吳繼龍，張立華，陳歡，楊麗娜，代英輝，王東，劉東春，b※

(1．沈陽藥科大學a．中藥學院；b．中韓分子生藥學研究室，沈陽110016；2．大連華立金港藥業(yè)有限公司，遼寧大連116100)

中藥莪術是姜科植物廣西莪術(CurcumakwangsiensisS.G.Lee et C.F.Liang)、蓬莪術(C.phaeocaulisVal.)或溫郁金(C.wenyujinY.H.Chen et C.Ling)的干燥根莖。中醫(yī)理論認為，莪術性溫，味辛、苦。有行氣破血、消積止疼之功效。莪術油為莪術中提取的揮發(fā)油，含有多種倍半萜類化合物，其中，主要有欖香烯、莪術醇、莪術酮、莪術二酮等，具有抗腫瘤、抗菌、抗病毒等作用[1]。莪術油容易氧化和揮散，莪術油微囊化后可防止其揮散并降低氧化速度，提高穩(wěn)定性。將新型的包衣材料聚乙烯醇·丙烯酸·甲基丙烯酸甲酯共聚物(Povacoat)加入麥芽糊精中作為囊材，采用噴霧干燥法研究制備了一種莪術油微囊，可以提高藥物的包封率和微囊的穩(wěn)定性。為了評價莪術油/(麥芽糊精-Povacoat)微囊的質量，本試驗研究開發(fā)了一種簡單方便的莪術油微囊載藥量及包封率的測定方法。

1 儀器與試劑

ZNCL-BS智能數(shù)顯磁力加熱板(鞏義市予華儀器有限責任公司)；T18 basic分散機(IKA公司)；L-117實驗室微型噴霧干燥機(北京來亨科學儀器公司)；電子分析天平ESJ182-4(沈陽龍騰電子有限公司)；CT14RD冷凍離心機(上海天美科學儀器有限公司)；紫外-可見分光光度計UV-1700(日本島津公司)；Olympus Bx51(日本奧林巴斯有限公司)。

莪術油(大連華立金港藥業(yè)有限公司)；麥芽糊精(上海運宏化工制劑輔料技術有限公司)；Povacoat(F型，日本大同化工業(yè)株式會社)；香茅醛(AR級，天津市博迪化工有限公司)；其它試劑均為分析純。

2 方法與結果

2.1 莪術油微囊的制備

麥芽糊精與水溶性新型輔料Povacoat F型作為水相囊材，莪術油及少量磷脂為油相，高速分散混合均勻后經(jīng)噴霧干燥，即得微囊。空白微囊的制備過程中不加入莪術油，其余方法同上。

2.2 莪術油微囊載藥量的測定

2.2.1顯色機制及分光光度法測定波長的選擇莪術油中的倍半萜類化合物可以與香茅醛硫酸試液產(chǎn)生多種鮮艷的顏色反應，靈敏度高，檢測限為12ng，此法常用于莪術油的定性及定量檢查[2]。

測定波長的選擇：精密移取一定濃度莪術油乙醇溶液1.0mL，置于10mL容量瓶中，加入新制備的0.2%香茅醛硫酸溶液(稱取香茅醛0.2g于100mL容量瓶中，加1.0mL無水乙醇使其溶解，加入冷硫酸溶液(1+2)至刻度，搖勻即得)定容至刻度。將上述溶液搖勻，室溫下避光保存30min后于400～800nm波長范圍內掃描測定吸光度，結果顯示，莪術油乙醇溶液經(jīng)香茅醛硫酸顯色后在508nm處有一最大吸收峰，而空白微囊經(jīng)超聲振蕩破囊后的提取液經(jīng)香茅醛硫酸顯色后在508nm處無干擾，見圖1。

a.莪術油；b.空白微囊 a.Zedoary turmeric oil;b.Microcapsule without drug

2.2.2顯色穩(wěn)定性精密配制一定濃度的莪術油乙醇溶液(18.7μg/mL)，精密移取1.0mL置于10mL容量瓶中，按“2.2.1”項下方法顯色后，于508nm處每隔30min測定吸光度值。結果顯示，在150min內吸光度值穩(wěn)定，結果見表1。

表1顯色穩(wěn)定性

Table 1 Results of color stability test (n=6)

2.2.3標準曲線的繪制精密稱取49.8mg莪術油置于25mL容量瓶中，以無水乙醇定容至刻度，得莪術油儲備液。精密移取上述儲備液5.0mL，置于50mL容量瓶中，用無水乙醇定容至刻度，即得工作液(199.2μg/mL)。精密移取工作液10μL、50μL、100μL、200μL、300μL、400μL、500μL分別置于10mL容量瓶中，另取1.0mL無水乙醇于10mL容量瓶中作為空白對照液。將上述溶液以0.2%香茅醛硫酸溶液定容至刻度，搖勻，室溫下避光保存30min，于508nm處測定吸光度[3，4]。以濃度C為橫軸、吸光度A為縱軸作標準曲線，采用最小二乘法計算得標準曲線回歸方程為A=0.094 7C-0.001 2，r=0.999 3，線性范圍為0.199 2μg/mL～9.960 0μg/mL。

2.2.4精密度試驗精密稱取30mg微囊，置于50mL帶蓋離心管中，精密加入蒸餾水2.0mL，旋緊密封蓋后超聲振蕩20min，精密加入18.0mL無水乙醇，精密稱定離心管重量，渦旋混勻，超聲提取15min后精密稱定離心管重量，補加乙醇至原來重量，然后在4 000r/min下離心6min，精密移取上清液各1.0mL分別置于6個10mL容量瓶中，按“2.2.1”項下方法顯色后，于508nm處測定吸光度。RSD為0.5%，結果顯示方法的精密度良好。

2.2.5載藥量測定回收率試驗精密移取莪術油標準溶液適量，加于約30mg空白微囊中，其余步驟按“2.2.4”項下的方法操作，于508nm處測定吸光度，記錄吸光度值，按公式：回收率=實測量/加入量×100%，計算回收率，結果見表2。

表2載藥量測定加樣回收率實驗結果(n=6)

Table2Resultsofrecoverytestofdrugloadingcapacity

加入量(μg)Added實測量(μg)Measured回收率(%)Recovery平均回收(%)AveragerecoveryRSD(%)15301547101.11530152199.41530150198.199.61.51530151599.015301557101.81530150398.3

2.2.6莪術油微囊載藥量的測定結果精密稱取30mg微囊，其余步驟按“2.2.4”項下的方法操作，于508nm處測定吸光度，記錄吸光度值[5～7]，并按公式：載藥量=微囊中揮發(fā)油的總質量/微囊的質量，計算莪術油載藥量。結果見表3。

表3載藥量測定結果

Table 3 Results of drug loading (n=3)

2.3 莪術油微囊包封率的測定

2.3.1洗脫液的選擇分別選用無水乙醇、乙醚、石油醚作為洗脫液，對同一批微囊進行玻璃小柱洗脫。精密稱取100mg微囊，填裝到玻璃小柱中，分別用上述3種洗脫液洗脫，收集洗脫液50mL。分別吸取上清液1.0mL置于10mL容量瓶中，以香茅醛硫酸溶液定容。結果顯示，石油醚洗脫液不能與顯色劑互溶，有分層現(xiàn)象；乙醚作為洗脫液極易揮發(fā)，容易造成較大誤差；無水乙醇作為洗脫液有較好的流速，且顯微觀察結果表明微囊浸泡于無水乙醇30min后未發(fā)現(xiàn)破囊(圖2)，因此選擇無水乙醇作為洗脫液。

2.3.2洗脫液用量的確定精密稱取100mg莪術油微囊置于上述玻璃小柱中，用無水乙醇洗脫，以5.0mL作為1個流份，分別收集。每組流份各移取1.0mL，分別置于不同的10mL容量瓶中，按“2.2.1”項下方法顯色后，記錄508nm處吸光度值，并計算累積莪術油未包封藥量。結果顯示(圖3)，洗脫液用量達到40mL時基本可將微囊壁外殘留藥物洗脫完全，最終確定洗脫液用量為50mL。

圖2 莪術油微囊浸泡于無水乙醇30min

圖3 洗脫體積的確定

2.3.3包封率測定回收率試驗精密稱取100mg空白微囊置于自制的玻璃小柱，精密加入莪術油標準溶液，以無水乙醇洗脫，收集洗脫液50mL。精密移取洗脫液1.0mL置于10mL容量瓶中，按“2.2.1”項下方法顯色后，于508nm處測定吸光度，

記錄吸光度值，按公式：回收率=實測量/加入量×100%，計算回收率，結果見表4。

2.3.4包封率的測定結果精密稱取100mg微囊置于自制的玻璃小柱，其余步驟按“2.3.3”項下方法操作，于508nm處測定吸光度，并計算未包封的莪術

表4包封率測定加樣回收率實驗結果(n=6)

Table4Resultsofrecoverytestofencapsulationefficiency

加入量(μg)Added實測量(μg)Measured回收率(%)Recovery平均回收(%)AveragerecoveryRSD(%)516.2521.8101.1516.2497.496.4516.2512.299.299.12.9516.2499.696.8516.2502.197.3516.2534.9103.6

油量，每批樣品重復測定3次。包封率=(載藥量-未包封藥量)/載藥量×100%[6]。3批莪術油微囊未包封藥量及包封率測定結果見表5。

表5包封率測定結果(n=3)

Table 5 Encapsulation efficiency of microcapsules

3 討論

準確測定莪術油微囊包封率的關鍵在于能否準確對微囊表面未包封莪術油進行定量。有文獻報道類似的其它含揮發(fā)油微囊包封率測定方法，有采用洗滌-離心法[8，9]及烘干稱重法[10]清洗微囊表面的揮發(fā)油后定量。但通過我們研究發(fā)現(xiàn)振蕩及離心易造成囊壁破損；烘干時微囊內部揮發(fā)油容易散失，造成結果不準確。采用柱洗脫法可避免微囊受到較強外力而破裂。莪術油易溶于無水乙醇，本研究的微囊囊材中麥芽糊精及Povacoat均不溶于無水乙醇，處方中磷脂可以溶于無水乙醇，有造成微囊在乙醇中破裂、泄露的可能，但研究顯示，此微囊在無水乙醇中30min內無破囊現(xiàn)象發(fā)生，原因可能為處方中磷脂含量不高，且基本上和莪術油一起被包裹在微囊內，并沒有大量存在于囊膜中。同時，包封率測定實驗中較高的回收率也表明，短時間內此微囊的藥物透過性也沒有發(fā)生改變。所以本研究選用無水乙醇洗脫微囊表面莪術油。

4 結論

本研究建立的莪術油/(麥芽糊精-Povacoat)微囊載藥量及包封率測定方法簡便易行、結果準確可靠，為以麥芽糊精-Povacoat作為復合囊材的莪術油微囊質量控制奠定了基礎。

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