涂瑤生， 朱 穎,2， 孫冬梅*， 徐文杰

(1. 廣東省中醫(yī)研究所，廣東 廣州 510095；2.廣州中醫(yī)藥大學，廣東 廣州 510405)

布渣葉，又名破布葉，為椴樹科破布葉屬植物破布葉Microcospaniculata. L的葉。課題組前期研究發(fā)現(xiàn)布渣葉提取物能顯著降低高脂血癥小鼠模型血清中總膽固醇(TC)和甘油三酯(TG)的含有量[1]。但是布渣葉提取物在0.1 mol/L鹽酸、水和磷酸鹽緩沖液(pH 6.8)中的表觀溶解度分別為1.78 g/100 mL，1.73 g/100 mL和1.80 g/100 mL，根據(jù)《中國藥典》2010版凡例“項目與要求”項下溶解度的規(guī)定屬于略溶。布渣葉提取物溶解性差，導致其口服生物利用度低。

固體分散體(solid dispersion, SD)作為一種新型的載藥系統(tǒng)，主要用于改善難溶性藥物的溶出與吸收，提高生物利用度[2-3]。固體分散技術在改善藥物溶出方面有突出的效果，但由于制備方法存在工藝復雜、重現(xiàn)性低、有機溶劑殘留等問題，工業(yè)化推廣難度較大[4]。熱熔擠出技術(hot-melt extrusion technique, HME)又稱熔融擠出技術(melt extrusion technique)，它本身是一種工業(yè)化大生產(chǎn)技術，工藝簡單，自動化程度高，不使用有機溶劑，恰好彌補了以上不足，又因為它具有獨特的混合機理，使藥物和載體達到了分子水平的混合。通過優(yōu)選載體，可以使藥物以無定形狀態(tài)分散在載體中或者以分子狀態(tài)溶解在載體中。因此 HME技術用于制備速釋制劑有著明顯的優(yōu)勢[5-8]。HME技術作為一種新的制劑方法，已成為國外制備固體分散體的主導技術。

本研究利用熱熔擠出技術將布渣葉提取物制備成固體分散體，提高其體外溶出度，以達到促進其體內(nèi)釋放和吸收，提高其生物利用度的目的，為中藥有效部位新劑型的開發(fā)提供一定的參考。

1 材料

HaakeMini CTW微量混合擠出機(美國賽默飛世爾公司)；Nicolet 6700型傅立葉變換紅外光譜儀(美國賽默飛世爾公司)；TG 209型熱重分析儀(德國NETZSCH公司)；銳影(Empyrean)X-射線衍射儀(荷蘭帕納科公司)；UV 2550紫外分光光度計(日本島津公司)；Agilent1200高效液相色譜儀(美國Agilent公司)，Waters Xbridge C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色譜柱(美國Waters公司)。

蘆丁對照品(批號080-9303，純度≥99.99%)、牡荊苷對照品(批號111687-200602，純度≥99.99%)均購于中國食品藥品檢定研究院；異牡荊苷對照品(批號Y-127-110705，HPLC分析純度≥98%)、水仙苷對照品(批號S-127-110705，HPLC分析純度≥98%)均購于成都瑞芬思生物科技有限公司；布渣葉藥材為廣東市售，經(jīng)廣東省中醫(yī)研究所劉法錦研究員鑒定為椴樹科植物破布葉MicrocospaniculataL.的干燥葉，其提取物為自制(總黃酮含有量≥50%)；泊洛沙姆407、PEG6000均購于ISP公司。

2 方法和結果

2.1 HME技術制備布渣葉提取物固體分散體

2.1.1 藥物與載體熱穩(wěn)定性的考察 采用熱重分析(thermal gravitational analysis, TGA)法，分別取藥物和載體適量，置于鋁盤中，以氧化鋁為參比物，在空氣流中，從室溫到700 ℃，以10 ℃/min的速率升溫。

藥物和載體的失重曲線見圖1。結果顯示，藥物和載體在150 ℃以下穩(wěn)定，提示熱熔擠出操作溫度低于150 ℃為宜。

圖1 藥物和載體的熱重分析圖

2.1.2 熱熔擠出操作 設定溫度均為110 ℃；設定螺桿轉速為100 r/min。將藥物與各載體按試驗設計的比例混合均勻，得物理混合物，稱取10 g物理混合物投入加料斗中，待物料由?？讛D出后，盛接于不銹鋼盤中，-20 ℃條件下放置24 h后，置干燥器中干燥，粉碎，過60目篩，備用。

2.1.3 單一載體固體分散體的制備 按藥物與載體質量比為1∶1，1∶2，1∶4，1∶6，1∶8，分別準確稱取布渣葉提取物、PEG6000和泊洛沙姆407，按“2.1.2”項下所述方法分別制備布渣葉提取物與PEG6000、泊洛沙姆407固體分散體。

2.1.4 二元載體固體分散體的制備 固定藥物與載體的質量比為1∶2，PEG6000與泊洛沙姆407質量比為4∶1，2∶1，1∶1，1∶2，1∶4稱取，按“2.1.2”項下所述方法制備布渣葉提取物與PEG6000、泊洛沙姆407二元載體的固體分散體。

2.1.5 物理混合物的制備 按藥物與載體的質量比為1∶2準確稱取布渣葉提取物與二元載體(PEG6000與泊洛沙姆 407質量比1∶4)置于乳缽中研細，混勻，過60目篩，置干燥器內(nèi)保存?zhèn)溆谩?/p>

2.2 體外溶出度測定

2.2.1 UV法測定總黃酮的量

2.2.1.1 標準曲線的繪制 取蘆丁對照品適量，精密稱定，加70%乙醇制成每1 mL含0.306 mg的對照品溶液。精密量取蘆丁對照品溶液1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0 mL，分別置25 mL量瓶中，按照參考文獻方法[9-10]測定，繪制標準曲線，得回歸方程：A=13.27×10-3C-30.46×10-3，r=0.999 7，在14.188～85.128 μg/mL呈良好線性關系。

2.2.1.2 專屬性試驗 取蘆丁對照品溶液、PEG6000/泊洛沙姆407(1∶4)-布渣葉提取物溶液、PEG6000/泊洛沙姆407(1∶4)溶液測定。結果見圖2，對照品溶液和布渣葉提取物的最大吸收波長一致，兩者在(500±2) nm處有最大吸收，載體材料對總黃酮的含量測定沒有干擾，故選擇500 nm為測定波長。

圖2 對照品、樣品及載體UV掃描圖

2.2.2 HPLC法測定牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷的量

2.2.2.1 標準曲線的繪制 色譜條件參照參考文獻[11]，取牡荊苷對照品、異牡荊苷對照品、水仙苷對照品適量，精密稱定，加甲醇制成每1 mL含牡荊苷192.6 μg、異牡荊苷 210.4 μg、水仙苷229.1 μg的混合對照品貯備液。精密量取貯備液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10.0 mL置于10 mL量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，分別取10 μL注入液相色譜儀，進行線性回歸，得回歸方程分別為：

牡荊苷Y=3.202×103X+3.707(r=0.999 5)；

異牡荊苷Y=3.605×103X+4.933 (r=0.999 5)；

水仙苷Y=10.088×103X+5.610 (r=0.999 5)。

結果表明牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷分別在7.704～77.040 ng、8.416～84.160 ng和9.165～91.650 ng范圍呈良好的線性關系。

2.2.2.2 專屬性試驗 精密吸取混合對照品溶液、PEG6000/泊洛沙姆407(1∶4)-布渣葉提取物溶液、PEG6000/泊洛沙姆407(1∶4)溶液各10 μL，HPLC測定。結果表明各輔料對牡荊苷、異牡荊苷和水仙苷含量測定沒有干擾，見圖3。

1.牡荊苷 2.異牡荊苷 3.水仙苷 1.vitexin 2.isovitexin 3.narcissi

2.2.3 藥物的溶出度測定 精密稱取布渣葉提取物和各種固體分散體(相當于含布渣葉提取物0.8 g)，按溶出度測定方法(《中國藥典》2010 年版二部附錄 XC 槳法)，以水(900 mL)為溶出介質，轉速100 r/min，溫度(37±0.5)℃，分別于5、10、15、30、45、60 min 取樣 5 mL(同時補加同溫度等量溶出介質)，以0.45 μm濾膜過濾，進行 HPLC 和UV測定，計算累積溶出率，結果見表1～表3和圖4。

由表1可知，PEG6000作為布渣葉提取物(Bzy)的載體材料，可以顯著提高牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷的溶出度和溶出速率，且隨著PEG6000用量的增加溶出度增大。但是，對總黃酮的溶出度影響不大，當藥輔比為1∶6時，總黃酮溶出度為63%，較原料藥溶出度增加12%，隨著PEG6000用量再增加時，總黃酮溶出度并未增加。

由表2可知，泊洛沙姆407作為布渣葉提取物的載體材料，可以顯著增加總黃酮的溶出度，且隨著泊洛沙姆407用量的增加，總黃酮的溶出度也隨之增大。泊洛沙姆407也可增加牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷的溶出度，但均低于PEG6000為載體制備的固體分散體；牡荊苷、異牡荊苷的溶出度隨著泊洛沙姆407用量的增加而增加；45 min內(nèi)，水仙苷的溶出速率隨著泊洛沙姆407用量的增加而降低。

為了同時增加總黃酮、牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷的溶出度，以及盡量減少輔料用量，擬將PEG6000和泊洛沙姆407作為聯(lián)合載體應用。在固定藥物和輔料質量比為1∶2的情況下，又對PEG6000和泊洛沙姆407之間的質量比例進行了考察，結果表3。由表3和圖4可知，隨著泊洛沙姆407的用量增加，總黃酮的溶出度明顯增加，當PEG6000與泊洛沙姆407質量比為1∶4時，總黃酮的溶出度最好，達到了80%；較相同藥輔比情況下單一載體(PEG6000、泊洛沙姆407)制備的固體分散體中總黃酮溶出度分別增加20%和30%。PEG6000和泊洛沙姆407各質量比均可顯著提高牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷的溶出度，且不受PEG6000和泊洛沙姆407比例的影響；當PEG6000與泊洛沙姆407質量比為1∶4時，牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷的溶出度分別為100%、100%、90%。所以，確定采用PEG6000與泊洛沙姆407質量比為1∶4作為二元載體，藥物與輔料的質量比為1∶2制備固體分散體。

表1 PEG6000不同比例對總黃酮、牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷溶出的影響(n=6)

表2 泊洛沙姆407不同比例對總黃酮、牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷溶出的影響(n=6)

表3 二元載體PEG6000與泊洛沙姆407不同比例對總黃酮、牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷溶出的影響(n=6)

圖4 單一載體和二元載體對總黃酮、牡荊苷、異牡荊苷、水仙苷溶出的影響(n=6)

2.4 固體分散體的鑒別

2.4.1 紅外光譜分析 采用Nicolet 6700傅立葉紅外光譜儀，采用KBr壓片法制備樣品，掃描范圍為 400～4 000 cm-1，分別對布渣葉提取物、PEG6000、泊洛沙姆407、PEG6000/泊洛沙姆407(1∶4)-布渣葉提取物物理混合物及其固體分散體進行紅外光譜分析。

由圖5可知，物理混合物在3 405.75 cm-1波數(shù)有-OH的吸收峰，而固體分散體中的吸收峰向高波數(shù)發(fā)生位移(3 420.27 cm-1)，強度也大幅降低，認為可能由于布渣葉提取物與載體以氫鍵的形式結合。

圖5 藥物、載體、固體分散體和物理混合物IR圖

2.4.2 X-射線粉末衍射分析 Cu 靶 Kα1射線，電壓 40 kV，電流 40 mA，發(fā)射狹縫1/32°，防散射狹縫1/16°，防散射狹縫7.5 mm，2θ范圍：3°～50°，步長0.02°，每分鐘停留40 s。分別對布渣葉提取物、PEG-6000、泊洛沙姆407、物理混合物和固體分散體進行 X-射線粉末衍射分析。

由結果可知，泊洛沙姆407在19.14°，23.41°出現(xiàn)強衍射峰，PEG-6000在19.19°，23.08°，23.44°出現(xiàn)強衍射峰，而布渣葉提取物沒有明顯的晶體衍射峰，三者的固體分散體中仍有晶體衍射峰出現(xiàn)，但峰強度明顯減弱，與物理混合物的X-射線衍射曲線類似，提示固體分散體沒有形成新的物相。

3 討論

布渣葉是廣東道地藥材，具有消食化滯，清熱利濕之功效，臨床常用于治療飲食積滯，感冒發(fā)熱，濕熱黃疸等。其保健作用雖得到廣泛認可，但作為藥用的歷史不長，對其研究報道也不多，多數(shù)集中于化學成分研究[12-13]以及粗提物藥理作用研究[14]，對其有效部位的開發(fā)尚未見報道，本實驗對布渣葉有效部位進行制劑研究，利用熱熔擠出技術制備得到固體分散體，提高其體外溶出速率。中藥有效部位成分復雜，單一指標考察很難體現(xiàn)藥物作用的整體效果。所以，本實驗采用多個指標同時評價體外溶出度的方法，進行載體的篩選。結果表明，采用不同的單一指標進行體外溶出度評價就會得出不同的結果，最后所選用的輔料及輔料用量亦不同；采用多個指標同時評價，結合各輔料優(yōu)勢，以PEG6000和泊洛沙姆407聯(lián)合應用為載體，既提高了溶出度，又減少了輔料的用量。

差示掃描量熱法(DSC)、紅外光譜法(IR)、X-射線衍射為固體分散體常用物相鑒別的方法，通過觀察藥物的DSC、IR、X-射線衍射這幾個譜圖的變化，可以觀察到藥物存在狀態(tài)的改變。但目前固體分散技術和物相鑒別技術主要用于藥物單體的制備和鑒別。由于本研究的藥物是從布渣葉中提取的混合物，并非單體藥物，DSC方法并不適用，所以僅采用IR和X-射線衍射對制備的固體分散體進行物相鑒別。本實驗為中藥提取物或中藥有效部位固體分散體的研究提供參考。

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