張紅琳

摘 要：以石油醚、乙酸乙酯、丙酮、乙醇和水5種溶劑對煙草根莖的平行提取物及順序提取物為材料，研究其對辣椒茶黃螨的觸殺毒力。試驗結(jié)果表明，在不同溶劑的平行提取物及順序提取物中，分別以乙醇提取物對辣椒茶黃螨的致死率最高，48 h校正死亡率分別為89.56%和81.77%，分別顯著高于其他溶劑處理；乙醇平行提取物及順序提取物對辣椒茶黃螨的致死中濃度分別為0.935 7和1.100 8 mg/mL，顯著高于對照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，乙醇提取物對辣椒茶黃螨的毒殺效果較噠螨酮差。

關(guān)鍵詞：煙草根莖；辣椒茶黃螨；殺螨活性

中圖分類號：S435.418.2 文獻(xiàn)標(biāo)識碼：A 文章編號：1001-3547（2014）06-0074-04

茶黃螨（Polyphago tarsonemus Latus）又名側(cè)多食跗線螨，屬蜱螨目跗線螨科，是辣椒上為害最為嚴(yán)重的一類害螨[1]。其以刺吸式口器吸取植物汁液，為害植物的葉、花、果實、球莖、塊根等，其個體小，分布廣，繁殖快，世代重疊，每年田間可發(fā)生20代以上，且適應(yīng)性強(qiáng)，對植物特別是經(jīng)濟(jì)作物如辣椒、茄子、番茄、豇豆、菜豆、黃瓜等造成了不可估量的經(jīng)濟(jì)損失[2]。而化學(xué)農(nóng)藥的防治，將不可避免地產(chǎn)生3R（抗性Resistance、殘留Residue和再猖獗Resurgence）等問題[3]。同時，辣椒作為人們常備的食用原料，化學(xué)農(nóng)藥的大量使用將嚴(yán)重影響它的消費市場[4]。因此，生物防治與生物農(nóng)藥特別是天然產(chǎn)物農(nóng)藥的使用給辣椒茶黃螨的防治提供了廣闊的發(fā)展空間[5]。早在20世紀(jì)初，除蟲菊、煙草、魚藤等植物已被作為天然產(chǎn)物農(nóng)藥進(jìn)行研究開發(fā)，在21世紀(jì)已發(fā)展成為成熟的商品化制劑廣泛使用，同時今天國內(nèi)天然產(chǎn)物對螨類控制效果的研究也取得了很大進(jìn)展，吳文君等[6]報道了殺蟲植物苦皮藤的毒殺成分，丁偉等[7]、吳靜等[8]、張永強(qiáng)等[9]報道了姜黃（Curcuma longa）、丁香（Syringa vulgaris）和黃花蒿（Artemisia annua）對朱砂葉螨有明顯的生物活性；曹揮等[10]報道了采用生化方法測定地膚三氯甲烷提取物對山楂葉螨體內(nèi)谷胱甘肽-S-轉(zhuǎn)移酶、羧酸酯酶、單胺氧化酶、Ca2+-ATP酶活性的影響，使螨體內(nèi)神經(jīng)胺積累，造成神經(jīng)傳遞的阻斷從而導(dǎo)致螨體的死亡等。此外國內(nèi)外專家學(xué)者研究報道了印楝[11]，煙草[12]、瑞香狼毒[13]等植物源活性成分的殺螨活性，為開發(fā)天然產(chǎn)物殺螨劑奠定了研究基礎(chǔ)。

煙草（Nicotiana tabacum）全株都含煙堿，以葉中含量最多，約占全株含量的64%，其余，根占13%、莖18%、花5%，煙葉用于煙絲生產(chǎn)，根與莖對于煙草行業(yè)生產(chǎn)幾乎不再有經(jīng)濟(jì)價值。煙草產(chǎn)地豐富，全國均有種植，特別是云南、貴州、四川等地有大量基地進(jìn)行栽培。煙草中有效成分煙堿的殺蟲活性已有許多研究報道，并且也有很多以煙堿化學(xué)結(jié)構(gòu)為模板進(jìn)行開發(fā)的殺蟲劑產(chǎn)品，但有關(guān)煙草在殺螨活性或以煙堿為模板開發(fā)殺螨活性化合的研究還鮮有報道，尤其是針對辣椒茶黃螨的研究。為了明確該植物對辣椒茶黃螨的殺螨活性，本試驗就煙草根莖提取物對辣椒茶黃螨的室內(nèi)生物活性進(jìn)行了測定。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

①供試螨類 茶黃螨（Polyphago tarsonemus Latus），采自重慶市忠縣田間的辣椒苗上，為在人工氣候室內(nèi)（25±1）℃、 RH（相對濕度）60%～80%條件下，用盆栽辣椒苗上飼養(yǎng)了多年所獲得的敏感品系。

②供試煙草根莖提取物 煙草（Nicotiana tabacum）購于忠縣農(nóng)貿(mào)市場，取根、莖，切片，陰干，粉碎機(jī)粉碎，備用。

供試煙草根莖平行提取物：稱取5份上述粉末，每份100 g，分別裝入5個10 L的燒瓶，以6∶1的比例依次分別向5個磨口瓶中加入600 mL的水、丙酮、無水乙醇、乙酸乙酯和石油醚，密閉，每日振搖3次，于25℃浸漬1周。過濾，將水浸液加熱濃縮為浸膏狀，丙酮、無水乙醇、乙酸乙酯和石油醚浸提液旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)為浸膏狀，獲得5種溶劑的植物平行提取物浸膏，4℃存放于冰箱內(nèi)備用。

供試煙草根莖順序提取物：稱取100 g煙草根莖粉末，先用600 mL石油醚30～60℃冷浸1周，過濾，殘渣備用，濾液濃縮揮發(fā)后獲得石油醚提取物浸膏，4℃存放于冰箱內(nèi)備用；過濾后的殘渣再以600 mL乙醇冷浸1周，過濾，將濾液濃縮定容獲得乙醇順序提取物浸膏；殘渣再按序用丙酮、乙醇和水重復(fù)上述操作，分別獲得丙酮、乙醇和水的順序提取物浸膏。

稱取上述平行提取物與順序提取物浸膏少量，加入3%的吐溫-80，以蒸餾水稀釋配制成5 mg/mL溶液，對供試對象進(jìn)行生物測定。

1.2 試驗方法

①茶黃螨的生物測定 參照FAO推薦的測定螨類抗藥性的標(biāo)準(zhǔn)方法——玻片浸漬法[14]進(jìn)行并改進(jìn)。將載玻片一端貼上雙面膠帶，將供試螨背部粘于雙面膠帶上，每玻片40頭，于溫度（26±1）℃、RH 60%～80%的環(huán)境下放置4 h，用解剖鏡檢查，剔除死亡和不活潑的個體，記載活螨數(shù)。而后，將帶螨的玻片一端浸入相應(yīng)濃度的藥液中，浸漬5 s后取出，用濾紙吸除螨體及其周圍多余藥液，同飼養(yǎng)條件下放置3 d，每24 h檢查一次。用毛筆輕觸螨體5次，以螨足均不動者為死亡，試驗重復(fù)3次。以清水加相應(yīng)量吐溫-80的溶液為對照。進(jìn)行毒力測定時，每種藥液按預(yù)試梯度配制5個濃度，每個濃度重復(fù)3次，計算致死中濃度。

②數(shù)據(jù)處理 采用校正死亡率來評判各提取物對茶黃螨的生物活性，計算方法如下：校正死亡率（%）=[（處理組死亡率-對照組死亡率）/（1-對照組死亡率）]×100%。校正死亡率經(jīng)反正弦轉(zhuǎn)化后，進(jìn)行方差分析，比較各處理結(jié)果間的差異。由SPSS 14.0軟件完成One-Way ANOVA之Duncan's檢驗和試驗數(shù)據(jù)的方差分析[15]。

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草根莖平行提取物對辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1看出，水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚粗提物對辣椒茶黃螨的48 h校正死亡率分別為57.35%、89.56%、76.03%、58.38%和40.87%。其中，乙醇平行提取物對辣椒茶黃螨的殺螨活性最強(qiáng)。

2.2 煙草根莖順序提取物對辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1、2看出，相同處理時間下，煙草根莖平行提取物對辣椒茶黃螨的致死活性高于順序提取物。在煙草根莖不同溶劑平行提取物中，乙醇和丙酮提取物對茶黃螨的致死活性較好，處理48 h校正死亡率分別為89.56%和76.03%；順序提取物中，乙醇和丙酮提取物對茶黃螨的致死活性較好，處理

48 h校正死亡率分別為81.77%和73.27%，與同組其他溶劑的提取物間存在顯著差異（P<0.05），且乙醇順序提取物對茶黃螨的致死活性顯著高于丙酮順序提取物。

2.3 煙草根莖乙醇平行、順序提取物與噠螨酮對辣椒茶黃螨的毒力回歸直線

處理48 h后的5 mg/mL乙醇平行提取物、順序提取物對茶黃螨具有明顯的致死作用。為了進(jìn)一步明確平行提取物與順序提取物間的毒力差異情況，需要做進(jìn)一步的毒力測定，以致死中濃度（LC50）來比較2種溶劑提取物的毒力差異，并以15%噠螨酮乳油3 000倍液為對照，結(jié)果如表3所示。

從表3看出，2種提取物中，對辣椒茶黃螨毒力較強(qiáng)的是乙醇平行提取物，其LC50 為0.935 7 mg/mL，其致死中濃度大于對照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，故其對辣椒茶黃螨的毒殺效果低于噠螨酮。

3 討論與結(jié)論

煙草根莖化學(xué)成分豐富，主要為煙堿、酚類、有機(jī)酸類、醛酮類、萜烯類及酯醇類等重要物質(zhì)，其中，酚類物質(zhì)具有40余種，占有較大比例，主要包括苯酚、間甲苯酚、對甲苯酚、鄰甲苯酚、苯二酚、間苯二酚、兒茶酚等，而某些酚類物質(zhì)特有的化學(xué)結(jié)構(gòu)如消螨酚（Dinex）等多具有較強(qiáng)的殺螨活性。據(jù)相似相容原理，醇類對酚的溶解性相對較高，同時，乙醇極性大，對生物堿類也有較好的溶解性，其提取物中含有大量生物堿及酚類物質(zhì)，正好闡釋了乙醇提取物殺螨活性較的原因。

煙草、除蟲菊、毒魚藤合稱為“三大植物性農(nóng)藥”，將煙草根莖作為植物源殺螨藥物的開發(fā)，至今鮮有報導(dǎo)；而將煙草根莖作為植物源殺螨藥物，除了具有原料易得、浸提工藝簡單等優(yōu)點外，還具有低毒、高效、無殘留、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點，加之煙草種植廣泛，將其根莖作為植物源農(nóng)藥進(jìn)行開發(fā)具有很大的潛力市場和資源。

對煙草根莖不同溶劑提取物的生物活性測定結(jié)果表明，煙草根莖殺螨活性物質(zhì)主要存在乙醇提取物中，以乙醇平行提取物的效果較為顯著；另從表1、2還可以看出，在乙醇之外的溶劑提取物仍然具有一定的殺螨活性，證實了煙草根莖中含對茶黃螨具有殺螨生物活性的物質(zhì)不止一種，且極性大小不同。

煙草根莖中成分較為復(fù)雜，對辣椒茶黃螨具殺螨活性的物質(zhì)含量相對過低，雖然乙醇平行提取物殺螨活性較好，但還是低于藥物噠螨酮活性。只有更深層次地將活性成分結(jié)構(gòu)化合物進(jìn)行分離、鑒定，才能充分證實殺螨活性物質(zhì)歸屬，更有利于在下一步對煙草根莖中有效成分作為植物源活性殺螨劑的開發(fā)中奠定基礎(chǔ)理論。

參考文獻(xiàn)

[1] 袁翼翔.辣椒茶黃螨的發(fā)生與防治[J].現(xiàn)代農(nóng)業(yè)科技，2011（14）：191-192.

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[8] 吳靜，丁偉，張永強(qiáng)，等.黃花蒿（Artemisia annua L.）提取物對兩種病原真菌的生物活性[J].農(nóng)藥，2007，46（10）：713-715，718.

[9] 張永強(qiáng)，丁偉，田麗，等.黃花蒿提取物對柑橘全爪螨的生物活性[J].中國農(nóng)業(yè)科學(xué)，2009，42（6）：44-47.

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[15] Finnery D J. Probit Analysis[M]. London： Cambridge University Press， 1987： 230-269.

2 結(jié)果與分析

2.1 煙草根莖平行提取物對辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1看出，水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚粗提物對辣椒茶黃螨的48 h校正死亡率分別為57.35%、89.56%、76.03%、58.38%和40.87%。其中，乙醇平行提取物對辣椒茶黃螨的殺螨活性最強(qiáng)。

2.2 煙草根莖順序提取物對辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1、2看出，相同處理時間下，煙草根莖平行提取物對辣椒茶黃螨的致死活性高于順序提取物。在煙草根莖不同溶劑平行提取物中，乙醇和丙酮提取物對茶黃螨的致死活性較好，處理48 h校正死亡率分別為89.56%和76.03%；順序提取物中，乙醇和丙酮提取物對茶黃螨的致死活性較好，處理

48 h校正死亡率分別為81.77%和73.27%，與同組其他溶劑的提取物間存在顯著差異（P<0.05），且乙醇順序提取物對茶黃螨的致死活性顯著高于丙酮順序提取物。

2.3 煙草根莖乙醇平行、順序提取物與噠螨酮對辣椒茶黃螨的毒力回歸直線

處理48 h后的5 mg/mL乙醇平行提取物、順序提取物對茶黃螨具有明顯的致死作用。為了進(jìn)一步明確平行提取物與順序提取物間的毒力差異情況，需要做進(jìn)一步的毒力測定，以致死中濃度（LC50）來比較2種溶劑提取物的毒力差異，并以15%噠螨酮乳油3 000倍液為對照，結(jié)果如表3所示。

從表3看出，2種提取物中，對辣椒茶黃螨毒力較強(qiáng)的是乙醇平行提取物，其LC50 為0.935 7 mg/mL，其致死中濃度大于對照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，故其對辣椒茶黃螨的毒殺效果低于噠螨酮。

3 討論與結(jié)論

煙草根莖化學(xué)成分豐富，主要為煙堿、酚類、有機(jī)酸類、醛酮類、萜烯類及酯醇類等重要物質(zhì)，其中，酚類物質(zhì)具有40余種，占有較大比例，主要包括苯酚、間甲苯酚、對甲苯酚、鄰甲苯酚、苯二酚、間苯二酚、兒茶酚等，而某些酚類物質(zhì)特有的化學(xué)結(jié)構(gòu)如消螨酚（Dinex）等多具有較強(qiáng)的殺螨活性。據(jù)相似相容原理，醇類對酚的溶解性相對較高，同時，乙醇極性大，對生物堿類也有較好的溶解性，其提取物中含有大量生物堿及酚類物質(zhì)，正好闡釋了乙醇提取物殺螨活性較的原因。

煙草、除蟲菊、毒魚藤合稱為“三大植物性農(nóng)藥”，將煙草根莖作為植物源殺螨藥物的開發(fā)，至今鮮有報導(dǎo)；而將煙草根莖作為植物源殺螨藥物，除了具有原料易得、浸提工藝簡單等優(yōu)點外，還具有低毒、高效、無殘留、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點，加之煙草種植廣泛，將其根莖作為植物源農(nóng)藥進(jìn)行開發(fā)具有很大的潛力市場和資源。

對煙草根莖不同溶劑提取物的生物活性測定結(jié)果表明，煙草根莖殺螨活性物質(zhì)主要存在乙醇提取物中，以乙醇平行提取物的效果較為顯著；另從表1、2還可以看出，在乙醇之外的溶劑提取物仍然具有一定的殺螨活性，證實了煙草根莖中含對茶黃螨具有殺螨生物活性的物質(zhì)不止一種，且極性大小不同。

煙草根莖中成分較為復(fù)雜，對辣椒茶黃螨具殺螨活性的物質(zhì)含量相對過低，雖然乙醇平行提取物殺螨活性較好，但還是低于藥物噠螨酮活性。只有更深層次地將活性成分結(jié)構(gòu)化合物進(jìn)行分離、鑒定，才能充分證實殺螨活性物質(zhì)歸屬，更有利于在下一步對煙草根莖中有效成分作為植物源活性殺螨劑的開發(fā)中奠定基礎(chǔ)理論。

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2 結(jié)果與分析

2.1 煙草根莖平行提取物對辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1看出，水、乙醇、丙酮、乙酸乙酯和石油醚粗提物對辣椒茶黃螨的48 h校正死亡率分別為57.35%、89.56%、76.03%、58.38%和40.87%。其中，乙醇平行提取物對辣椒茶黃螨的殺螨活性最強(qiáng)。

2.2 煙草根莖順序提取物對辣椒茶黃螨的室內(nèi)觸殺毒力

從表1、2看出，相同處理時間下，煙草根莖平行提取物對辣椒茶黃螨的致死活性高于順序提取物。在煙草根莖不同溶劑平行提取物中，乙醇和丙酮提取物對茶黃螨的致死活性較好，處理48 h校正死亡率分別為89.56%和76.03%；順序提取物中，乙醇和丙酮提取物對茶黃螨的致死活性較好，處理

48 h校正死亡率分別為81.77%和73.27%，與同組其他溶劑的提取物間存在顯著差異（P<0.05），且乙醇順序提取物對茶黃螨的致死活性顯著高于丙酮順序提取物。

2.3 煙草根莖乙醇平行、順序提取物與噠螨酮對辣椒茶黃螨的毒力回歸直線

處理48 h后的5 mg/mL乙醇平行提取物、順序提取物對茶黃螨具有明顯的致死作用。為了進(jìn)一步明確平行提取物與順序提取物間的毒力差異情況，需要做進(jìn)一步的毒力測定，以致死中濃度（LC50）來比較2種溶劑提取物的毒力差異，并以15%噠螨酮乳油3 000倍液為對照，結(jié)果如表3所示。

從表3看出，2種提取物中，對辣椒茶黃螨毒力較強(qiáng)的是乙醇平行提取物，其LC50 為0.935 7 mg/mL，其致死中濃度大于對照噠螨酮的0.133 6 mg/mL，故其對辣椒茶黃螨的毒殺效果低于噠螨酮。

3 討論與結(jié)論

煙草根莖化學(xué)成分豐富，主要為煙堿、酚類、有機(jī)酸類、醛酮類、萜烯類及酯醇類等重要物質(zhì)，其中，酚類物質(zhì)具有40余種，占有較大比例，主要包括苯酚、間甲苯酚、對甲苯酚、鄰甲苯酚、苯二酚、間苯二酚、兒茶酚等，而某些酚類物質(zhì)特有的化學(xué)結(jié)構(gòu)如消螨酚（Dinex）等多具有較強(qiáng)的殺螨活性。據(jù)相似相容原理，醇類對酚的溶解性相對較高，同時，乙醇極性大，對生物堿類也有較好的溶解性，其提取物中含有大量生物堿及酚類物質(zhì)，正好闡釋了乙醇提取物殺螨活性較的原因。

煙草、除蟲菊、毒魚藤合稱為“三大植物性農(nóng)藥”，將煙草根莖作為植物源殺螨藥物的開發(fā)，至今鮮有報導(dǎo)；而將煙草根莖作為植物源殺螨藥物，除了具有原料易得、浸提工藝簡單等優(yōu)點外，還具有低毒、高效、無殘留、不易產(chǎn)生抗性等優(yōu)點，加之煙草種植廣泛，將其根莖作為植物源農(nóng)藥進(jìn)行開發(fā)具有很大的潛力市場和資源。

對煙草根莖不同溶劑提取物的生物活性測定結(jié)果表明，煙草根莖殺螨活性物質(zhì)主要存在乙醇提取物中，以乙醇平行提取物的效果較為顯著；另從表1、2還可以看出，在乙醇之外的溶劑提取物仍然具有一定的殺螨活性，證實了煙草根莖中含對茶黃螨具有殺螨生物活性的物質(zhì)不止一種，且極性大小不同。

煙草根莖中成分較為復(fù)雜，對辣椒茶黃螨具殺螨活性的物質(zhì)含量相對過低，雖然乙醇平行提取物殺螨活性較好，但還是低于藥物噠螨酮活性。只有更深層次地將活性成分結(jié)構(gòu)化合物進(jìn)行分離、鑒定，才能充分證實殺螨活性物質(zhì)歸屬，更有利于在下一步對煙草根莖中有效成分作為植物源活性殺螨劑的開發(fā)中奠定基礎(chǔ)理論。

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