董占軍 韓桂茹 李 桂

(河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050051)

制劑與質(zhì)量控制

頸復(fù)康顆粒的一板多信息薄層鑒別研究

董占軍 韓桂茹△李 桂

(河北省人民醫(yī)院藥學(xué)部，河北 石家莊 050051)

黃柏；葛根；白芍藥；丹參；色譜法；薄層；分析

頸復(fù)康顆粒為部頒標(biāo)準(zhǔn)收載的品種，由黃芪、黨參、丹參、白芍藥、生地黃、石決明、威靈仙、葛根、黃柏、川芎、乳香、沒藥、羌活等21味中藥組成。特點(diǎn)是藥味多，每味藥材的劑量低，而且還是提取制劑，影響了薄層鑒別增訂，所以原標(biāo)準(zhǔn)項(xiàng)下僅收載了2味藥材的薄層鑒別(黃柏和芍藥苷)，無定量測(cè)定指標(biāo)[1]。后被收入《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版一部，薄層鑒別修訂為4項(xiàng)(黃柏、黃芪甲苷、芍藥苷和丹參素鈉)，并收載了葛根素的含量測(cè)定[2]。4項(xiàng)鑒別要制備4種供試品溶液，且制備程序繁瑣、復(fù)雜，用時(shí)約12 h，花費(fèi)對(duì)人體有害的溶劑430 mL。鑒別增訂率僅19%，81%的藥材難以控制投料情況，影響了制劑的可控性。雖查閱到該制劑中小檗堿、芍藥苷、葛根素和芍藥苷含量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道[3-5]，但都未收入質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。未查閱到頸復(fù)康顆粒中多味藥材的快速薄層鑒別研究。針對(duì)上述不足，我們對(duì)頸復(fù)康顆粒進(jìn)行了一板多信息薄層鑒別研究，獲得3塊薄層板上鑒別9味藥材鑒別結(jié)果，且斑點(diǎn)清晰。鑒別增訂率提升到42.85%，制劑可控性提高。

1 材料與方法

1.1 藥材及試劑 頸復(fù)康顆粒(承德頸復(fù)康藥業(yè)集團(tuán)有限公司，國(guó)藥準(zhǔn)字Z13022204，批號(hào)：290695)及處方中21味藥材由市場(chǎng)藥店購(gòu)置；黃柏對(duì)照藥材(批號(hào)：121510-200703)，葛根對(duì)照藥材(批號(hào)：121551-200902)，丹參對(duì)照藥材(批號(hào)：120923-200006)，白芍對(duì)照藥材(批號(hào)：120905-200508)，川芎對(duì)照藥材(批號(hào)：120918-200809)，乳香對(duì)照藥材(批號(hào)：1209701-200403)，沒藥對(duì)照藥材(批號(hào)：121250-200503)，羌活對(duì)照藥材(批號(hào)：120935-200506)，黃芪甲苷對(duì)照品(批號(hào)：110781-200210)，均購(gòu)自中國(guó)藥品生物制品檢定所。試驗(yàn)中用到的試劑、試藥均為分析純。

1.2 儀器 超聲波震蕩儀：KH-100B型超聲波清洗器(昆山禾創(chuàng)超聲儀器有限公司)；紫外光燈：ZF-2型三用紫外儀(上海市安亭電子儀器廠)。

1.3 方法

1.3.1 黃柏、葛根、白芍藥與丹參的薄層鑒別 取本品3 g，研細(xì)，加甲醇5 mL，超聲處理5 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取黃柏對(duì)照藥材0.2 g，赤芍藥和丹參對(duì)照藥材各0.5 g，葛根對(duì)照藥材0.3 g，分別加甲醇4 mL，超聲處理10 min，上清液作為各自的對(duì)照藥材溶液。吸取上述5種溶液各5～6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(12∶2∶1∶0.5)為展開劑，展開，取出，熱風(fēng)吹干，置紫外光燈(365、254 nm)下檢視和噴以5%的香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶6)的混合溶液，105 ℃加熱顯色后，日光下檢視。

1.3.2 川芎、乳香與沒藥的薄層鑒別 取本品5 g，研細(xì)，加乙醚20 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液揮干，殘?jiān)蛹状? mL使溶解，作為供試品溶液。另取川芎、乳香與沒藥對(duì)照藥材各0.3 g，分別加甲醇4 mL，超聲處理10 min，上清液作為對(duì)照藥材溶液。吸取對(duì)照藥材溶液各3 μL，供試品溶液5～6 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以環(huán)己烷-醋酸乙酯-甲酸(9∶1.5∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365、254 nm)下檢視和噴以5%的香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶6)的混合溶液，105 ℃加熱顯色后，日光下檢視。

1.3.3 羌活與黃芪甲苷薄層鑒別 取本品5 g，研細(xì)，加60%甲醇25 mL，超聲處理10 min，濾過，濾液揮去甲醇，殘留液加水15 mL，用水飽和的正丁醇25 mL萃取，分取正丁醇層，用0.2%氫氧化鈉溶液15 mL洗滌，正丁醇層蒸干，殘留物加甲醇1 mL使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷，加甲醇制成每mL含0.3 mg的溶液，作為對(duì)照品溶液。再取羌活對(duì)照藥材0.5 g，加甲醇4 mL，超聲處理10 min，上清液作為對(duì)照藥材溶液。吸取對(duì)照品溶液5 μL、供試品溶液5～8 μL、對(duì)照藥材溶液3 μL，分別點(diǎn)于同一硅膠GF254薄層板上，以氯仿-甲醇-水-甲酸(12∶4∶0.5∶0.1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365 nm)下檢視和噴以10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱顯色后，紫外光燈(365 nm)下檢視。

2 結(jié) 果

2.1 黃柏、葛根、白芍藥與丹參的薄層鑒別 置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與黃柏對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯2個(gè)相同顏色的熒光主斑點(diǎn)(見封3，圖1)；置紫外光燈(254 nm)下檢視，供試品色譜中，在與葛根對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色主斑點(diǎn)(見封3，圖2)；再噴以5%的香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶6)的混合溶液，熱風(fēng)吹至斑點(diǎn)顯色清晰，隨即觀察，供試品色譜中，在與丹參和赤芍藥對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，分別顯相同顏色的主斑點(diǎn)(見封3，圖3)。陰性樣品無干擾，鑒別專屬。

2.2 川芎、乳香與沒藥的薄層鑒別 置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與川芎對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)(見封3，圖4)；置紫外光燈(254 nm)下檢視，在與沒藥對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色主斑點(diǎn)(見封3，圖5)；再噴以5%的香草醛硫酸溶液-乙醇(1∶6)的混合溶液，熱風(fēng)吹至一個(gè)紫紅色斑點(diǎn)呈現(xiàn)，供試品色譜中，在與乳香對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯一個(gè)相同顏色的斑點(diǎn)(見封3，圖6)，繼續(xù)加熱，顏色斑點(diǎn)增多，且紫紅色斑點(diǎn)漸變?yōu)樘m紫色(見封3，圖7)。陰性樣品無干擾，鑒別專屬。

2.3 羌活與黃芪甲苷薄層鑒別 置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與羌活對(duì)照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點(diǎn)(見封3，圖8)；再噴以10%的硫酸乙醇溶液，105 ℃加熱至斑點(diǎn)顯色清晰。置紫外光燈(365 nm)下檢視，供試品色譜中，在與對(duì)照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同顏色的熒光斑點(diǎn)(見封3，圖9)。陰性樣品無干擾，鑒別專屬。

3 討 論

3.1 實(shí)現(xiàn)了一板多信息鑒別，所增訂的9味藥材，在3塊薄層板上完成。樣品和對(duì)照藥材的前處理時(shí)間約2 h，花費(fèi)有機(jī)試劑110 mL。與原標(biāo)準(zhǔn)相比，在鑒別藥味增加125%的情況下，處理時(shí)間與試劑反而節(jié)約了83.3%和74.4%。簡(jiǎn)便、快捷、斑點(diǎn)清晰，為薄層鑒別的提速、節(jié)資、降低環(huán)境污染做出了示范。

3.2 本薄層鑒別的特點(diǎn)是：依據(jù)中藥化學(xué)成分性質(zhì)，通過薄層展開后，各成分分別被吸附和解吸附在薄層板的不同層次上，在各自的檢視條件，呈現(xiàn)各自不同的熒光和顏色信息斑點(diǎn)，分離良好，呈現(xiàn)了一板多層次多種藥材信息。如第1塊薄層板上，在第1層次上(紫外光365 nm下)檢視小檗堿類的黃綠色熒光斑點(diǎn)；在第2層次上(紫外光254 nm下)檢視葛根的熒光熄滅斑點(diǎn)；在第3層次上，噴霧香草醛硫酸溶液顯色后，日光下檢視丹參的粉紅色斑點(diǎn)和白芍藥的藍(lán)紫色斑點(diǎn)。第2塊薄層板上，第1層次上(紫外光365 nm下)檢視川芎的亮蘭色熒光斑點(diǎn)；在第2層次上(紫外光254 nm下)檢視沒藥的熒光熄滅斑點(diǎn)；在第3層次上，噴霧香草醛硫酸溶液顯色后，日光下檢視乳香的顏色斑點(diǎn)。在第3塊薄層板上，在第1層次上(紫外光365 nm下)檢視羌活的純蘭色熒光斑點(diǎn)；噴霧10%硫酸乙醇溶液顯色后，在第2層次上(紫外光365 nm下)檢視黃芪甲苷的橙色熒光斑點(diǎn)。各層次上的斑點(diǎn)清晰，互不干擾。

3.3 乳香和沒藥均為橄欖科植物分泌的樹脂類，具有類似的理化性質(zhì)，與香草醛硫酸乙醇溶液反應(yīng)，都會(huì)形成多種不同的顏色斑點(diǎn)，難以將兩者區(qū)分。本鑒別利用沒藥在紫外光254 nm下專屬的熒光熄滅斑點(diǎn)和乳香與香草醛硫酸乙醇溶液顯色后的紫紅色斑點(diǎn)，將兩者區(qū)分，簡(jiǎn)便、快捷、專屬，為首次報(bào)道。

3.4 大處方小劑量組方的中藥提取制劑，要提升薄層鑒別的增訂率，提高制劑的可控性，同時(shí)使鑒別速度與機(jī)械化生產(chǎn)速度相匹配，就必須突破目前一樣、一板、一藥材的鑒別模式，實(shí)現(xiàn)薄層鑒別的高效率、多信息、多藥味。對(duì)此，本研究提供了一些初探思路，以供同仁參考。

[1] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)(中藥成方制劑)：第 18冊(cè)[S].北京，1998：322.

[2] 中華人民共和國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：2010年版一部[S].北京：中國(guó)醫(yī)藥科技出版社，2010：1138.

[3] 李守拙.頸復(fù)康沖劑中小檗堿含量測(cè)定方法的探討[J].中草藥，1993，24(2)：75-76.

[4] 李云霞.薄層掃描法測(cè)定頸復(fù)康沖劑中芍藥甙含量[J].中國(guó)中藥雜志，1994，19(11)：674.

[5] 張科衛(wèi)，李偉，崔小兵，等.HPLC法測(cè)定胃康靈膠囊中芍藥苷和甘草苷[J].中草藥，2006，37(12)：1821-1822.

(本文編輯：董軍杰)

董占軍(1965—)，男，主任藥師，碩士。從事中藥檢驗(yàn)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

R282.71；R287

A

1002-2619(2014)01-0107-02

2013-06-03)

△ 通訊作者：河北省食品藥品檢驗(yàn)院保健食品科，河北 石家莊 050011