齊發(fā)梅，李金龍，齊占斌

(1、甘肅省人民醫(yī)院，甘肅 蘭州 730000；2、寧夏醫(yī)科大學(xué)，寧夏 銀川 075000；3、甘肅中醫(yī)學(xué)院；甘肅 蘭州730000)

超氧化物歧化酶(superoxide dismutase，SOD)是一類廣泛存在于生物體內(nèi)的金屬酶，是清除超氧陰離子自由基使細(xì)胞免受損害的一種重要的抗氧化酶，對(duì)機(jī)體的氧化與抗氧化平衡起著至關(guān)重要的作用。因此了解機(jī)體內(nèi)SOD水平變化對(duì)于判斷體內(nèi)自由基的產(chǎn)生與清除平衡狀態(tài)有著重要意義。線性范圍是試劑盒的重要性能指標(biāo)之一。線性范圍窄的試劑盒在臨床上的應(yīng)用就會(huì)受到限制，滿足不了實(shí)驗(yàn)室及臨床需求[1]。EP6-A2文件是CLSI在EP6-A文件的基礎(chǔ)上制定出來的，EP6-A2方法操作簡(jiǎn)便，適合于臨床常規(guī)實(shí)驗(yàn)室人員評(píng)價(jià)線性，是目前最好評(píng)價(jià)線性的方法[2]。本文采用EP6-A2方法，對(duì)比色法測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒線性范圍進(jìn)行驗(yàn)證，有利于比色法測(cè)定SOD方法的推廣應(yīng)用，保證檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性、方法的可行性，從而更好的為臨床服務(wù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1 .1樣品 試劑廠商提供的質(zhì)控液，濃度250U/ml

1.1 .2儀器 OLMPUSAU2700全自動(dòng)生化分析儀。

1.1 .3試劑 血清SOD檢測(cè)試劑盒是福建福緣生物科技有限公司生產(chǎn)的雙試劑試劑盒。試劑盒采用鄰苯三酚自氧化法(PAM)，顯色反應(yīng)強(qiáng)度與SOD的活性呈正相關(guān)關(guān)系。

1.1 .4分析軟件 SPSS 11.5統(tǒng)計(jì)軟件包。

1.2 方法

1.2 .1配制試驗(yàn)樣本 按表1配置。

表1 配制方法

1.2 .2試驗(yàn)測(cè)試 將上述 6個(gè)試驗(yàn)樣本按1-6的

順序測(cè)定一次，再按隨機(jī)順序測(cè)定第二次(實(shí)驗(yàn)操作嚴(yán)格按照SOP文件進(jìn)行，室內(nèi)質(zhì)控在控)。

1.2 .3離群值檢測(cè) 以理論濃度為X軸、測(cè)定濃度為y軸繪制散點(diǎn)圖，檢查是否存在非常明顯的非線性；并通過目視判斷試驗(yàn)數(shù)據(jù)有無明顯的離群點(diǎn)。然后計(jì)算SDr。

1.2 .4回歸分析 使用SPSS11.5軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，將測(cè)定數(shù)據(jù)分別擬合一次、二次和三次多項(xiàng)式如表2。計(jì)算每個(gè)非線性系數(shù)斜率的標(biāo)準(zhǔn)差，判斷非線性系數(shù)與0之間有的差異是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(t檢驗(yàn))。

1.2 .5計(jì)算線性偏差 當(dāng)最適多項(xiàng)式為二次或三次多項(xiàng)式時(shí)，需計(jì)算每個(gè)濃度點(diǎn)處的線性偏差。公式為DLi=p(Xi)-p'(Xi)。式中X的取值范圍為 X1…X6；p'(Xi)為一次回歸多項(xiàng)式在點(diǎn) Xi處的計(jì)算值。

2 結(jié)果

2.1 對(duì)6個(gè)試驗(yàn)樣本進(jìn)行SOD測(cè)定，結(jié)果見表3。

2.2 離群值檢測(cè) 首先繪制散點(diǎn)圖，繪制檢測(cè)結(jié)果散點(diǎn)圖見圖1。由圖1可知本研究12個(gè)數(shù)據(jù)中沒有數(shù)據(jù)明顯的離群點(diǎn)?？梢赃M(jìn)行下一步數(shù)據(jù)處理。

表2 回歸方程類型

表3 6個(gè)實(shí)驗(yàn)樣本測(cè)定的SOD濃度(U/m l)

圖1 檢測(cè)結(jié)果散點(diǎn)圖

2.3 計(jì)算SDr剔除第一組試驗(yàn)樣本數(shù)據(jù)，計(jì)算得到SDr=0.43%。小于實(shí)驗(yàn)室5%的允許誤差，結(jié)果可以線性評(píng)價(jià)。

2.4 回歸分析 具體結(jié)果見表4。

表4 SOD線性驗(yàn)證的回歸分析結(jié)果

由表4可知，非線性系數(shù)即二次回歸多項(xiàng)式的b2、三次回歸多項(xiàng)式的b2以及b3與“0”之間的差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，拒絕二次及三次多項(xiàng)式，最適合的多項(xiàng)式為一次多項(xiàng)式，不需要計(jì)算DLi。最適方程為Y=1.0161X-0.0054。符合線性，線性范圍0~250 U/ml。

3 討論

線性是反映方法性能評(píng)價(jià)的重要指標(biāo)之一，在某種意義上，線性范圍越寬，該試劑盒就越方便用于臨床，但每一種試劑都有其一定的線性范圍，線性范圍內(nèi)的結(jié)果才具有可靠性。本文按EP6-A2文件要求[3-5]對(duì)鄰苯三酚自氧化法試劑盒進(jìn)行了驗(yàn)證，結(jié)果為散點(diǎn)圖未見離群點(diǎn)與明顯的非線性，計(jì)算得到的SDr為0.43%小于實(shí)驗(yàn)室允許誤差5%。對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行回歸分析，結(jié)果顯示，二次多項(xiàng)式模型的非線性系數(shù)b2，或三次多項(xiàng)式模型的b2或b3中任一個(gè)與“0”比較，均無顯著差異(P>0.05)，最適合的多項(xiàng)式為一次多項(xiàng)式，為Y=1.0161X-0.0054。符合線性，線性范圍0~250U/m l，與試劑盒提供的線性范圍相符合，所以，該試劑盒可以滿足臨床需求。另外，鄰苯三酚比色法測(cè)定SOD試劑盒與以往試劑相比，具有試劑穩(wěn)定、標(biāo)本用量少、準(zhǔn)確度和精密度高等優(yōu)點(diǎn)[6]，試劑盒即可測(cè)定血清樣本也可測(cè)定血漿樣本，而且可用于全自動(dòng)生化分析儀、操作簡(jiǎn)便快捷等優(yōu)點(diǎn)，適合各級(jí)醫(yī)院使用，是一種理想的、值得推廣應(yīng)用的檢測(cè)SOD試劑。

[1]馮仁豐.臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理技術(shù)基礎(chǔ)[M].第2版,上海:上?？茖W(xué)技術(shù)文獻(xiàn)出版社,2007:39-50.

[2]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the Linearity of Quantitative Measurement Procedures[S].EP6-A2,CLSI,2003.

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[4]呂賽平,劉琴,鄒學(xué)森.應(yīng)用EP6-A2方法驗(yàn)證血糖試劑盒的線性范圍[J].實(shí)驗(yàn)與檢驗(yàn)醫(yī)學(xué),2011,29(1):45-46,59.

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[6]張忠,高靜,董振南,等.比色法測(cè)定超氧化物歧化酶的臨床評(píng)價(jià)及其應(yīng)用研究[J].標(biāo)記免疫分析與臨床,2011,18(2):105-107.