靳 京(綜述)，孫秀華(審校)

(大連醫(yī)科大學附屬第二醫(yī)院腫瘤四科,遼寧 大連 116023)

原癌基因廣泛存在于細胞內(nèi)，參與細胞增殖、分化、凋亡等正常生理過程的調(diào)節(jié)，是細胞生命活動中不可缺少的部分。當細胞受到生物、理化等因素作用時，可引起癌基因結(jié)構(gòu)或表達水平的異常，導致癌基因活性過高，進而誘發(fā)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。HER-2/neu基因定位于第17號染色體q21長臂，其參與了多種惡性腫瘤的發(fā)生。該文主要探討HER-2/neu基因近年來在結(jié)腸癌診斷和治療方面的研究進展。

1 HER-2/neu基因的概述

HER-2/neu是表皮生長因子受體(epidermal growth factor receptor，EGFR)家族的成員之一，對細胞的生長、分化及凋亡起重要的調(diào)節(jié)作用。人類表皮生長因子及其受體分別于1962年和1978年被發(fā)現(xiàn)[2]，是一族具有酪氨酸激酶活性的高同源性蛋白質(zhì)。該家族成員包括HER-1、HER-2、HER-3和HER-4。HER-2/neu原癌基因表達的蛋白是跨膜受體糖蛋白2(human epidermal growth factor receptor-2，c-erbB-2)，相對分子質(zhì)量為185×103，包括胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內(nèi)區(qū)三部分。其中胞外區(qū)與人類EGFR有40%的相似性；跨膜區(qū)包含23個氨基酸，將整個蛋白分子定位在胞膜上；胞內(nèi)區(qū)為內(nèi)源性酪氨酸激酶活性的功能區(qū)，與EGFR蛋白的相應區(qū)域具有高度保守性。HER-2/neu參與抑制細胞的凋亡，維持或促進腫瘤細胞的生長；上調(diào)血管內(nèi)皮生長因子(vascular endothelial growth factor，VEGF)/血管通透性因子(vascular permeability factor，VPF)的表達，促進腫瘤新生血管的生成；增強腫瘤細胞的侵襲和轉(zhuǎn)移，破壞機體組織抗侵襲屏障的能力等。HER-2/neu基因在正常組織中不表達或微量表達，在惡性腫瘤組織中可大量表達。

2 HER-2/neu基因的檢測

HER-2/neu基因的檢測方法在蛋白水平上包括免疫組織化學法immunohistochemisty，IHC)、酶標免疫法(enzyme linked immunosorbent assay，ELISA)；DNA水平上包括熒光原位雜交(fluorescence in situ hybridisation，F(xiàn)ISH)、色素原位雜交(chromogenicin situ hybridization，CISH)和非熒光原位雜交、聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction，PCR)等。這些方法優(yōu)缺點各異，其中IHC和FISH是美國食品藥品管理局推薦的兩種檢測方法。

2.1IHC IHC針對的是HER-2/neu的特異性抗體，檢測細胞表面HER-2/neu蛋白表達情況的方法。其檢測結(jié)果易受多種外界因素的影響，準確率不如FISH檢測，但IHC具有操作簡便、價格低廉等優(yōu)勢，成為臨床上初篩HER-2/neu的首選方法。

2.2ELISA ELISA用于檢測血清中胞外區(qū)HER-2/neu的表達水平，是迄今為止可實時檢測HER-2/neu表達的方法，是唯一用于術(shù)后檢測HER-2/neu水平的方法[3]。

2.3FISH FISH是將標記熒光的探針與檢測的DNA結(jié)合，以堿基配對的原則形成雜交體，檢測HER-2/neu基因擴增情況的新技術(shù)。FISH法是被廣泛認定的用于檢測HER-2/neu過表達的金標準，較之其他檢測方法，它能給出明確、客觀的陰性或陽性結(jié)果。但因其操作流程復雜以及價格昂貴，故臨床上主要選用IHC對HER-2進行初步檢測，當結(jié)果為陽性時，再用FISH進一步確認。

2.4 CISH 作為一種核酸原位分子雜交技術(shù)方法，CISH也可用于常規(guī)甲醛固定的石蠟組織切片中HER-2/neu基因的檢測。關(guān)于CISH法、FISH法及IHC法比較的研究較多，Arnould等[4]分別使用這三種方法檢測79例乳腺癌患者中HER-2/neu基因的表達情況,并取得了比較一致的結(jié)果，其中CISH法和FISH法檢測一致率達到96%。由于CISH法對實驗條件及操作人員的要求較FISH低,如果準確性進一步提高，則有可能取代FISH法成為HER-2/neu基因檢測的常規(guī)方法。

3 HER-2/neu基因與結(jié)腸癌的關(guān)系

在大多數(shù)人類腫瘤中，HER-2/neu原癌基因的激活方式主要是基因擴增、RNA及蛋白質(zhì)的過度表達。Slamon等[5]首次發(fā)現(xiàn)HER-2/neu基因在乳腺癌中存在擴增現(xiàn)象，此后發(fā)現(xiàn)其在卵巢癌、胃癌、肺癌等多種惡性腫瘤中存在不同程度的基因擴增或蛋白過度表達。正常情況下HER-2/neu原癌基因處于非激活狀態(tài)，廣泛存在于細胞內(nèi)，參與細胞的增殖、分化、凋亡等正常生理過程的調(diào)節(jié)，當其受到生物或理化等因素作用時，可引起HER-2/neu結(jié)構(gòu)或表達水平的異常，導致癌基因活性過高，進而促進腫瘤的發(fā)生、發(fā)展。HER-2/neu基因過表達，導致絲氨酸/蘇氨酸激酶及核因子被激活，引起一系列的抗凋亡級聯(lián)反應，癌細胞對腫瘤壞死因子α產(chǎn)生抵抗，降低宿主對腫瘤細胞的免疫能力，導致腫瘤的發(fā)生。Liang等[6]以PCR片段長度來研究HER-2/neu基因多態(tài)性在密碼子655的分布及其與中國人結(jié)腸癌易患性的關(guān)系，發(fā)現(xiàn)異亮氨酸/纈氨酸+纈氨酸/纈氨酸基因型和纈氨酸等位基因均與結(jié)腸癌的發(fā)生有關(guān)。該研究認為，HER-2/neu基因在密碼子655上的多態(tài)性表達可能與中國人患結(jié)腸癌的風險有關(guān)。

4 HER-2/neu基因與結(jié)腸癌的治療

4.1HER-2/neu基因靶向藥物

4.1.1單克隆抗體 曲妥珠單抗可與HER-2受體結(jié)合，阻斷HER-2相關(guān)腫瘤的生長信號通路，同時也具有抗體依賴的細胞毒作用，能抑制HER-2過表達的腫瘤細胞的增殖。曲妥珠單抗是被美國食品藥品管理局批準上市的第1種重組DNA衍生人源化單克隆抗體，作為治療乳腺癌領(lǐng)域的第1個分子靶向藥物，可用于HER-2過表達的乳腺癌晚期的解救、輔助及新輔助治療，療效肯定。Bang等[7]報道了使用曲妥珠單抗一線治療無法手術(shù)的局部晚期、復發(fā)和(或)轉(zhuǎn)移性HER-2陽性的胃癌患者的國際多中心隨機對照Ⅲ期臨床研究，結(jié)果初步證實了曲妥珠單抗+順鉑+氟尿嘧啶類標準化療方案可使HER-2過表達的胃癌患者獲益?；谶@樣的證據(jù),美國食品藥品管理局和歐洲藥物機構(gòu)批準將曲妥珠單抗與化療聯(lián)合運用于未經(jīng)治療的HER-2陽性的進展期胃癌或胃食管結(jié)合部癌患者。Marx等[8]以IHC和FISH法分別對1439例和1851例結(jié)腸癌確診病例進行分析，其中HER-2過表達的為2.7%，HER-2擴增的為2.5%，提示結(jié)腸癌組織中HER-2擴增和過表達均較低，獲益人群較少，目前尚無針對HER-2/neu基因的用于結(jié)腸癌治療的靶向藥物。

帕妥珠單抗是另一種以HER-2為靶位的人源化單克隆抗體，與HER-2受體胞外結(jié)構(gòu)域Ⅱ區(qū)結(jié)合，抑制HER-1/HER-2二聚體的形成，繼而阻礙信號轉(zhuǎn)導。與曲妥珠單抗不同的是，帕妥珠單抗抑制配體誘導的二聚體化而不依賴HER-2表達水平，提示其可能的獲益人群范圍更廣，目前正在進行帕妥珠單克隆抗體治療HER-2低表達的晚期乳腺癌的Ⅱ期臨床研究。Pohl等[9]以帕妥珠單抗單獨或結(jié)合厄洛替尼或伊立替康在人體內(nèi)或體外測試其抗腫瘤效應，發(fā)現(xiàn)在體內(nèi)或體外的人類結(jié)腸癌中，帕妥珠單抗有一定抗腫瘤效應，特別是聯(lián)合厄洛替尼時效應加強。在體內(nèi)，合用帕妥珠單抗的療效并不優(yōu)于伊立替康單一治療。目前尚無帕妥珠單抗治療結(jié)腸癌的報道,但其在乳腺癌等實體腫瘤的試驗性應用中已顯示出一定療效和較好的安全性[10-12]。

4.1.2酪氨酸激酶抑制劑 拉帕替尼是口服的、可逆的小分子酪氨酸激酶抑制劑，其通過抑制細胞內(nèi)EGFR及HER-2的酪氨酸激酶結(jié)構(gòu)域的ATP結(jié)合位點，阻止酪氨酸磷酸化和下游信號通路，導致細胞增殖減少和凋亡增加[13-14]，阻止腫瘤細胞磷酸化及激活，抑制腫瘤細胞生長。拉帕替尼還可在體內(nèi)、外減少p95 HER2陽性表達的細胞的生長和信號通路磷酸化,后者雖無胞外結(jié)構(gòu)域,但具有酪氨酸激酶活性,其參與了曲妥珠單抗耐藥。拉帕替尼有望為靶向治療HER-2陽性的結(jié)腸癌提供新的臨床證據(jù)。

吉非替尼也是一種高效的EGFR酪氨酸激酶抑制劑，可與EGFR的ATP結(jié)合位點上的腺苷三磷酸競爭，阻斷酪氨酸激酶活性[15]，進而阻斷參與腫瘤生長與轉(zhuǎn)移的EGFR信號轉(zhuǎn)導通路，顯著降低HER-2的磷酸化，但不引起HER-2分子質(zhì)量的改變。Hirata等[16]報道了過表達HER-2的非小細胞肺癌細胞系對吉非替尼的敏感性，提出吉非替尼可能通過阻斷HER-2、HER-3與受抑制的EGFR二聚體結(jié)構(gòu)解離，減少HER-2/HER-3二聚體的形成而抑制腫瘤細胞生長。

4.2疫苗

4.2.1肽疫苗 Mukai等[17]研究合成鼠HER-2/neu肽，誘導鼠HER-2產(chǎn)生特異性細胞毒性T淋巴細胞(cytotoxic lymphocyte，CTL)和抗體，從而抑制腫瘤細胞的生長，降低了肺轉(zhuǎn)移的概率。在Ⅰ期臨床試驗研究中，將p369～377(來源于HER-2的多肽)免疫接種于結(jié)腸癌患者，在患者外周血中獲得了多肽特異性CTL。具有免疫原性的HER-2肽可被CTL和輔助T細胞識別，當再次刺激后，該CTL可識別并溶解帶有肽的靶細胞[18]，目前該研究已進入臨床應用。

4.2.2DNA疫苗 DNA疫苗又稱核酸疫苗或基因疫苗，其能誘導長期而持續(xù)的免疫反應。DNA疫苗與細胞因子白細胞介素18或粒-巨噬細胞集落刺激因子合用，能提高抑瘤效果。

5 HER-2/neu基因與結(jié)腸癌的預后

6 結(jié) 語

隨著時代的發(fā)展，腫瘤靶向治療的理念已經(jīng)得到學術(shù)界和患者的廣泛認可，盡管目前研究報道的靶向給藥載體較多，但真正用于臨床且取得肯定療效的并不多。結(jié)腸癌的發(fā)生、發(fā)展是一個多因素、多階段的復雜過程,HER-2/neu基因在受體活化和腫瘤細胞信號轉(zhuǎn)導中發(fā)揮重要作用，參與包括結(jié)腸癌在內(nèi)的多種腫瘤的發(fā)生、發(fā)展，單一HER-2/neu靶向藥物對結(jié)腸癌的療效尚不明確。雖然HER-2/neu靶向藥物為結(jié)腸癌患者帶來了新希望,但很多環(huán)節(jié)仍有待于進一步的臨床研究證實。

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