于朝磊常 青秦幫勇王新星

(1. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院, 上海 201306; 2. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所, 青島 266071)

微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)生長(zhǎng)和腸道發(fā)育的影響

于朝磊1,2常 青2秦幫勇1,2王新星2

(1. 上海海洋大學(xué)水產(chǎn)與生命學(xué)院, 上海 201306; 2. 中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院黃海水產(chǎn)研究所, 青島 266071)

為獲知微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨仔稚魚(yú)腸道發(fā)育的影響, 試驗(yàn)以添加 0, 0.10%, 0.33%精胺的微顆粒飼料(F1、F2、F3)和活餌料鹵蟲(chóng)(F4)飼喂初始體長(zhǎng)為2 cm左右的半滑舌鰨稚魚(yú)。養(yǎng)殖28d后結(jié)果表明, 鹵蟲(chóng)組(F4)的特定生長(zhǎng)率最高, 飼料組中F2組特定生長(zhǎng)率要顯著高于F1和F3組(P<0.05)。F3組的存活率僅為60.27%, 顯著低于其他各組(P<0.05)。消化酶活力測(cè)定結(jié)果中, F2組在14d和28d時(shí)都含有較高的堿性磷酸酶比活力和亮氨酸氨基肽酶比活力, 較低的亮氨酸-丙氨酸肽酶比活力。鹵蟲(chóng)組的腸道發(fā)育情況最好, 微絨毛長(zhǎng)度顯著大于其他各組(P<0.05); 黏膜厚度略小于 F2組, 但是沒(méi)有顯著性差異(P>0.05); 飼料組中F2組微絨毛長(zhǎng)度和黏膜厚度都顯著大于F1和F3組(P<0.05)。研究表明, 在微顆粒飼料中添加0.10%的精胺(F2組)對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道發(fā)育有促進(jìn)作用。

微顆粒飼料; 精胺; 半滑舌鰨; 稚魚(yú); 腸道發(fā)育

半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis Günther)隸屬鰈形目(Pleuronectiformes)、舌鰨科(Cynoglossidae)、舌鰨屬(Cynoglossus Buchanan Hamiltou), 是我國(guó)海水養(yǎng)殖中重要的經(jīng)濟(jì)魚(yú)類。近年來(lái), 半滑舌鰨人工繁殖技術(shù)的研究取得了重大的進(jìn)展[1], 但是仔稚魚(yú)期間轉(zhuǎn)換微粒飼料通常會(huì)出現(xiàn)生長(zhǎng)緩慢、死亡率高、攝食率低且消化率低及組織器官發(fā)育異常等問(wèn)題,其中一個(gè)重要原因是海水魚(yú)類仔稚魚(yú)在生命早期的前五周是消化道形態(tài)和功能發(fā)生重大變化的時(shí)期[2],這期間消化道發(fā)育不完善, 對(duì)外源性營(yíng)養(yǎng)不能充分吸收和消化。目前對(duì)半滑舌鰨仔稚魚(yú)消化系統(tǒng)器官發(fā)育的組織學(xué)研究已有報(bào)道[3], 但是尚未見(jiàn)其仔稚魚(yú)腸道發(fā)育營(yíng)養(yǎng)調(diào)控的報(bào)道。

精胺(Spermine, SPM)是多胺的一種, 是在生物代謝中產(chǎn)生的一種脂肪族胺類, 它廣泛存在于生物體內(nèi), 參與細(xì)胞功能的調(diào)節(jié)[4]。它在機(jī)體內(nèi)具有特殊的生理功能, 是生物體內(nèi)不可缺少的營(yíng)養(yǎng)成分之一。近年來(lái)很多文獻(xiàn)表明, 精胺對(duì)于動(dòng)物幼體的消化道成熟有很大的促進(jìn)作用, 尤其是對(duì)小腸黏膜有重要的生物學(xué)意義。有研究表明, 外源性精胺可在腸腔內(nèi)快速被小腸黏膜上皮細(xì)胞吸收[5,6]。動(dòng)物幼體通過(guò)攝入合適劑量的外源多胺, 能夠促進(jìn)其腸道細(xì)胞的增殖和損傷的修復(fù), 并且可以促進(jìn)進(jìn)動(dòng)物幼體消化道生理生化指標(biāo)達(dá)到成年動(dòng)物水平[7—9]。

目前半滑舌鰨苗種培育過(guò)程中仍然依賴活餌料的供應(yīng), 其生產(chǎn)成本高, 產(chǎn)量和質(zhì)量不穩(wěn)定且可能攜帶病原微生物等原因, 制約了海水育苗生產(chǎn)。本試驗(yàn)旨在探討微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)生長(zhǎng)性能、腸道消化酶和組織結(jié)構(gòu)的影響, 探索促進(jìn)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道發(fā)育的方法, 使之盡快達(dá)到成魚(yú)的消化水平, 從而能夠提高仔稚魚(yú)對(duì)外源性營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的吸收和利用。研究結(jié)果為解決海水魚(yú)類餌料供應(yīng)和順利轉(zhuǎn)餌提供了一個(gè)途徑。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物與飼養(yǎng)管理

本試驗(yàn)是2012年6—7月份在山東省海陽(yáng)市黃海水產(chǎn)股份有限公司完成。試驗(yàn)動(dòng)物是采用人工繁殖同一批卵孵化后18日齡(底棲初期), 初始體長(zhǎng)為2 cm左右的半滑舌鰨稚魚(yú)。

試驗(yàn)設(shè)4個(gè)處理組, 分別投喂3組試驗(yàn)飼料和一組活餌料鹵蟲(chóng)(鹵蟲(chóng)干重營(yíng)養(yǎng)成分: 粗蛋白占52.79%; 粗脂肪占25.32%)。每組三個(gè)平行。孵化后18d的試驗(yàn)魚(yú)隨機(jī)分配在12個(gè)直徑1 m, 高1 m的圓柱形養(yǎng)殖桶中, 每桶 250尾魚(yú), 暫養(yǎng)一周后正式開(kāi)始試驗(yàn)。水位50 cm左右, 流水養(yǎng)殖, 連續(xù)充氣,飼料組每天投喂微顆粒飼料5次(7:00、11:30、16:00、18:30和 21:30), 鹵蟲(chóng)組每天投喂鹵蟲(chóng) 2次(7:00和21:30), 飽食投喂。投喂時(shí)水位保持在 20 cm左右,并停止向缸中注水, 投喂30min后吸底, 保持流水。試驗(yàn)期間水溫在(23—25)℃。

1.2 微顆粒飼料的配制及分析

3組微顆粒飼料分別以基礎(chǔ)飼料添加不同含量的精胺(由 Sigma公司生產(chǎn), S3256)配制而成, 基礎(chǔ)飼料由白魚(yú)粉(購(gòu)自青島金海力水產(chǎn)科技有限公司),大豆?jié)饪s蛋白(購(gòu)自青島金海力水產(chǎn)科技有限公司),磷蝦粉(購(gòu)自濟(jì)南科瑞爾實(shí)業(yè)有限公司)和預(yù)混料(購(gòu)自青島金海力水產(chǎn)科技有限公司)等組成。精胺的添加量依據(jù) Peres, et al.[10]對(duì)海鱸魚(yú)(Dicentrarchus labrax)仔魚(yú)的研究。3種試驗(yàn)飼料組分別為: F1, 基礎(chǔ)飼料; F2, 基礎(chǔ)飼料+0.10%的精胺; F3,基礎(chǔ)飼料+0.33%的精胺。F4為鹵蟲(chóng)組, 投喂鮮活餌料鹵蟲(chóng)。

試驗(yàn)飼料配方參照表 1。精胺在飼料中的添加水平分別為0(F1)、0.10%(F2)和0.33%(F3)。先將各種原料粉碎至 88 μm以下, 充分混勻, 加入鮮魷魚(yú)漿和魚(yú)油, 再次混合均勻后制粒。然后 60℃烘干,破碎, 過(guò)篩, 得到粒徑為(150—200)、(200—300)和(300—450) μm三種規(guī)格的微顆粒飼料, 置于–20℃的冰箱中備用。

飼料中水分的測(cè)定為 105℃烘干恒重法(24h);粗蛋白的測(cè)定為凱氏定氮法, 采用意大利 UDK142型全自動(dòng)凱氏定氮儀; 粗脂肪的測(cè)定為索氏抽提法,采用丹麥SOXTECTM2050型索氏抽提儀。

表1 試驗(yàn)飼料配方及營(yíng)養(yǎng)組成Tab. 1 Diet formulation and proximate composition (%)

1.3 取樣與分析

取樣 體重、酶活性的測(cè)定, 每 14d取樣 1次, 每桶取20尾用于體重的測(cè)定, 10尾用于酶活性的測(cè)定; 腸道組織切片材料, 試驗(yàn)結(jié)束時(shí)(28d)取樣1次。采樣時(shí)間為每日第一次投餌之前進(jìn)行。取樣后放于–80℃冷凍保存。

樣品的處理 取魚(yú)的腹部?jī)?nèi)臟團(tuán)(鰓蓋骨后緣至肛門(mén)后緣)于離心管中, 加入4倍質(zhì)量比的冰冷雙蒸水, 勻漿。勻漿液一部分用于提取刷狀緣膜, 剩余勻漿液在4℃條件下3300 g/min離心3min, 取上清液, 稀釋成適當(dāng)?shù)臐舛扔糜跍y(cè)定腸酶的活力, 包括堿性磷酸酶、亮氨酸氨基肽酶和亮氨酸—丙氨酸肽酶。

刷狀緣膜的分離提取 參照Crane, et al.[11]的方法提取腸刷狀緣膜(BBM), 用于測(cè)定腸刷狀緣膜中的堿性磷酸酶和亮氨酸氨基肽酶的活力。

腸道組織切片的制備 取全魚(yú), 用 Davidesdous液固定24h后, 置于70%乙醇中保存。乙醇脫水, 石蠟包埋, LEICA RM2235型切片機(jī)連續(xù)切片,切片厚度為 6 μm, HE染色, 中性樹(shù)脂封片, Nikon E800型顯微鏡下觀察、拍照。

1.4 指標(biāo)測(cè)定與方法

生長(zhǎng)性能計(jì)算 特定生長(zhǎng)率SGR(%/d)=(ln末均干重–ln初均干重)/飼養(yǎng)天數(shù)×100

存活率SR(%)=(試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)的魚(yú)尾數(shù)–死亡的魚(yú)尾數(shù))/試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)的魚(yú)尾數(shù)×100

生理生化指標(biāo)的測(cè)定 堿性磷酸酶和酶液蛋白濃度均采用南京建成生物工程研究所試劑盒測(cè)定。亮氨酸氨基肽酶(LAP)的測(cè)定參照Maroux, et al.[12]的方法。亮氨酸-丙氨酸肽酶(Leu-Ala)的測(cè)定參照Nicholon, et al.[13]的方法。

每組選取 5個(gè)腸道組織切片, 進(jìn)行腸微絨毛(腸道上皮細(xì)胞表面伸出的細(xì)長(zhǎng)指狀突起)長(zhǎng)度和黏膜(腸道內(nèi)壁的黏膜層)厚度的測(cè)量, 觀察腸道發(fā)育情況。

1.5 統(tǒng)計(jì)分析

試驗(yàn)結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)誤表示, 經(jīng)SPASS17.0處理, 使用單因素方差分析(One-Way ANOVA), 用Duncan 氏法進(jìn)行多重差異顯著性比較, 顯著水平P<0.05。若差異顯著則采用用 Duncan 氏檢驗(yàn)進(jìn)行多重比較分析。

2 結(jié)果

2.1 微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)生長(zhǎng)與成活率的影響

不同試驗(yàn)組的生長(zhǎng)指標(biāo)見(jiàn)表2。結(jié)果顯示: 飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨仔稚魚(yú)的干重影響不大, 各飼料組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 鹵蟲(chóng)組與各飼料組之間存在顯著性差異(P<0.05); 試驗(yàn)魚(yú)的SGR在14d和28d時(shí)都是鹵蟲(chóng)組最高, 且與各飼料組之間差異性顯著(P<0.05), 飼料組中F2組與未添加精胺的 F1組在 14d和 28d都存在顯著差異(P<0.05), 但F2組與F3組之間差異不顯著(P>0.05)。

在試驗(yàn)結(jié)束時(shí), 鹵蟲(chóng)組的存活率(表 2)達(dá)到99.60%, 顯著高于各飼料組(P<0.05); 各飼料組中, F3組存活率僅為60.27%, 顯著低于F1和F2組(P<0.05),而F1和F2組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

2.2 微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道消化酶活力的影響

14d時(shí)鹵蟲(chóng)組的堿性磷酸酶活性顯著低于各飼料組(P<0.05)(圖1), 各飼料組間堿性磷酸酶活性沒(méi)有顯著性差異(P>0.05); 28d時(shí), F1組堿性磷酸酶活性顯著低于其他各組(P<0.05), 其他各組間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

表2 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)生長(zhǎng)與成活率的影響Tab. 2 Effects of spermine on the growth and survival rate in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther

圖1 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道堿性磷酸酶比活力的影響Fig. 1 Effect of spermine on alkaline phasphatase relative activities in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther

14d時(shí)F1組魚(yú)體內(nèi)亮氨酸氨基肽酶活力顯著低于其他組(P<0.05), 其他組間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05); 28d時(shí), F2和F3組魚(yú)體內(nèi)亮氨酸氨基肽酶活性沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 但是F2和F3組顯著高于F1和F4組(P<0.05), F1和F4組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)(圖2)。

14d時(shí)F2和F3組魚(yú)體內(nèi)亮氨酸-丙氨酸肽酶活性沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 但明顯低于F1和F4組(P<0.05), F1組明顯地高于F4組(P<0.05); 28d時(shí), F1和 F2組魚(yú)體內(nèi)亮氨酸-丙氨酸肽酶活性沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 但明顯低于F3和F4組(P<0.05), F3組顯著性低于F4組(P<0.05)(圖3)。

刷狀緣膜堿性磷酸酶與亮氨酸-丙氨酸肽酶的比值(AP/leu-ala)(圖4)在 14d時(shí)比值大小依次是F3>F2>F1>F4, 并且各組之間存在顯著性差異(P>0.05); 28d時(shí) F2和 F3組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 顯著高于F1和F4組(P<0.05), F1和F4組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

刷狀緣膜亮氨酸氨基肽酶與亮氨酸—丙氨酸肽酶的比值(LAP/leu-ala)(圖5)在14d時(shí)F2組、F3組和F4組高于F1組, 但是各組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05); 28d時(shí)F1組最低, F3組最高, F2組和F4組之間沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 且F3組和F2組之間也沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

2.3 微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

各組試驗(yàn)魚(yú)的腸道發(fā)育情況如表3和圖6所示。F4組的腸道發(fā)育情況最好, 微絨毛長(zhǎng)度顯著大于其他各組(P<0.05); 黏膜厚度略小于 F2組, 但是沒(méi)有顯著性差異(P>0.05), 較 F1和 F3組有顯著性差異(P<0.05)。F2組微絨毛長(zhǎng)度和黏膜厚度都顯著大于F1和F3組(P<0.05)。F1和F3組微絨毛長(zhǎng)度和黏膜厚度都沒(méi)有顯著性差異(P>0.05)。

圖2 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)亮氨酸氨基肽酶比活力的影響Fig. 2 Effect of spermine on leucine aminopeptidase relative activities in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther

圖3 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)亮氨酸-丙氨酸肽酶比活力的影響Fig. 3 Effect of spermine on Leucine-alanine peptidase relative activities in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther

圖4 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)刷狀緣膜堿性磷酸酶/亮氨酸-丙氨酸肽酶比值的影響Fig. 4 Effect of spermine on BBM alkaline phasphatase / Leucine-alanine peptidase in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther

表3 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道顯微結(jié)構(gòu)指標(biāo)的影響Tab. 3 Effects of spermine on the intestinal microscopic structure parameters in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther (μm)

圖5 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)刷狀緣膜亮氨酸氨基肽酶/亮氨酸-丙氨酸肽酶比值的影響Fig. 5 Effect of spermine on BBM leucine aminopeptidase / Leucinealanine peptidase in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther

3 討論

3.1 在微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)生長(zhǎng)與成活率的影響

經(jīng)過(guò)四周的試驗(yàn), 各飼料組在14d和28d的干重并沒(méi)有顯著性的差異, 這一結(jié)果與海鱸魚(yú)[10]的研究結(jié)果相似。F2組的特定生長(zhǎng)率在14d和28d都高于F1和F3組, 并且和F1組存在顯著差異, 說(shuō)明微顆粒飼料中添加一定量的精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)的生長(zhǎng)有一定的促進(jìn)作用。

關(guān)于精胺對(duì)幼體動(dòng)物存活率的影響, 不同的試驗(yàn)結(jié)果有所不同。Peres, et al.[10]對(duì)海鱸仔魚(yú)研究中,成活率隨著微顆粒飼料中添加精胺量的增加而增加。而Sousadias, et al.[14]發(fā)現(xiàn)高劑量的精胺對(duì)雞會(huì)有毒副作用。在本試驗(yàn)中, 添加0.10%精胺的試驗(yàn)組(F2組)與未添加精胺的試驗(yàn)組(F1組)的成活率沒(méi)有顯著性差異, 而添加 0.33%精胺的試驗(yàn)組(F3組)的成活率僅為60.27%, 明顯低于F1和F2組的成活率。這樣說(shuō)明微顆粒飼料中添加 0.33%的精胺可能對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)產(chǎn)生毒副作用, 從而影響了其存活。

3.2 在微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)消化酶活力的影響

水產(chǎn)動(dòng)物攝食的飼料需要經(jīng)過(guò)消化系統(tǒng)的機(jī)械處理和消化酶的分解, 逐步達(dá)到可吸收狀態(tài)而被消化道的上皮吸收[15]。分析消化酶活性的水平, 能夠體現(xiàn)不同處理水平下各組之間消化系統(tǒng)發(fā)育情況的差異[16]。在腸的上皮細(xì)胞中存在著兩種類型的酶類:刷狀緣膜酶(存在于腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞膜中, 例如堿性磷酸酶和亮氨酸氨基肽酶)和胞漿酶(存在于腸上皮細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)中, 主要是以肽酶形式存在, 例如亮氨酸-丙氨酸肽酶)。腸道中這些不同的酶起著互補(bǔ)的作用, 有助于營(yíng)養(yǎng)成分在腸上皮細(xì)胞的消化和吸收[17]。

在對(duì)幾種仔稚魚(yú)的腸道發(fā)育的研究中發(fā)現(xiàn), 伴隨著小腸延長(zhǎng)和腸黏膜褶皺高度增加等體現(xiàn)腸發(fā)育成熟的現(xiàn)象, 腸道中的刷狀緣膜酶活性也急劇地增強(qiáng)[18—20]。堿性磷酸酶(AP)是非特異性磷酸單酯酶,主要存在于前腸的刷狀緣膜上, 其活性一定程度上能夠反映腸上皮細(xì)胞的發(fā)育水平, 因此常作為水生動(dòng)物腸黏膜發(fā)育成熟度的標(biāo)識(shí)酶[21]。在試驗(yàn)中, 添加精胺組的試驗(yàn)魚(yú)在14d和28d都含有較高的堿性磷酸酶, 這說(shuō)明精胺可以促進(jìn)半滑舌鰨稚魚(yú)腸上皮細(xì)胞的成熟。Peres, et al.[10]對(duì)海鱸魚(yú)的研究中也發(fā)現(xiàn)了類似的現(xiàn)象, 微顆粒復(fù)合飼料中添加 0.33%的精胺后, 堿性磷酸酶活性顯著性提高。亮氨酸氨基肽酶(LAP)是一種蛋白分解酶, 能水解肽鏈 N端由亮氨酸和其他氨基酸所形成的肽鍵[22]。刷狀緣膜亮氨酸氨基肽酶活性的增加能夠表明腸上皮細(xì)胞的成熟[23,24]。跟許多試驗(yàn)的結(jié)果類似, Peres, et al.[10]研究海鱸魚(yú)在31和38d時(shí)添加0.33%精胺組都含有最高的亮氨酸氨基肽酶活性。在本試驗(yàn)中亮氨酸氨基肽酶在14d時(shí)添加精胺的兩飼料組活性比F1和F4組都要高, 在 28d是也是出現(xiàn)這樣的結(jié)果, 并且差別更加顯著。這說(shuō)明微顆粒飼料中添加精胺后能夠增加亮氨酸氨基肽酶的活性, 表明精胺能夠促進(jìn)腸道上皮細(xì)胞的成熟。

Nicholson, et al.[25]檢測(cè)出亮氨酸-丙氨酸肽酶(leu-ala)大部分存在腸上皮細(xì)胞胞質(zhì)中, 是腸上皮細(xì)胞胞質(zhì)中的特有酶類。在幼體發(fā)育的前3周里亮氨酸-丙氨酸肽酶的活性會(huì)很高, 隨著幼體的生長(zhǎng)其活性會(huì)不斷降低[26], 這種酶活性隨著幼體發(fā)育的變化為評(píng)價(jià)腸道的發(fā)育水平提供了很好指標(biāo)。在本試驗(yàn)中, 添加精胺組的試驗(yàn)魚(yú)在14d時(shí)添加精胺的F2和 F3兩組的亮氨酸-丙氨酸肽酶活性明顯低于鹵蟲(chóng)組和F1組, 在28d時(shí)添加0.10%精胺組(F2組)含有亮氨酸-丙氨酸肽酶活性最低, 這說(shuō)明精胺的添加促使亮氨酸-丙氨酸肽酶的活性降低, 這正是腸道發(fā)育的表現(xiàn)。

圖6 精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道組織的影響Fig. 6 Effect of spermine on intestine structure in the postlarvae of Cynoglossus semilaevis Günther

堿性磷酸酶/亮氨酸-丙氨酸肽酶的比值(AP/leu-ala)和亮氨酸氨基肽酶/亮氨酸-丙氨酸肽酶的比值(LAP/leu-ala)被Zambonino, et al.[17]認(rèn)為是反映腸道發(fā)育成熟的重要指標(biāo)。Suzer, et al.[27]也認(rèn)為魚(yú)類腸上皮細(xì)胞一個(gè)成熟的特點(diǎn)就是有一個(gè)高的刷狀緣膜酶水平和低的胞漿酶水平。在本試驗(yàn)中, AP/leu-ala在14d時(shí)添加精胺的兩組(F2和F3)都高于其他兩組(F1和F4), 而且差異性顯著。28d時(shí)也有同樣的結(jié)果,只不過(guò)是F2組略高于F3組。LAP/leu-ala在14d時(shí)F3組最高, 雖然與F2和F4之間沒(méi)有顯著性差異, 但是與F1組之間存在著顯著性差異。Zouiten, et al.[28]對(duì)海鱸魚(yú)和Boglino, et al.[29]對(duì)塞內(nèi)加爾鰨(Solea senegalensis)的研究中也發(fā)現(xiàn) AP/leu-ala和LAP/leu-ala高的組腸道發(fā)育好。這說(shuō)明添加精胺促進(jìn)了F2和 F3組半滑舌鰨腸道的發(fā)育。

3.3 在微顆粒飼料中添加精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道組織結(jié)構(gòu)的影響

小腸微絨毛長(zhǎng)度和黏膜厚度增加能夠擴(kuò)大腸道的表面積, 促進(jìn)小腸的消化吸收, 是腸道發(fā)育成熟的重要指標(biāo)[5]。有研究表明, 外源性精胺可在腸腔內(nèi)快速被小腸黏膜上皮細(xì)胞吸收[30]。通過(guò)對(duì)幼體動(dòng)物攝入合適劑量的外源多胺, 能夠促進(jìn)幼體動(dòng)物消化道生理生化指標(biāo)達(dá)到成年動(dòng)物水平。

精胺對(duì)于幼體動(dòng)物的腸道成熟有很大的促進(jìn)作用, 尤其是對(duì)小腸黏膜有重要的生物學(xué)意義。在本試驗(yàn)中, 微絨毛長(zhǎng)度以F4組最高, F2組次之。黏膜厚度以F2組最高, 添加精胺量為0.1%組(F2組)魚(yú)體微絨毛長(zhǎng)度顯著大于未添加精胺組(F1組)和添加0.33%精胺組(F3組), 并且F2組黏膜厚度比鹵蟲(chóng)組還要厚, 雖然兩組之間沒(méi)有顯著性差異。這說(shuō)明外源精胺的攝入能夠增加小腸微絨毛長(zhǎng)度和黏膜厚度,能夠促進(jìn)腸道的提前發(fā)育, 表明添加精胺量為0.1%組的腸道發(fā)育程度最好。這個(gè)結(jié)果與一些學(xué)者的觀點(diǎn)一致[30,31]。本試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)添加高劑量精胺組試驗(yàn)魚(yú)小腸絨毛長(zhǎng)度比低劑量精胺含量組試驗(yàn)魚(yú)小腸絨毛長(zhǎng)度短, 這是否是因?yàn)樘砑痈吆康木窌?huì)對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道發(fā)育產(chǎn)生負(fù)面影響還有待進(jìn)一步研究。

4 結(jié)語(yǔ)

在本試驗(yàn)條件下, 從半滑舌鰨仔稚魚(yú)生理生化和腸道發(fā)育學(xué)指標(biāo)來(lái)看, 在微顆粒飼料中添加精胺能夠促進(jìn)腸道的發(fā)育成熟。但是添加精胺量為0.33%時(shí), 半滑舌鰨死亡率大大增加。因此, 綜合上述數(shù)據(jù)分析認(rèn)為, 微顆粒飼料中添加 0.10%的精胺對(duì)半滑舌鰨稚魚(yú)腸道發(fā)育有促進(jìn)作用。

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THE EFFECT OF MICRODIET SUPPLEMENTATION WITH SPERMINE ON THE GROWTH AND INTESTINAL DEVELOPMENT OF TONGUE SOLE POSTLARVAE

YU Chao-Lei1,2, CHANG Qing2, QIN Bang-Yong1,2and WANG Xin-Xing2
(1. College of Fishers and Life Sciences, Shanghai Ocean University, Shanghai 201306, China; 2. Yellow Sea Fisheries Research Institute, Chinese Academy of Fishery Sciences, Qingdao 266071, China)

To study the effects of spermine on the intestinal development of Cynoglossus semilaevis postlarvae, we selected the subject with initial length of about 2 cm and fed them with microdiets containing 0 (F1), 0.10% (F2), 0.33% (F3) of spermine and live Artemia (F4) for 28 days. The results showed that F4 group exhibited the highest growth and survival rates. The specific growth rate of F2 group was significantly higher than that of F1 and F3 groups (P<0.05). The survival rate of F3 group was 60.27%, which was significantly lower than that of other groups (P<0.05). At day 14, the alkaline phasphatase relative activities (AP) in the bodies of fish fed with spermine-containing microdiet were significantly higher than that in fish fed with the Artemia (P<0.05); there was no significant difference among groups fed with spermine-containg mecrodiets (P>0.05). At day 28, the AP of fish fed with 0.10% spermine was significantly higher than other groups (P<0.05); no significant difference was found among other groups (P>0.05). F2 and F3 groups showed higher leucine aminopeptidase (LAP) specific activities than F1 and F4 groups at day 14 and 28 (P<0.05), but there was no significant difference between F2 and F3 (P>0.05). F2 group showed the lowest leucine-alanine peptidase (leuala) specific activity at day 14 and 28 (P<0.05). The microvilli length of Artemia group was significantly greater than that of the other groups (P<0.05). The mucosal layer of Artemia group was apparently but insignificantly hinner than that of F2 group (P>0.05). Both the length of microvilli and the thickness of the mucosal layer in F2 were greater than those of F1 and F3 groups (P<0.05). These results suggested that 0.10% spermine in microdiet had positive effects on the intestinal development of tongue sole postlarvae.

Microdiet; Spermine; Cynoglossus semilaevis; Postlarvae; Intestinal development

S965.3

A

1000-3207(2014)03-0540-08

10.7541/2014.76

2013-05-08;

2013-12-22

國(guó)家自然基金青年科學(xué)基金項(xiàng)目(31101913)資助

于朝磊(1987—), 男; 山東聊城人; 碩士; 主要從事海水仔稚魚(yú)營(yíng)養(yǎng)與個(gè)體發(fā)育的研究。E-mail: wdmmhy19871125@163.com

常青, E-mail: changqing@ysfri.ac.cn