扈本荃，徐玥，高蘇亞，張宇潔，張韞，王黎，唐前文

(西安醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)院，陜西 西安 710021)

馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧(Portulaca oleracea L.)的全草，多以其干燥地上部分入藥，性味酸寒，具有清熱解毒、涼血止血之功效。臨床多煎湯內(nèi)服或并用鮮品搗汁外敷，用于熱毒血痢、癰腫疔瘡、濕疹、丹毒、蛇蟲咬傷、便血、痔血、崩漏下血等［1］，因此馬齒莧具有“天然抗生素”的美稱。

馬齒莧在2010 版《中國(guó)藥典》中具有鑒別、炮制、功能主治、用法用量等明確的規(guī)定，卻對(duì)馬齒莧中的有效成分及含量無明確要求。從20 世紀(jì)60 年代至今，國(guó)內(nèi)外學(xué)者已從馬齒莧中提出許多化學(xué)成分，主要包括有機(jī)酸類、生物堿類、黃酮類、萜類、多糖類等多種成分。在這些活性成分中，生物堿是新興的研究熱點(diǎn)之一，很多生物堿成分具有較強(qiáng)的藥理作用，例如抗氧化作用，抗腫瘤作用等［2-3］。

本文對(duì)不同產(chǎn)地馬齒莧中的生物堿的含量進(jìn)行測(cè)定，旨在考察產(chǎn)地對(duì)馬齒莧中生物堿含量的影響，為馬齒莧質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的修訂提供依據(jù)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 材料與儀器

馬齒莧藥材(產(chǎn)地貴州、四川、北京、貴州，經(jīng)西安醫(yī)學(xué)院生藥教研室張彥副教授鑒定);溴甲酚綠、咖啡因、鄰苯二甲酸氫鉀等試劑均為分析純;實(shí)驗(yàn)用水為純化水。

GR-202 型分析天平;UV-762 型紫外可見分光光度計(jì);FW200A 型高速萬能粉碎機(jī);DZKW-D 數(shù)顯恒溫水浴鍋;R203B 型旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀;SHZ-D 循環(huán)水式真空泵;PHS-3C 型pH 計(jì)。

1.2 溶液的配制

1.2.1 對(duì)照品溶液 咖啡因醇溶液的配制，精密稱取咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品50.87 mg，置于50 mL 容量瓶，加無水乙醇定容，搖勻，質(zhì)量濃度為0.990 6 mg/mL。

1.2.2 溴甲酚綠緩沖液的配制 精密稱取溴甲酚綠0.125 0 g，加入80 mL 小燒杯中，用NaOH 溶液12.50 mL 溶解后，加入鄰苯二甲酸氫鉀2.55 g，加少量蒸餾水溶解后，轉(zhuǎn)移至250 mL 容量瓶中，用蒸餾 水 定 容 至 刻 度，調(diào) 節(jié) pH = 4.4，濃 度 為0.72 mmol/L。

1.2.3 供試品溶液的配制 取馬齒莧粗粉約35 g，置于索式提取裝置中，用180 mL 無水乙醇連續(xù)回流提取16 h。回收乙醇后將所得浸膏倒入燒杯中，用蒸餾水稀釋，再用HCl 溶液調(diào)節(jié)pH 值為3 ～4，攪拌均勻，抽濾。濾液中加入10%的氨水，調(diào)節(jié)pH 值8～9。用氯仿萃取二次，合并氯仿萃取液。蒸餾，回收氯仿，得黃色液體即為生物堿的粗品。

將生物堿粗品溶于400 mL 水中，用6 mol/L HCl 溶液調(diào)節(jié)pH 值3 ～4。用乙醚萃取洗滌溶液2次，每次15 mL，棄去乙醚層。水層用10%的氨水調(diào)節(jié)pH 值10 左右。再用氯仿萃取2 次，合并氯仿層，回收氯仿，即得生物堿的精制品，將其定容為5 mL。

1.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取咖啡因乙醇溶液于0，0.5，0.8，1.1，1.4，1.7，2.0，2.3，2.6 mL 于0，1，2，3，4，5，6，7，8號(hào)10 mL 容量瓶中，再分別加入1 mL 溴甲酚綠緩沖液和2 mL 無水乙醇溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min。用0 號(hào)容量瓶中溶液作空白對(duì)照，以全波長(zhǎng)掃描所得最大波長(zhǎng)629 nm 為測(cè)定波長(zhǎng)，測(cè)定60 min 內(nèi)溶液的吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，得回歸方程y =2.514 9x+0.016 3，r=0.999 3。

2 結(jié)果與討論

2.1 精密度測(cè)定

精密量取0.3 mL 供試品溶液于10 mL 容量瓶中，加入1 mL 溴甲酚綠緩沖液和2 mL 無水乙醇溶液，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻，放置15 min。另取10 mL 容量瓶依法配制空白對(duì)照，放置15 min。進(jìn)行6 次含量測(cè)定，結(jié)果A =0.366，0.366，0.366，0.365，0.365，0.366，其RSD=0.1%，儀器精密度非常良好。

2.2 重復(fù)性實(shí)驗(yàn)

分別精密量取0.3 mL 6 份供試品溶液于10 mL容量瓶中，配制溶液與空白對(duì)照，放置15 min 后，對(duì)其進(jìn)行含量測(cè)定，吸光度分別為0.392，0.364，0.364，0.366，0.364，0.365，計(jì)算生物堿含量，其RSD=0.1%。

2.3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

精密吸取0.3 mL 供試品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液與空白對(duì)照，放置15 min 后，每隔15 min測(cè)量1 次，測(cè)量1 h。結(jié)果A =0.399，0.409，0.415，0.417，RSD=1.9%。

2.4 加樣回收率測(cè)定

按照馬齒莧總生物堿提取方法，稱量咖啡因標(biāo)準(zhǔn)品30 mg，加入35 g 貴州馬齒莧粗粉中，混勻提取。同法操作提取6 份供試品溶液。

精密吸取0.3 mL 供試品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液與空白對(duì)照，放置15 min 進(jìn)行含量測(cè)定，計(jì)算生物堿含量，結(jié)果見表1。

表1 加樣回收率測(cè)定(n=6)Table 1 Result of recovery experiment(n=6)

2.5 樣品測(cè)定

精密量取0.3 mL 貴州、四川、北京、西安產(chǎn)馬齒莧供試品溶液于10 mL 容量瓶中，配制溶液與空白對(duì)照，放置15 min 后進(jìn)行含量測(cè)定，結(jié)果見表2。

表2 不同產(chǎn)地馬齒莧總生物堿含量(n=6)Table 2 Result of alkaloid content test (n=6)

由表2 可知，4 種產(chǎn)地馬齒莧總生物堿含量為:貴州0.090%，四川0.066%，北京0.076%，西安0.059%，含量大小為貴州＞北京＞四川＞西安。

王仲英［4］用乙醇回流法對(duì)太原馬齒莧總生物堿回流提取9 h，其含量檢測(cè)結(jié)果為21.90 mg/kg，與本實(shí)驗(yàn)結(jié)果存在明顯差距，在不排除提取時(shí)間影響外，間接地反映了產(chǎn)地對(duì)其含量的影響。王仲英實(shí)驗(yàn)結(jié)果雖然遠(yuǎn)小于本實(shí)驗(yàn)，但謝彥用［5］超生輔助酶解法提取出的濱州馬齒莧總生物堿含量為0.36%，又比本實(shí)驗(yàn)含量最高的貴州多了3 倍。

馬齒莧在2010 版藥典中具有鑒別、炮制、功能主治、用法用量等明確的規(guī)定，卻對(duì)總生物堿含量無明確要求，但實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，不同產(chǎn)地馬齒莧總生物堿含量具有明顯差異，選擇不同產(chǎn)地馬齒莧期臨床療效將有所不同，給臨床用藥帶來一定困惑，因此建議《中國(guó)藥典》在修訂時(shí)，能夠?qū)︸R齒莧藥用成分含量做出明確規(guī)定，以保證臨床療效的一致，便于馬齒莧在臨床的更好應(yīng)用。

3 結(jié)論

實(shí)驗(yàn)測(cè)得不同產(chǎn)地馬齒莧總生物堿含量分別為貴州0.090%，四川0.066%，北京0.082%，西安0.059%，結(jié)果表明，不同產(chǎn)地馬齒莧含量具有明顯差異，其差異可能因不同產(chǎn)地氣候、種植方法等差別而不同，具體結(jié)論有待進(jìn)一步研究。

［1］ 閆光英.馬齒莧［J］.國(guó)土綠化，2013，5(7):53-54.

［2］ 李玉萍，曾憲偉，操家璇，等.馬齒莧生物堿對(duì)A-549細(xì)胞的抑制作用［J］.江西食品工業(yè)，2009(1):24-25.

［3］ 雷帆，向蘭，藍(lán)嘉琪，等.馬齒莧中新酰胺類生物堿的神經(jīng)元保護(hù)作用活性篩選和機(jī)理研究［C］//2008 年全國(guó)抗衰老與老年癡呆學(xué)術(shù)會(huì)議論文集.2008.

［4］ 王仲英，李香蘭.馬齒莧總生物堿的測(cè)定［J］.太原理工大學(xué)學(xué)報(bào)，2001，32(2):197-198.

［5］ 謝彥.超聲輔助酶解法提取馬齒莧總生物堿［J］.濱州學(xué)院學(xué)報(bào)，2012，27(6):63-66.