胡伊樂，楊為民，涂心明

維生素B12對(duì)疼痛的抑制作用

InhibitoryEffectofVitaminB12onPain

胡伊樂，楊為民，涂心明

目的探討維生素B12對(duì)疼痛抑制的部位。方法制備疼痛模型大鼠，分別在大鼠靜脈蛛網(wǎng)膜下腔注射維生素B12，通過熱敏反應(yīng)觀察其疼痛抑制的效果。結(jié)果維生素B12在靜脈注射與蛛網(wǎng)膜下腔注射都有一定的鎮(zhèn)痛作用，在蛛網(wǎng)膜下腔的抑制作用更強(qiáng)。結(jié)論維生素B12可以通過保護(hù)神經(jīng)鞘起到疼痛抑制的作用，并且中樞效果更好。

維生素B12；疼痛抑制；蛛網(wǎng)膜下腔

維生素B12是一種由含鈷的卟啉類化合物組成的B族維生素，因其由4個(gè)還原的吡咯環(huán)連在一起變成為一個(gè)咕啉大環(huán)，構(gòu)成維生素B12分子的核心，又被稱鈷胺素或氰鈷素，常溫下為淺紅色的針狀結(jié)晶，易溶于水和乙醇，具有促進(jìn)甲基轉(zhuǎn)移、保護(hù)葉酸在細(xì)胞內(nèi)的轉(zhuǎn)移和貯存、維護(hù)神經(jīng)系統(tǒng)健康等作用[1]。在臨床應(yīng)用中發(fā)現(xiàn)維生素B12在治療口腔潰瘍中不僅療效優(yōu)于傳統(tǒng)的維生素B2，而且對(duì)潰瘍引起的疼痛具有明顯的抑制功能[2]。為探討維生素B12對(duì)疼痛抑制的實(shí)際效果及機(jī)制，將維生素B12分別注入疼痛模型大鼠的靜脈與蛛網(wǎng)膜下腔，通過熱敏試驗(yàn)觀察其對(duì)疼痛的抑制作用。

1 資料與方法

1.1材料維生素B12注射液購(gòu)自山東方明藥業(yè)有限公司；成年Sprague-Dawley大鼠，體質(zhì)量250～350 g，購(gòu)自鄭州大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心；水合氯醛購(gòu)自天津市科密歐化學(xué)試劑開發(fā)有限公司；鼠爪熱輻射刺激測(cè)痛儀購(gòu)自意大利Ugo Basile公司。

1.2方法

1.2.1疼痛模型大鼠的制備 為驗(yàn)證維生素B12對(duì)疼痛的抑制作用，先制作大鼠坐骨神經(jīng)慢性壓迫疼痛模型，此模型由Bennett和Xie于1988年創(chuàng)建開發(fā)，在疼痛學(xué)研究中被廣泛應(yīng)用。

1.2.2疼痛模型大鼠制備方法 取體質(zhì)量250～350 g的成年雄性SD大鼠，按3 mL/kg腹腔注射10%水合氯醛進(jìn)行麻醉，固定后備皮，聚維酮碘溶液消毒皮膚，切開后側(cè)大腿皮膚，鈍性分離股四頭肌暴露坐骨神經(jīng)，用6號(hào)外科縫線圍繞坐骨神經(jīng)干間距1～2 mm做4個(gè)輕度結(jié)扎環(huán)，為防止結(jié)扎過緊損害神經(jīng)結(jié)扎強(qiáng)度以引起小腿肌肉輕度顫動(dòng)反應(yīng)為宜。術(shù)后逐層縫合切口后注意消毒。

1.2.3疼痛模型大鼠的制備模型成功判斷標(biāo)準(zhǔn) 熱刺激縮足反射潛伏期(PWTL)為模型大鼠的熱痛閾，為驗(yàn)證疼痛模型大鼠的模型制備是否成功，利用鼠爪熱輻射刺激測(cè)痛儀測(cè)定大鼠足底部。檢測(cè)時(shí)，為保證數(shù)值的客觀性先讓大鼠適應(yīng)20 min，調(diào)整好儀器刺激強(qiáng)度后，將大鼠置于檢測(cè)儀上，啟動(dòng)熱源緩慢對(duì)鼠爪施加熱刺激，當(dāng)達(dá)到一定熱值時(shí)大鼠會(huì)出現(xiàn)踮腳、回縮、舔足等動(dòng)作，測(cè)痛儀將自動(dòng)記錄大鼠反應(yīng)時(shí)間，此時(shí)間即為大鼠的PWTL，即熱痛閾。如果動(dòng)物損傷足PWTL降低約30%即提示有熱痛敏，表明疼痛模型大鼠制備成功。

1.2.4靜脈注射維生素B12取疼痛模型大鼠與普通大鼠各6只，分別按照600 pg/g靜脈注射維生素B12，注射完成后自5 min起每隔5 min測(cè)定1次大鼠的PWTL。

1.2.5蛛網(wǎng)膜下腔注射維生素B12取疼痛模型大鼠與普通大鼠各6只，10%水合氯醛麻醉后，取L4、5或L5、6椎間隙，在顯微解剖鏡下，使用100 μL微量注射器刺入蛛網(wǎng)膜下腔按照100 pg/g注射維生素B12，穿刺成功可見典型鼠尾甩動(dòng)，注射完畢，留針2 min，自注射后5 min起每隔5 min測(cè)定1次大鼠的PWTL。

1.2.6統(tǒng)計(jì)學(xué)分析 用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行t檢驗(yàn)和方差分析，以P﹤0.05為有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

疼痛模型大鼠靜脈注射維生素B12后，與對(duì)照組大鼠相比熱敏反應(yīng)時(shí)間在10 min時(shí)開始延長(zhǎng)，25～35 min時(shí)延長(zhǎng)最為明顯(統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示P值為0.37)，40 min時(shí)開始縮短，結(jié)果顯示維生素B12對(duì)疼痛的抑制在10 min時(shí)起效，30 min時(shí)達(dá)到高峰，40 min時(shí)開始衰退。疼痛模型大鼠蛛網(wǎng)膜下腔注射維生素B12后，與對(duì)照組大鼠相比熱敏反應(yīng)時(shí)間的改變與靜脈注射基本相同，但是在25～35 min時(shí)延長(zhǎng)較靜脈注射更為明顯(統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示P<0.01)，結(jié)果證明在蛛網(wǎng)膜下腔注射維生素B12后鎮(zhèn)痛效果更為明顯。

3 討論

維生素B12屬水溶性含鈷維生素，是人體造血功能中不可缺少的物質(zhì)，缺乏時(shí)主要影響造血系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)，具有治療惡性貧血，促進(jìn)維生素A在肝中的儲(chǔ)存，促進(jìn)細(xì)胞發(fā)育成熟和機(jī)體代謝，抗脂肪肝等作用。在機(jī)體內(nèi)的作用機(jī)理為通過甲基鈷胺間接參與胸腺嘧啶脫氧核苷酸合成，缺乏時(shí)可致葉酸缺乏阻礙DNA的合成，導(dǎo)致巨幼紅細(xì)胞貧血[3]。此外它還具有維持有鞘神經(jīng)纖維正常結(jié)構(gòu)的功能，通過甲基丙二酸轉(zhuǎn)變?yōu)殓晁?，參與三羧循環(huán)，缺乏時(shí)也可影響神經(jīng)髓鞘脂類的合成。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示疼痛模型大鼠靜脈注射維生素B12后，大鼠的耐熱敏試驗(yàn)從10 min時(shí)起效，30 min時(shí)達(dá)到高峰，40 min時(shí)開始衰退，證明維生素B12具有疼痛的抑制作用。蛛網(wǎng)膜下腔注射后熱敏反應(yīng)時(shí)間的改變與靜脈注射基本相同，但是對(duì)疼痛的抑制作用明顯高于靜脈注射組，證明維生素B12的鎮(zhèn)痛作用是通過直接作用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)而起作用的，其外周鎮(zhèn)痛的作用機(jī)理為通過維持有鞘神經(jīng)纖維正常結(jié)構(gòu)的功能來實(shí)現(xiàn)的，其中樞鎮(zhèn)痛作用機(jī)理目前尚不清楚，可能與催化Glu轉(zhuǎn)變?yōu)榧谆鵄sp的甲基天冬氨酸變位酶、催化甲基丙二酰CoA轉(zhuǎn)變?yōu)殓牾oA的甲基丙二酰CoA變位酶有關(guān)[4]。雖然目前維生素B12對(duì)疼痛的抑制的中樞作用機(jī)理尚不清楚，如果能在理論上有進(jìn)一步的突破，廣泛應(yīng)用于臨床后將可能使疼痛患者擺脫阿片類藥物的依賴，為疼痛的治療提供另一種思路。

[1]陳楠，黃巖，周麗娜.復(fù)方維生素B12溶液治療口腔潰瘍的臨床體會(huì)[J].中國(guó)社區(qū)醫(yī)師醫(yī)學(xué)專業(yè)，2012，14(321)：145.

[2]吳春根，何安慰.硬膜外注射甲基維生素B12治療周圍神經(jīng)脫髓鞘病變臨床觀察[J].海軍醫(yī)學(xué)雜志，2012，33(4)：219-222.

[3]羅培林.綜合療法治療頑固性口腔潰瘍203例[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，19(11)：124-125.

[4]韋寶偉，劉布鳴，陳力力，等.復(fù)方苯佐卡因凝膠治療豚鼠口腔潰瘍的實(shí)驗(yàn)研究[J].實(shí)用口腔醫(yī)學(xué)雜志，2011，27(5)：693-695.

2014-07-19

河南科技大學(xué)醫(yī)學(xué)院，河南洛陽 471003

胡伊樂(1973-)，男，河南洛陽人，副教授，從事疼痛學(xué)研究工作。

R977.2+2,R339.11

B

1672-688X(2014)03-0175-02