郝娟 于順 陳彪 李堯華

帕金森病(Parkinson disease，PD)是常見的神經系統(tǒng)退行性疾病之一[1]。PD的病因和發(fā)病機制尚未完全明了。許多研究結果顯示PD患者外周血T淋巴細胞亞群比例失衡及T細胞免疫功能下降，提示免疫應答所致慢性神經炎性反應是PD發(fā)生發(fā)展的機制之一[2-3]。本研究采用流式細胞術對PD患者外周血T淋巴細胞中的純真細胞亞群、記憶細胞亞群和調節(jié)性細胞亞群的變化進行檢測，旨在探討其在PD發(fā)病中的作用。

1 對象和方法

1.1研究對象(1)病例組：共34例，其中男17例，女17例，年齡37～70歲, 平均(51.84 ±8.86)歲。病程1～5年，平均(2.8 ±0.8)年。均符合中國PD診斷標準[4]。將PD患者按改良Hoehn-Yahr[4]分級法分級，均處于Ⅰ～Ⅲ級，屬于輕中度患者。(2)對照組：共35名，其中男17名，女18名，年齡35～73歲，平均(53.86 ±10.26)歲，均系健康志愿者，無明顯疾病史。入選和排除標準：排除自身免疫性疾病、正在使用對免疫系統(tǒng)有影響的藥物以及患有影響免疫系統(tǒng)疾病的患者。

1.2方法采用微量全血直接免疫熒光染色法檢測外周血T淋巴細胞亞群。主要儀器和試劑包括Facscalibur、Accuri C6流式細胞儀以及小鼠抗人CD3PERCP、CD4FITC、CD8PE、CD45RAFITC、CD45ROAPC、CD25APC、FoxP3PE免疫熒光抗體，均購自美國BD公司。

1.3統(tǒng)計學處理采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件包進行分析，計量資料均采用均數(shù)±標準差表示，兩組均數(shù)間比較采用t檢驗。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結果

與對照組比較，PD患者外周血總淋巴細胞百分比降低，殺傷性純真T細胞亞群(CD8+CD45RA+CD45RO-)百分比增高，殺傷性記憶T細胞亞群(CD8+CD45RA-CD45RO+)和調節(jié)性T細胞亞群(CD4+CD25+FoxP3+)百分比均降低(均P<0.01)，而CD3+CD4+T細胞亞群和CD3+CD8+T細胞亞群占總淋巴細胞的百分比與健康對照組比較無統(tǒng)計學差異，輔助性純真T細胞亞群(CD4+CD45RA+CD45RO-)和輔助性記憶T細胞亞群(CD4+CD45RA-CD45RO+)與健康對照組比較亦無統(tǒng)計學差異(表1)。

表 1 兩組T淋巴細胞亞群檢測結果比較

3 討論

PD是常見的中樞神經系統(tǒng)退行性疾病之一，免疫應答機制在其發(fā)生和發(fā)展過程中發(fā)揮作用[5]。淋巴細胞是機體免疫系統(tǒng)的重要組成部分，直接參與機體的先天性免疫和獲得性免疫。本研究結果顯示，PD患者外周血總淋巴細胞百分比明顯低于健康對照組，這與Gruden等[6]和Mosley等[2]的報道一致，提示PD患者存在免疫系統(tǒng)功能異常。

CD3+CD4+T細胞和 CD3+CD8+T細胞是兩個功能不同的T細胞亞群。健康人體內CD3+CD4+T細胞亞群多于CD3+CD8+T細胞亞群，二者比值大于1.0。有研究結果顯示[7]，PD患者CD3+CD4+T細胞亞群占總淋巴細胞百分比較健康人變化不大，CD3+CD8+T細胞亞群占總淋巴細胞百分比較健康人有所升高，導致CD3+CD4+T/CD3+CD8+T的比值稍下降。本研究結果顯示，PD患者CD3+CD4+T細胞亞群和CD3+CD8+T細胞亞群各占總淋巴細胞(CD3+T細胞)的百分比與健康對照比較無統(tǒng)計學差異，這可能與研究的抽樣誤差有關，具體結果有待進一步論證。

CD45RA和CD45RO是CD45(白細胞共同抗原)的兩類亞型，由CD45肽鏈胞外區(qū)氨基端的3個外顯子發(fā)生旁路剪接而致，缺乏3種外顯子的同型稱為CD45RO，僅表達外顯子A的同型稱為CD45RA。CD45RO+T細胞表現(xiàn)為記憶細胞的特點，具有輔助誘導作用；而CD45RA+T 細胞卻表現(xiàn)為初始T細胞的特點，具有抑制免疫的作用。CD45RA+T細胞亞群和CD45RO+T細胞亞群的變化可能在很多疾病中均可作為疾病活動、復發(fā)和療效的判定指標之一，具有重要的臨床意義。本研究結果顯示，PD患者外周血輔助性純真T細胞亞群(CD4+CD45RA+CD45RO-)和輔助性記憶T細胞亞群(CD4+CD45RA-CD45RO+)較健康人無明顯變化，這與以往研究結果一致[7]。有文獻報道[2，8-9]，PD患者的CD4+CD45RO+T細胞亞群較健康人顯著升高，并且其升高程度和帕金森綜合評分量表(UPDRS-Ⅲ)評分呈中度正相關，而PD患者CD4+CD45RA+T細胞亞群較健康人有選擇性丟失，但目前尚未見有關PD患者CD8+CD45RA-CD45RO+T細胞亞群和CD8+CD45RA+CD45RO-T細胞亞群變化的報道。CD45RO曾一度被認作記憶性T細胞的標志，但最近研究表明，它是細胞新近活化的象征：靜止的T細胞表達CD45RA，但活化后立即改為CD45RO，幾周后又恢復表達CD45RA，PD患者外周血某些細胞因子如細胞間黏附分子-1(ICAM-1)和淋巴細胞功能相關分子( LFA-1)等水平增加，可能是導致CD4+和 CD8+T細胞亞群中 CD45RA+細胞比例下降，CD45RO+細胞比例升高的原因之一[10]。本研究結果顯示CD8+CD45RA-CD45RO+T細胞亞群較健康人減少、CD8+CD45RA+CD45RO-T細胞亞群較健康人增多，提示PD患者殺傷性T細胞活化過程可能受到影響，也可能與所有PD患者都服用多巴胺制劑有關。因為服用多巴胺制劑會導致T細胞蛋白質表達譜的改變，進而可能會對PD患者的免疫功能造成一定影響[11]。

調節(jié)性T細胞(Treg)是不同于 Th1 和 Th2 細胞的一種 CD4+T細胞亞群，具有維持機體自身免疫耐受的作用，通過抑制免疫亢進調節(jié)機體免疫平衡，避免自身免疫病的發(fā)生，其表面標記為CD4+CD25+FoxP3+。本研究發(fā)現(xiàn)PD患者Treg較健康人減少，與文獻報道結果[12]一致。動物實驗表明[13]，Treg細胞減少能夠導致小膠質細胞炎性反應加速，促進黑質紋狀體神經元死亡，從而加重 PD病情。在神經保護方面，Treg細胞能夠通過抑制抗原提呈細胞(APC)提呈抗原的表達，抑制獲得性免疫的發(fā)生和效應性T細胞增殖，誘導免疫細胞由Th1、Th17等效應性T細胞向Th2漂移，進而抑制神經免疫炎性反應的發(fā)生。在PD動物模型中，Treg細胞可以通過血-腦脊液屏障到達神經炎性反應部位，通過釋放白細胞介素-10(IL-10)、轉化生長因子-β(TGF-β)和FasL，進一步誘導活化型小膠質細胞向靜止型小膠質細胞轉變，或直接誘導活化性小膠質細胞凋亡，減少神經損傷，從而進一步抑制了活性氧(ROS)、活性氮(RNS)、過氧化亞硝基(OONO-)的釋放。另外，Treg細胞還能分泌腦源性神經營養(yǎng)因子(BDNF)、膠質細胞源性神經營養(yǎng)因子(GDNF)等神經營養(yǎng)因子[2,14-15]。

綜上所述，PD患者外周血淋巴細胞中殺傷性純真T細胞亞群、殺傷性記憶T細胞亞群及調節(jié)性T細胞亞群百分比與健康者間存在統(tǒng)計學差異，細胞免疫失衡可能參與了PD的病理進程。PD 患者體內Treg 細胞減少，加重了神經免疫炎性反應，而Treg細胞的增多可以起到神經保護作用，延緩PD進程。由于TGF-β、IL-2、 IL-10、全反式維甲酸等細胞因子可以促使T細胞向Treg細胞發(fā)生轉化[2]，提示通過體內誘導Treg細胞可能為治療 PD 提供新的思路。

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