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        太子參超低溫脫毒及規(guī)?;M培育苗技術(shù)

        2014-03-25 07:14:58姚厚軍張九玲韓邦興陳乃富
        生物學(xué)雜志 2014年3期
        關(guān)鍵詞:幼芽超低溫叢生

        戴 軍, 姚厚軍, 張九玲, 韓邦興, 陳乃富

        (1.皖西學(xué)院 生物與制藥工程學(xué)院 中藥研究與開(kāi)發(fā)工程技術(shù)研究中心,安徽 六安 237012; 2.植物細(xì)胞工程安徽省工程技術(shù)研究中心,安徽 六安 237012 )

        中藥太子參(PseuclostellariaheterophyllaMiq. Pax)來(lái)源于石竹科植物太子參的塊根,具補(bǔ)氣健脾、生津潤(rùn)肺、養(yǎng)陰益血等功效,主治脾虛體倦、病后虛弱、氣陰不足、自汗口渴、肺燥干咳等癥[1]。太子參主產(chǎn)安徽、福建、貴州等地。太子參由于長(zhǎng)期留種栽培,積累了大量病毒,嚴(yán)重影響太子參產(chǎn)量和質(zhì)量[2, 3]。太子參病毒病無(wú)有效防治藥物,獲得脫病毒太子參植株,進(jìn)行規(guī)?;摱咎訁⒂缡欠乐翁訁⒉《静∽钣行У耐緩絒4, 5]。目前太子參脫病毒及組織培養(yǎng)有較多研究報(bào)道,但多數(shù)是在實(shí)驗(yàn)室條件下研究再生體系[6, 7],超低溫脫毒在植物上運(yùn)用的研究報(bào)道較多[8-17],但少見(jiàn)超低溫脫毒和規(guī)模化育苗技術(shù)方面的研究,尤其是太子參超低溫脫毒和規(guī)?;缂夹g(shù)方面還未見(jiàn)報(bào)道。本文選用太子參幼芽,通過(guò)超低溫脫毒,采用芽增殖誘導(dǎo)培養(yǎng),叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng),壯苗生根培養(yǎng),形成太子參超低溫脫毒及規(guī)模化育苗技術(shù)體系,實(shí)現(xiàn)太子參超低溫脫毒及規(guī)模化育苗。

        1 材料與方法

        1.1 實(shí)驗(yàn)材料

        外植體采自安徽省六安市霍山縣太平畈鄉(xiāng)王家店村,經(jīng)皖西學(xué)院陳乃富教授鑒定為石竹科植物太子參PseuclostellariaheterophyllaMiq. Pax。外植體選用太子參幼芽。

        1.2 實(shí)驗(yàn)方法

        1.2.1 超低溫脫毒

        參照香蕉莖尖超低溫脫毒方法[18]并經(jīng)行改良:選取太子參幼芽,將幼芽外層幼葉剝?nèi)ィ〗?jīng)過(guò)表面消毒后的1~1.5 mm幼芽接種到附加140 g/L蔗糖的MS培養(yǎng)基上預(yù)培養(yǎng)2 d,然后轉(zhuǎn)接于0℃附加140 g/L蔗糖的MS液體培養(yǎng)基處理40 min,將莖尖置于冷凍管迅速投入液氮,分別保存0 h、0.5 h、1.0 h、1.5 h、2.0 h、2.5 h和3.0 h。從液氮中取出冷凍管,置于40℃水浴解凍1.5 min,備用。

        1.2.2 芽增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)

        經(jīng)過(guò)預(yù)處理的幼芽,轉(zhuǎn)入芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中,暗培養(yǎng)7 d后轉(zhuǎn)移到3000 lx的光照強(qiáng)度下培養(yǎng)。40 d后將成活的莖尖轉(zhuǎn)移到不同的培養(yǎng)基上進(jìn)行再培養(yǎng)。

        1.2.3 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

        將脫毒后太子參莖尖培養(yǎng)40 d后,轉(zhuǎn)接到增殖培養(yǎng)基上誘導(dǎo)叢生芽,培養(yǎng)20 d叢生芽長(zhǎng)至2~3 cm時(shí)即可轉(zhuǎn)接到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根誘導(dǎo);叢生芽亦可以切成段轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)。

        1.2.4 生根壯苗培養(yǎng)

        芽條長(zhǎng)到2~3 cm時(shí),切下高于2 cm以上的叢生芽,轉(zhuǎn)接生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根壯苗誘導(dǎo),其余的轉(zhuǎn)接至增殖培養(yǎng)基上進(jìn)行叢生芽誘導(dǎo)。

        1.2.5 培養(yǎng)基選擇和培養(yǎng)條件

        培養(yǎng)基:根據(jù)不同需要以改良的MS培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基,附加3.0%蔗糖、0.45%瓊脂和不同種類、不同濃度的激素,pH調(diào)至5.80。

        培養(yǎng)條件:溫度(25±2)℃ ,光照10 h/d,光照強(qiáng)度3000 lx。

        1.2.6 脫毒率檢測(cè)

        將組織培養(yǎng)獲得的植株用指示植物法檢測(cè)[19]脫毒率。

        2 結(jié)果與分析

        2.1 超低溫脫毒

        由表1可知:對(duì)莖尖超低溫處理有去除病毒的作用,但會(huì)大大降低其成活率;超低溫處理時(shí)間長(zhǎng)短對(duì)太子參芽的成活率影響不大,但對(duì)脫毒率有一定影響,處理1 h以上脫毒率較高,脫毒率90%以上。從實(shí)際生產(chǎn)成本考慮,選擇超低溫處理1 h(表1)。

        表1 超低溫處理對(duì)成活率及脫毒率影響

        注:1、超低溫處理后幼芽在芽誘導(dǎo)培養(yǎng)上培養(yǎng)20 d,能分化的幼芽判為成活,反之判為死亡;2、培養(yǎng)90 d后用指示植物法檢測(cè)脫毒率。

        2.2 芽增殖誘導(dǎo)培養(yǎng)

        將脫毒太子參幼芽經(jīng)過(guò)暗培養(yǎng)7 d后的外植體轉(zhuǎn)移到3000 lx光照強(qiáng)度下培養(yǎng)40 d后,觀察接種于不同誘導(dǎo)培養(yǎng)基上的不定芽數(shù)量和狀態(tài),結(jié)果如表2。

        表2 附加激素種類與濃度的培養(yǎng)基對(duì)不定芽誘導(dǎo)的影響

        由表2可見(jiàn):附加激素6-BA、IAA的培養(yǎng)基對(duì)不定芽誘導(dǎo)有促進(jìn)作用,當(dāng)IAA濃度為0.5 mg/L時(shí),隨著6-BA的濃度提高,對(duì)芽的誘導(dǎo)作用也增強(qiáng),當(dāng)增加到2.5 mg/L對(duì)芽的誘導(dǎo)作用最強(qiáng),再增加則對(duì)芽的誘導(dǎo)作用有抑制作用。綜合生長(zhǎng)情況,附加2.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA的培養(yǎng)基最適宜誘導(dǎo)不定芽。

        表3 含不同激素的培養(yǎng)基對(duì)叢生芽的影響

        2.3 叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)

        2.3.1 激素種類對(duì)叢生芽的影響

        初代培養(yǎng)得到不定芽后需要進(jìn)一步繼代增殖才能得到更多的小苗。在初代培養(yǎng)的基礎(chǔ)上,進(jìn)行增殖培養(yǎng)基的調(diào)整。將初代培養(yǎng)得到的不定芽切割成單苗接種于繼代增殖培養(yǎng)基中。

        由表3結(jié)果可看出:附加激素1.0 mg/L 6-BA+ 0.1 mg/L NAA和1.0 mg/L KT+0.5 mg/L NAA這兩種培養(yǎng)基出芽多,生長(zhǎng)快,顏色綠,苗生長(zhǎng)粗壯,葉片寬大,結(jié)合生長(zhǎng)狀態(tài)附加1.0 mg/L KT+0.5 mg/L NAA的培養(yǎng)基對(duì)叢生芽的誘導(dǎo)效果最佳。激素KT對(duì)芽的誘導(dǎo)影響強(qiáng)于6-BA。

        2.3.2 KT濃度對(duì)叢生芽的影響

        在篩選出最適激素基礎(chǔ)上,進(jìn)一步研究了KT濃度對(duì)叢生芽的影響,結(jié)果見(jiàn)表4。隨著細(xì)胞分裂素KT濃度的升高,叢生芽的增殖倍數(shù)不斷增加,苗生長(zhǎng)的越來(lái)越快,長(zhǎng)勢(shì)越來(lái)越好。當(dāng)KT濃度達(dá)到1.2 mg/L時(shí),叢生芽增殖倍數(shù)最高,出芽快,生長(zhǎng)快,苗顏色綠而且粗壯,長(zhǎng)勢(shì)最好。而后隨著KT濃度的升高,增殖倍數(shù)不斷下降,越來(lái)越抑制苗的生長(zhǎng)。因此,KT濃度為1.2 mg/L左右時(shí)是對(duì)叢生芽誘導(dǎo)培養(yǎng)的最宜濃度。

        表4 不同濃度KT對(duì)叢生芽的影響

        2.4 壯苗生根培養(yǎng)

        將增殖后的太子參苗分別轉(zhuǎn)接于壯苗生根培養(yǎng)基中培養(yǎng),使其茁壯生長(zhǎng)及生根,為煉苗做好準(zhǔn)備。

        2.4.1 不同激素種類及濃度對(duì)壯苗生根培養(yǎng)的影響

        表5 不同激素種類對(duì)壯苗生根培養(yǎng)的影響

        表5結(jié)果表明:激素NAA和DA-6均能誘導(dǎo)根的產(chǎn)生,DA-6更適宜壯苗生根培養(yǎng)。DA-6培養(yǎng)出來(lái)的苗粗壯,顏色綠,產(chǎn)生的根系也多并且粗壯,部分產(chǎn)生塊根,而NAA培養(yǎng)出來(lái)的苗纖細(xì),顏色泛黃,雖然可以誘導(dǎo)根的產(chǎn)生,但是根比較纖細(xì)。

        2.4.2 不同濃度的DA-6對(duì)壯苗生根培養(yǎng)的影響

        表6 不同濃度的DA-6對(duì)壯苗生根培養(yǎng)的影響

        由表6可以看出:隨著DA-6的濃度增加,對(duì)根系誘導(dǎo)作用增強(qiáng),當(dāng)濃度為1.5 mg/L時(shí)作用最強(qiáng),濃度超過(guò)1.5 mg/L時(shí)對(duì)根的誘導(dǎo)有抑制作用。當(dāng)DA-6濃度為1.5 mg/L,KT濃度為0.2 mg/L時(shí)是最適宜壯苗生根的培養(yǎng)基,根系發(fā)達(dá)而且產(chǎn)生塊根,更佳利于太子參的生長(zhǎng)。

        2.4.3 不同有機(jī)添加物對(duì)壯苗生根培養(yǎng)的影響

        表7 不同有機(jī)添加物對(duì)壯苗培養(yǎng)的影響

        由表7可以看出添加有機(jī)物對(duì)太子參莖葉和根系生長(zhǎng)有促進(jìn)作用,促進(jìn)塊根的形成和生長(zhǎng),有機(jī)添加物以蛋白粉最好。

        3 討論

        通過(guò)超低溫對(duì)太子參莖尖進(jìn)行處理,采用以芽誘導(dǎo)叢生芽方式進(jìn)行增殖,與莖尖分生組織法和熱處理結(jié)合莖尖分生組織法相比,本方法操作簡(jiǎn)便、成本低,適宜于太子參規(guī)?;摱尽Mㄟ^(guò)脫毒太子參組培快繁技術(shù)研究,優(yōu)化出適合脫毒太子參誘導(dǎo)芽的培養(yǎng)基為改良MS+2.5 mg/L 6-BA+0.5 mg/L IAA;繼代增殖最適宜培養(yǎng)基為改良MS+1.2 mg/L KT+0.5 mg/L NAA;最高增殖倍數(shù)可達(dá)12.5倍;壯苗生根最適宜培養(yǎng)基為改良MS+0.2 mg/L KT+ 1.5 mg/L DA-6+10%蛋白粉,壯苗生根培養(yǎng)時(shí)產(chǎn)生了大量根系及塊根。該技術(shù)成果成功轉(zhuǎn)化,實(shí)現(xiàn)了脫毒太子參規(guī)模化育苗。

        參考文獻(xiàn):

        [1]肖培根,李大鵬,楊世林.新編中藥志(第1卷)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社,2002. 191-193.

        [2]劉清琪,陳繩亮,陳隸華,等.太子參花葉病病原及其防治的初步研究[J].中藥材科技, 1983(2):11.

        [3]高 瑋,張敬水,張建紅,等.太子參花葉病毒的檢測(cè)與防治[J].中國(guó)病毒學(xué),1993,8(4): 390-393.

        [4]宋榮浩,濮祖芹.太子參病毒病的防治途徑[J].上海農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào),1994,10(4):59-62.

        [5]溫學(xué)森,霍德蘭,趙華英.太子參常見(jiàn)病害及防治[J].中藥材,2003,26(4):243-245.

        [6]林叢發(fā),鐘愛(ài)清,魏澤平,等.太子參組培快繁技術(shù)研究初報(bào)[J].福建農(nóng)業(yè)科技,2002(6):22.

        [7]吳朝峰,馬雪梅,林彥銓,等.太子參莖尖脫毒培養(yǎng)及增產(chǎn)效果[J]. 福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報(bào),2006,35(2):130-133.

        [8]Drison M, de Boucaud M T, Pierronnet A, et al.Effect of cryopreservation on the sanitary state of acv.Prunus rootstock experimentally contaminated with plum pox potyvirus[J]. Plant Science, 1997, 123:189-196.

        [9]Helliot B, Panis B, Poumay Y, et al.Cryopreservation for the elimina-tion of cucumber mosaic and banana streak viruses from banana(Musaspp.)[J]. Plant Cell Reports, 2002, 20:1117-1122.

        [10]Wang Q C, Munir M, Li P, et al.Elimination of grapevine virus A(GVA)by cryopreservation of in vitro-grown shoot tips ofVitisviniferaL[J]. Plant Science, 2003, 165:321-327.

        [11]Wang Q C, Liu Y, Xie Y H, et al.Cryotherapy of potato shoot tips for efficient elimination of potato leafroll virus(PLRV)and potato virus Y(PVY)[J]. Potato Research, 2006, 49:119-129.

        [12]Wang Q C, Valkonen J P T.Efficient elimination of sweetpotato littleleaf phytoplasma from sweetpotato by cryotherapy of shoot tips[J].Plant Pathology, 2008, 57:338-347.

        [13]Wang Q C, Valkonen J P T. Elimination of two viruses which interact synergistically from sweetpotato by shoot tip culture and cryotherapy[J]. Journal of Virological Methods, 2008, 154:135-145.

        [14]蔡斌華,張計(jì)育,渠慎春,等.通過(guò)玻璃化超低溫處理脫除草莓輕型黃邊病毒(SMYEV)研究[J].果樹(shù)學(xué)報(bào),2008,25(6):872-876.

        [15]Wang Q C, Wilmer J C, Minna-Liisa R, et al. Combined thermotherapyand cryotherapy for efficient virus eradication:relation of virus distribution,subcellular changes,cell survival and viral RNA degradation in shoot tips[J]. Molecular Plant Pathology, 2008, 9(2):237-250.

        [16]Wang Q C, Jari P T V. Cryotherapy of shoot tips:novel pathogen eradi-cation method[J]. Trends in Plant Science, 2009, 14(3):119-122.

        [17]曲 先.低溫療法脫除馬鈴薯病毒及遺傳變異分析[D].鄭州:河南大學(xué),2009.

        [18]吳黎明,曾繼吾,彭抒昂,等.香蕉莖尖的玻璃化法超低溫保存及其植株再生[J].園藝學(xué)報(bào),2006,33(3):501-506.

        [19]宋榮浩.太子參病毒病的病原鑒定及防治途徑的研究[D].南京:南京農(nóng)業(yè)大學(xué),1987.

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