處 理 ( 功 率 300 W， 頻 率 40 kHz) 45 min， 取出， 放冷， 再稱(chēng)定質(zhì)量， 用 70%乙醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。

2.3.4 陰性溶液的制備 取不加益母草的空白樣品按照 “2.3.3” 項(xiàng)下方法， 制成溶液， 即得。

2.3.5 線性關(guān)系的考察 分別精密吸取鹽酸水蘇堿對(duì)照品溶液 2.5、 5、 10、 15、20 μL， 注入液相色譜儀，測(cè)其峰面積，以峰面積的自然對(duì)數(shù)為縱坐標(biāo)，對(duì)照品進(jìn)樣量的自然對(duì)數(shù)為橫坐標(biāo)，計(jì)算，結(jié)果回歸方程為 y=1.213 6x+7.217 3， r=0.999 5。鹽酸水蘇堿進(jìn)樣量在 1.275 ～10.200 μg范圍內(nèi)，進(jìn)樣量自然對(duì)數(shù)與峰面積積分值自然對(duì)數(shù)呈良好的線性關(guān)系。

圖3 鹽酸水蘇堿 HPLC色譜圖Fig.3 HPLC chromatograms of stachydrine hyd rochloride

2.3.6 精密度試驗(yàn) 精密吸取上述對(duì)照品溶液 10μL， 連續(xù)進(jìn)樣 6 次， 測(cè)得峰面積積分值。 峰面積積分值自然對(duì)數(shù)的 RSD為 0.029%， 說(shuō)明儀器精密度良好。

2.3.7 穩(wěn)定性試驗(yàn) 取同一批樣品按 “2.3.3”項(xiàng)方法制備， 分別于配制后 0、 2、 4、 6、 12 h， 精密吸取10 μL， 注入液相色譜儀， 測(cè)定峰面積， 計(jì)算峰面積積分值的自然對(duì)數(shù)及其平均值。結(jié)果鹽酸水蘇堿 RSD為 0.039%。 表明樣品在 12 h 內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.3.8 重 復(fù) 性 試 驗(yàn) 取 同 一 批 樣 品 ( 批 號(hào)110401)6 份，按 “2.3.3”項(xiàng)方法制備 6 份。 精密吸取10 μL，注入液相色譜儀， 計(jì)算，結(jié)果鹽酸水蘇堿平均含有量為 72.6 mg/袋， RSD為 1.02%。

2.3.9 加樣回收率試驗(yàn) 取同一批樣品 (批號(hào)110401)6 份各 0.25 g， 精密稱(chēng)定，置于具塞錐形瓶中， 分別加入對(duì)照品溶液 (鹽酸水蘇堿 1.06 mg/mL)5 m L， 再精密加入70%乙醇 20 mL， 稱(chēng)定質(zhì)量， 超聲處理 (功率 300 W， 頻率 40 kHz)45 min， 放冷，再稱(chēng)定質(zhì)量，用 70%乙醇溶液補(bǔ)足減失的質(zhì)量，搖勻，濾過(guò)，取續(xù)濾液，即得。精密吸取 10 μL， 注入液相色譜儀， 進(jìn)行測(cè)定， 計(jì)算回收率。結(jié)果見(jiàn)表1。

表 1 回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）Tab.1 Results of recovery tests（n=6）

2.3.10 樣品測(cè)定 分別精密吸取對(duì)照品溶液 5 μL、 10 μL與供試品溶液 10 μL， 注入液相色譜儀，測(cè)定，以外標(biāo)兩點(diǎn)法對(duì)數(shù)方程計(jì)算，即得。結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 鹽酸水蘇堿測(cè)定結(jié)果Tab.2 Results of the determ ination for astragaloside

3 討論

3.1 提取溶劑、 提 取方式 及取樣量考察［15-16］本實(shí)驗(yàn)用甲醇、 70%乙醇、 50%乙醇作為溶媒， 超聲處理 45 min， 對(duì)安宮止血顆粒中鹽酸水蘇堿的提取率進(jìn)行考察， 結(jié)果 70%乙醇提取得率高于甲醇和50%乙醇， 而且 50%乙醇提取時(shí)雜質(zhì)峰較多且提取樣品不易濾過(guò)， 因此確定提取溶劑 70%乙醇。

3.2 TLC鑒別條件考察 對(duì)益母草、 馬齒莧薄層鑒別進(jìn)行耐用性試驗(yàn)，對(duì)不同溫濕度與不同薄層板按上述方法進(jìn)行展開(kāi)，均取得良好展開(kāi)效果且陰性樣品無(wú)干擾，因而益母草、馬齒莧薄層色譜鑒別按上述檢測(cè)方法適用范圍廣。

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Quality standard for Angong Zhixue G ranules

WANG Kun， XIE Qiang-sheng
(Shandong Provincial Institute for Food and Drug Control， Jinan 250101， China)

Angong Zhixue Granules； HPLC-ELSD；stachydrine hydrochloride

927.2

:A

:1001-1528(2014)02-0318-03

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.022

2013-03-07

王 坤 (1971—)， 男， 副主任藥師， 主要從事藥物檢驗(yàn)研究。 Tel:(0531)81216510

［17］ 焦 燕， 王英鋒， 劉鎖蘭.LC-MS/MS 法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地半枝蓮中野黃芩苷和芹菜素含量［J］.藥物分析雜志，2009， 29(9):1451-1453.