韓 蓓 葛 華*

（包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

不同孕齡氣體信號分子NO、CO和H2S與胚胎停育相關(guān)性的研究

韓 蓓 葛 華*

（包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科，內(nèi)蒙古 包頭 014010）

目的 研究不同孕齡氣體信號分子與胚胎停育的相關(guān)性，并確定劑量反應(yīng)關(guān)系，以提供作為胚胎停育篩查的標(biāo)志物。方法 選擇對照組、病例組各90例，采集外周靜脈血，采用ELISA方法，測定血漿中NO、CO和H2S的濃度。結(jié)果 在正常妊娠和胚胎停育的孕婦外周血中均可檢測到內(nèi)源性氣體信號分子NO、CO和H2S的存在。對照組NO、CO和H2S濃度隨孕齡增加而升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著性差異，P＜0.05。病例組NO和H2S濃度隨孕齡增加而升高，具有顯著性差異，P＜0.05；病例組不同孕齡CO濃度隨孕齡增加呈升高趨勢，但無顯著性差異。結(jié)論 NO、CO和H2S濃度降低是導(dǎo)致胚胎停育的重要因素。

胚胎停育；妊娠；氣體信號分子；孕齡；一氧化氮；內(nèi)源性一氧化碳；硫化氫

胚胎停育是指胚胎或胎兒已死亡滯留在宮腔內(nèi)尚未自然排出者，它是一種特殊情況的自然流產(chǎn)。大多數(shù)孕婦胎兒停止發(fā)育后無明顯癥狀，部分孕婦可能出現(xiàn)陰道流血，一般無腹痛，這與先兆流產(chǎn)不同。B超監(jiān)測胚胎，如≥6周無妊娠囊，或雖有妊娠囊但變形皺縮，當(dāng)妊娠囊已≥4 cm卻看不到胎芽，胎芽的頭臂長度≥1.5 cm卻無胎心博動(dòng)，即可判定胚胎停育。

生物體及細(xì)胞內(nèi)存在復(fù)雜多樣的信號途徑，其中氣體信號分子以其獨(dú)有的可連續(xù)產(chǎn)生、傳播迅速、快速彌散等特點(diǎn)使生物醫(yī)學(xué)研究進(jìn)入了全新階段。氣體信號分子即NO、CO和H2S等，是一種相對分子質(zhì)量較小的氣體分子，是一種獨(dú)特的、具有類似特性的血管活性物質(zhì)，具有不通過受體發(fā)揮作用、可以自由通過細(xì)胞膜、內(nèi)源性關(guān)鍵酶可調(diào)節(jié)其生成、在生理濃度時(shí)有很明確的特殊功能、依賴或不依賴第二信使介導(dǎo)其細(xì)胞學(xué)效應(yīng)等特點(diǎn)，但它們都具有特定的細(xì)胞和分子作用的靶點(diǎn)，具有舒張血管、抑制血小板聚集和抑制細(xì)胞增殖等作用。因此，氣體信號分子是從另一個(gè)角度去審視胚胎停育發(fā)生的原因，更加完善胚胎停育病因的確定，有助于監(jiān)測胚胎停育的發(fā)生與早期干預(yù)。

1 資料與方法

1.1 資料

180例血樣標(biāo)本來自內(nèi)蒙古科技大學(xué)包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院產(chǎn)科門診及病房孕56～91 d胚胎停育的患者和正常對照組人群，采集的靜脈血于EDTA-Na2抗凝，離心后取上層血漿進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。

1.2 方法

1.2.1 實(shí)驗(yàn)分組

病例組：共90例，年齡26～35歲，身體健康，根據(jù)B超監(jiān)測胚胎，≥8周有妊娠囊但變形皺縮，當(dāng)妊娠囊已≥4 cm卻看不到胎芽，胎芽的頭臂長度≥1.5 cm卻無胎心搏動(dòng)者，且孕酮、β-HCG一周內(nèi)連續(xù)檢測3次，結(jié)果無明顯升高甚至降低者；正常對照組：共90例，年齡26～35歲，身體健康，正常要求人工流產(chǎn)婦女，孕齡≥8周，胚胎監(jiān)測符合正常妊娠，且孕酮、β-HCG一周內(nèi)連續(xù)檢測3次，結(jié)果呈顯著倍增趨勢者；將全部樣本按孕齡分組，分為妊娠56～63、64～70、71～77及78～91 d共4組。

1.2.2 實(shí)驗(yàn)方法

本實(shí)驗(yàn)研究采用酶聯(lián)免疫法。

1.2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

2 結(jié) 果

2.1 人群年齡比

經(jīng)過統(tǒng)計(jì)分析，病例組和對照組年齡比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＞0.05，可認(rèn)為兩組人群年齡無差異。

2.2 不同孕齡氣體信號分子測定結(jié)果

從表1可以看出，對照組三種氣體信號分子濃度隨孕齡的增加逐漸升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果有顯著性差異，P＜0.05。從表2可以看出，病例組NO、H2S濃度隨孕齡的延長逐漸升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果有顯著性差異，P＜0.05；CO濃度隨孕齡的延長雖然有逐漸升高的趨勢，但經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，無顯著性差異，P＞0.05。

表1 對照組不同孕齡氣體信號分子測定結(jié)果（）

表1 對照組不同孕齡氣體信號分子測定結(jié)果（）

組別例數(shù) NO CO H2S 56～63 d 21 95.8333±35.4063219.2143±88.0137758.0952±373.8163 64～70 d 22 120.4318±46.9866285.8636±79.0762876.3636±294.3401 71～77 d 24 127.3333±37.2936285.5208±79.8906938.1250±257.3308 78～91 d 23 130.1957±25.9714289.8261±58.07021008.2610±190.9224檢驗(yàn)值 - 3.846 8.416 8.512 P值 - 0.012 0.038 0.037

表2 病例組不同孕齡氣體信號分子測定結(jié)果（）

表2 病例組不同孕齡氣體信號分子測定結(jié)果（）

組別例數(shù) NO CO H2S 56～63 d 24 73.4792±5.2822163.4792±33.1142 593.9583±121.5567 64～70 d 22 82.2273±14.2107188.5227±39.6080 604.5455±138.3999 71～77 d 20 96.1500±18.2922178.7750±41.9512 606.0000±134.4051 78～91 d 24 97.1250±35.3040193.0625±48.7387 739.5833±151.6139檢驗(yàn)值 - 30.812 2.392 6.027 P值 - 0.000 0.074 0.001

2.3 同一孕齡不同組間氣體信號分子測定結(jié)果

2.3.1 孕齡56～63 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果

從表3可以看出，在孕齡56～63 d時(shí)，病例組血漿NO、CO濃度低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果有顯著性差異，P＜0.05；病例組血漿H2S濃度低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果無顯著性差異，P＞0.05。

表3 孕齡56～63 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

表3 孕齡56～63 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

組別 例數(shù) 統(tǒng)計(jì)表示 t值 P值NO 對照組 21 95.8333±35.4063 2.865 0.009病例組 24 73.4792±5.2822 CO 對照組 21 219.2143±88.0137 2.737 0.011病例組 24 163.4792±33.1142 H2S 對照組 21 758.0952±373.8163 1.925 0.066病例組 24 593.9583±121.5567

2.3.2 孕齡64～70 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果

從表4可以看出，在孕齡64～70 d時(shí)，病例組血漿NO、CO和H2S濃度低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果有顯著性差異，P＜0.05。

表4 孕齡64～70 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

表4 孕齡64～70 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

組別 例數(shù) 統(tǒng)計(jì)表示 t值 P值NO 對照組 22 120.4318±46.9866 3.650 0.001病例組 22 82.2273±14.2107 CO 對照組 22 285.8636±79.0762 5.162 0.000病例組 22 188.5227±39.6080 H2S 對照組 22 876.3636±294.3401 3.920 0.000病例組 22 604.5455±138.3999

2.3.3 孕齡71～77 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果

從表5可以看出，在孕齡71～77 d時(shí)，病例組血漿NO、CO和H2S濃度低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果有顯著性差異，P＜0.05。

表5 孕齡71～77 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

表5 孕齡71～77 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

組別 例數(shù) 統(tǒng)計(jì)表示 t值 P值NO 對照組 24 127.3333±37.2936 3.608 0.001病例組 20 96.1500±18.2922 CO 對照組 24 285.5208±79.8906 5.674 0.000病例組 20 178.7750±41.9512 H2S 對照組 24 938.1250±257.3308 5.488 0.000病例組 20 606.0000±134.4051

2.3.4 孕齡78～91 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果

從表6可以看出，在孕齡78～91 d時(shí)，病例組血漿NO、CO和H2S濃度低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，結(jié)果有顯著性差異，P＜0.05。

3 討 論

正常妊娠是一種半同種移植，母體免疫系統(tǒng)對胚胎的父系抗原所產(chǎn)生的反應(yīng)表現(xiàn)為一種特殊類型的妊娠免疫耐受，當(dāng)這種免疫耐受狀態(tài)遭到破壞并發(fā)生免疫排斥時(shí)，將可能導(dǎo)致胚胎停育而發(fā)生自然流產(chǎn)。

表6 孕齡78～91 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

表6 孕齡78～91 d不同組間氣體信號分子測定結(jié)果（）

組別 例數(shù) 統(tǒng)計(jì)表示 t值 P值NO 對照組 23 130.1957±25.9714 3.521 0.001病例組 24 97.1250±35.3040 CO 對照組 23 289.8261±58.0702 5.996 0.000病例組 24 193.0625±48.7387 H2S 對照組 23 1008.2610±190.9224 5.152 0.000病例組 24 739.5833±151.6139

NO是重要的內(nèi)皮源性的血管擴(kuò)張劑和平滑肌松弛劑，可擴(kuò)張子宮動(dòng)脈并維持妊娠子宮靜止[1]，但促使子宮內(nèi)膜的蛻膜化是NO促進(jìn)著床發(fā)生的最主要機(jī)制，在蛻膜反應(yīng)中[2]NO可能通過子宮內(nèi)膜的血管系統(tǒng)而發(fā)揮作用，并通過NO強(qiáng)大的血管舒張作用以及增加子宮內(nèi)膜血管通透性促進(jìn)著床的發(fā)生。實(shí)驗(yàn)研究證實(shí)，妊娠后內(nèi)源性NO合成明顯增加，參與調(diào)節(jié)血管擴(kuò)張和子宮免疫抑制[3]。大鼠子宮和胎盤中CO在妊娠末期生成增加，在注射高鐵血紅素后可使子宮肌層的收縮受到抑制[4]，使血管平滑肌舒張，調(diào)節(jié)妊娠期間血流動(dòng)力學(xué)改變，使循環(huán)血管保持一定的松弛，以適應(yīng)妊娠的需要。H2S有很多與NO和CO相似的生理學(xué)作用：對細(xì)胞有保護(hù)作用；調(diào)節(jié)細(xì)胞的增殖和凋亡；血管調(diào)節(jié)機(jī)制。在內(nèi)毒素刺激的小鼠巨噬細(xì)胞炎性反應(yīng)發(fā)生中，H2S促進(jìn)巨噬細(xì)胞中CO，從而介導(dǎo)了H2S對NO的抑制效應(yīng)[5]。在本研究中，通過對外周血NO、CO和H2S濃度的檢測，分別比較相同孕齡對照組及病例組NO濃度的差異，結(jié)果得出：對照組和病例組中隨著孕齡的增長血漿NO與H2S濃度均升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著性差異，隨著孕齡的增長，對照組血漿CO濃度升高，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著性差異，病例組血漿CO濃度有升高趨勢，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析無顯著性差異；相同孕齡情況下，病例組中NO與CO濃度明顯低于對照組，經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析具有顯著性差異，除孕齡56～63 d外，H2S濃度在相同孕齡對照組與病例組之間比較均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。這說明，當(dāng)發(fā)生胚胎停育時(shí)，孕婦血液中的NO、CO和H2S濃度較胚胎正常發(fā)育者明顯降低，這可能是導(dǎo)致胚胎停育的原因之一，進(jìn)一步說明氣體信號分子的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞、細(xì)胞增殖與凋亡、免疫調(diào)節(jié)等重要生理功能在維持正常妊娠中起到了關(guān)鍵性的作用；一旦氣體信號分子在體內(nèi)血液中的濃度降低，將導(dǎo)致一系列的功能紊亂，進(jìn)而可能影響胚胎的正常發(fā)育，造成胚胎停止發(fā)育、流產(chǎn)、早產(chǎn)等一系列嚴(yán)重后果。通過對氣體信號分子濃度與孕齡的研究結(jié)果我們可以做出推測：氣體信號分子的濃度越低，胚胎停育發(fā)生的時(shí)間可能越早。

研究表明，三種氣體信號分子之間分別在生成及代謝途徑、轉(zhuǎn)運(yùn)、作用靶點(diǎn)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路及生物學(xué)效應(yīng)上存在著復(fù)雜的相互作用。NO可以調(diào)節(jié)許多酶和蛋白的活性，并直接導(dǎo)致酶激活或失活[6]。由于NO供體能提高血管平滑肌細(xì)胞中胱硫醚裂解酶的表達(dá)[7]，因此，內(nèi)源性H2S在大鼠主動(dòng)脈組織中的產(chǎn)生可以因?yàn)镹O供體的給予而增高。當(dāng)發(fā)生胚胎停育時(shí)，氣體信號分子在細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞、細(xì)胞增殖與凋亡、免疫調(diào)節(jié)功能中的作用不顯著，相互之間的協(xié)同或制約的機(jī)制消失，導(dǎo)致一系列的功能紊亂，最終造成胚胎停止發(fā)育并最終導(dǎo)致流產(chǎn)的發(fā)生。

因此，我們綜合本研究結(jié)果給出了一個(gè)可以參考的早期胚胎發(fā)育的檢測指標(biāo)，并根據(jù)其在孕婦血漿中的表達(dá)，可以初步判斷胚胎的發(fā)育情況，進(jìn)而采取積極措施預(yù)防甚至干預(yù)胚胎停育的發(fā)生。

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：1671-8194（2014）07-0068-03

包頭市醫(yī)藥衛(wèi)生科技計(jì)劃項(xiàng)目，項(xiàng)目編號：WSJJ2013087

*通訊作者：E-mail:hb2009hb@126.com