呂賽平，劉琴，王春陽，金國兵，鄒學(xué)森

(江西省腫瘤醫(yī)院檢驗(yàn)科，江西 南昌330029)

根據(jù) 《ISO15189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》的要求，實(shí)驗(yàn)室在適用且可能的情況下應(yīng)該對(duì)臨床檢驗(yàn)結(jié)果的測量不確定度進(jìn)行評(píng)估[1]。嚴(yán)格評(píng)估臨床檢驗(yàn)不確定度的方法是先對(duì)測量過程進(jìn)行全面分析，識(shí)別每一個(gè)可能的不確定度來源后再加以評(píng)估，這種方法費(fèi)時(shí)費(fèi)力，難以在臨床檢驗(yàn)工作中推廣使用[2]。在此背景下，各種測量不確定度的簡化評(píng)估方法逐步應(yīng)用于臨床，本研究即采用歐洲診斷試劑廠家協(xié)會(huì)頒發(fā)的醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室測量不確定度評(píng)估方法對(duì)我科自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白的測量不確定度進(jìn)行評(píng)估，現(xiàn)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 試驗(yàn)樣本 根據(jù)總蛋白的MDL采用混合血清法配制兩個(gè)濃度水平的試驗(yàn)樣本，要求患者血清無溶血、無黃疸、無脂血，并且要求配制好的低值MDL樣本、高值MDL樣本總蛋白濃度分別在44~46g/L、79~81g/L區(qū)間之內(nèi)。將兩個(gè)試驗(yàn)樣本各分裝成25份，每份至少0.5ml，1份用于批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)，其余24份-20℃冰凍保存，用于批間重復(fù)性試驗(yàn)。

1.2 儀器與試劑 日本東芝公司生產(chǎn)的TBA-120FR全自動(dòng)生化分析儀；上海執(zhí)誠生物科技有限公司生產(chǎn)的總蛋白試劑盒 (雙縮脲法)，批號(hào)為ZCJUNM002；英國朗道實(shí)驗(yàn)診斷有限公司生產(chǎn)的復(fù)合校準(zhǔn)品及質(zhì)控品，復(fù)合校準(zhǔn)品批號(hào)為794UN，質(zhì)控品批號(hào)為709UN、498NE。

1.3 測量不確定度的評(píng)定方法

1.3 .1批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn) 測定低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度，每個(gè)樣本批內(nèi)重復(fù)測定10次以上，分別計(jì)算兩個(gè)樣本的均值(MEAN)、標(biāo)準(zhǔn)差(SD)、CVw。

1.3 .2批間重復(fù)性試驗(yàn) 測定低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度，每天測定1次，連續(xù)1個(gè)月，分別計(jì)算兩個(gè)樣本的MEAN、SD、CVB。在此過程中，對(duì)自建檢測系統(tǒng)測定總蛋白進(jìn)行室內(nèi)質(zhì)控，室內(nèi)質(zhì)控在控時(shí)可以直接測定試驗(yàn)樣本，室內(nèi)質(zhì)控失控時(shí)需要查找失控原因并給予糾正，待失控解決后再測定試驗(yàn)樣本。

1.3 .3方法偏倚 根據(jù)衛(wèi)生部臨檢中心組織的室間質(zhì)評(píng)確定自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值 MDL的 CVBias。 具體方法如下：(1)調(diào)取2011-2013年共6次室間質(zhì)評(píng)結(jié)果，每次室間質(zhì)評(píng)含5個(gè)濃度水平的室間質(zhì)評(píng)品，從其中選取2個(gè)濃度水平的室間質(zhì)評(píng)用于計(jì)算方法偏倚，選擇原則是室間質(zhì)評(píng)靶值與低值MDL樣本、高值MDL樣本的總蛋白濃度最近。⑵低值MDL、高值MDL的CVBias均按如下方法計(jì)算：①計(jì)算每次室間質(zhì)評(píng)結(jié)果的百分差值dn(%)，注意dn具有正負(fù)號(hào)。②計(jì)算所有百分差值的平均值dm(%)。③計(jì)算Sdr，

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVw分別為0.86%、0.74%，見表 1。

表1 批內(nèi)重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.2 批間重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVB分別為1.37%、1.41%，見表 2。

表2 批間重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果

2.3 方法偏倚試驗(yàn)結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的CVBias分別為2.31%、3.29%，見表 3、表 4。2.4 EU計(jì)算結(jié)果 自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白在低值MDL、高值MDL的EU分別為5.64%、7.31%。

表3 低值MDL的方法偏倚

表4 高值MDL的方法偏倚

3 討論

測量不確定度是指表征合理地賦予被測量之值的分散性，與測量結(jié)果相聯(lián)系的參數(shù)[2]。測量不確定度可以用兩種方法表述，以標(biāo)準(zhǔn)差表述時(shí)為絕對(duì)不確定度，以變異系數(shù)表述時(shí)為相對(duì)不確定度，目前臨床上以后者更為常用[3]。根據(jù)不確定度的評(píng)定方法，測量不確定度可以分為A類不確定度、B類不確定度兩大類。A類不確定度采用統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)定，主要包括批內(nèi)重復(fù)性不確定度、批間重復(fù)性不確定度等。B類不確定度采用非統(tǒng)計(jì)學(xué)方法評(píng)定，主要包括方法偏倚不確定度，其他原因的不確定度如校準(zhǔn)品不確定度、分析前因素不確定度等[4,5]。在合成不確定度評(píng)定過程中，批內(nèi)重復(fù)性不確定度、批間重復(fù)性不確定度、方法偏倚不確定度較容易確定，校準(zhǔn)品不確定度由生產(chǎn)廠商提供，但是分析前因素不確定度則難以確定，從而使得合成不確定度難以準(zhǔn)確量化，因此目前臨床上評(píng)估測量不確定度時(shí)常常計(jì)算其擴(kuò)展不確定度[6]。

在本研究中，由于我們未能成功向英國朗道實(shí)驗(yàn)診斷有限公司索取校準(zhǔn)品不確定度，因此我們只能根據(jù)批內(nèi)重復(fù)性不確定度、批間重復(fù)性不確定度、方法偏倚不確定度等3個(gè)因子評(píng)估我科自建檢測系統(tǒng)測定血清總蛋白的擴(kuò)展不確定度。在研究過程中，我們對(duì)試驗(yàn)樣本濃度提出了一定的要求。MDL是不同于參考值的另外一些限值，這些值在疾病診斷過程中發(fā)揮排除及確診的作用，或者可以用于評(píng)估疾病的預(yù)后。由于MDL在臨床檢驗(yàn)結(jié)果的解釋過程中的有著十分重要的地位，因此選擇MDL作為試驗(yàn)樣本濃度的臨床意義是不言而喻的。

本研究結(jié)果顯示我科自建檢測系統(tǒng)測定血清總 蛋 白在 低 值 MDL 的 CVw、CVB、CVBias分 別 為0.86%、1.37%、2.31%，EU為5.64%； 在高值 MDL的 CVw、CVB、CVBias分 別 為 0.74% 、1.41% 、3.29% ，EU為7.31%。由于目前臨床上暫未對(duì)各個(gè)檢驗(yàn)項(xiàng)目的EU作出明確要求，因此在解釋本研究結(jié)果時(shí)我們難以作出定論。盡管如此，在日常工作過程中，如果我們狠抓分析前質(zhì)量控制，嚴(yán)格控制其他原因的不確定度，這樣就可以最大限度地縮小測量不確定度評(píng)估試驗(yàn)得到的理論EU值與實(shí)際EU值的差距，此時(shí)本方法得到的試驗(yàn)結(jié)果可以準(zhǔn)確地反映臨床檢驗(yàn)結(jié)果的分散性，從而有利于測量不確定度評(píng)估更好地應(yīng)用于臨床。

[1]中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)．IS015189醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則[S]．北京：中國合格評(píng)定國家認(rèn)可委員會(huì)，2007．

[2]International Organization for Standardization．ISO guide to the expression of uncertainty in measurement[S].Geneva：ISO，1995．

[3]陳麗.羅氏電化學(xué)發(fā)光檢測血清腫瘤標(biāo)志物測量不確定度的測定[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,9(5):501-502.

[4]梅敏,李海珠,帥虎.血清谷丙轉(zhuǎn)氨酶、谷草轉(zhuǎn)氨酶測定分析中的測量不確定度評(píng)定[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2010,28(4):371-372，394.

[5]Guerrasio R,Haberhauer-Troyer C,Steiger M,et al.Measurement uncertainty of isotopologue fractions in fluxomics determined via mass spectrometry[J].Anal Bioanal Chem,2013,405(15):5133-5146.

[6]謝華斌,盛楠,林永志,等醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室電化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)測量不確定度評(píng)價(jià)[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志,2013,34(1):85-87.