李俊華

河北省廊坊市婦幼保健中心婦產(chǎn)科，河北廊坊065000

5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性研究

李俊華

河北省廊坊市婦幼保健中心婦產(chǎn)科，河北廊坊065000

目的探究與分析5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性。方法選取2013年6月～2014年6月河北省廊坊市婦幼保健中心收治的60例妊娠期高血壓疾病患者作為試驗(yàn)組，另選擇同期無(wú)妊娠期高血壓疾病的孕婦60例作對(duì)照組。采用熒光定量PCR技術(shù)對(duì)兩組患者M(jìn)THFR C677T及A1298C基因進(jìn)行檢測(cè)。結(jié)果試驗(yàn)組MTHFR C677T C/T基因型頻率為38.33%，對(duì)照組MTHFR C677T C/T基因型頻率為21.67%，試驗(yàn)組明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.03，P＜0.05）。試驗(yàn)組突變T等位基因頻率為24%，對(duì)照組突變T等位基因頻率為16%，試驗(yàn)組顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.26，P＜0.05）。試驗(yàn)組MTHFR A1298C A/A基因型頻率為55.00%，對(duì)照組MTHFR A1298C A/A基因型頻率為60.00%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.71，P＞0.05）。試驗(yàn)組MTHFR A1298C A/C基因型頻率為33.33%，對(duì)照組MTHFR A1298C A/C基因型頻率為26.67%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.66，P＞0.05）。試驗(yàn)組MTHFR A1298C C/C基因型頻率為11.67%，對(duì)照組MTHFR A1298C C/C基因型頻率為13.33%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.26，P＞0.05）。試驗(yàn)組突變A等位基因頻率為76.1%，對(duì)照組突變A等位基因?yàn)?9.0%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.09，P＞0.05）。試驗(yàn)組突變C等位基因頻率為23.9%，對(duì)照組突變C等位基因頻率為21.0%，組間比較差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.57，P＞0.05）。結(jié)論MTHFR基因A1298C多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病的發(fā)病無(wú)明顯相關(guān)性，而MTHFR基因C677T多態(tài)性可作為誘發(fā)妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)因素，同時(shí)可將其作為評(píng)價(jià)妊娠期高血壓疾病預(yù)后情況的一項(xiàng)指標(biāo)，應(yīng)引起臨床工作者的重視。

妊娠期高血壓；亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態(tài)性

妊娠期高血壓疾病作為婦產(chǎn)科臨床上一類發(fā)病率較高的疾病，嚴(yán)重威脅了母嬰的生命健康，但其病因尚未明確，隨著分子生物學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，妊娠期高血壓疾病病因的研究重點(diǎn)開(kāi)始集中于與該病發(fā)病相關(guān)的基因上[1]。大量研究表明，高同型半胱胺酸血癥與妊娠期高血壓疾病的發(fā)生具有相關(guān)性，而5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）參與了同型半胱氨酸的代謝，其中編碼基因若出現(xiàn)突變，則會(huì)改變相應(yīng)酶的活性，造成血中同型半胱氨酸水平受到影響[2]。因此，本研究通過(guò)分析MTHFR基因的多態(tài)性，研究其與妊娠期高血壓疾病的相關(guān)性，現(xiàn)將研究結(jié)果總結(jié)報(bào)道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

將河北省廊坊市婦幼保健中心（以下簡(jiǎn)稱“我院”）自2013年6月～2014年6月收治的60例妊娠期高血壓疾病患者作為試驗(yàn)組，所有患者均在我院確診，診斷標(biāo)準(zhǔn)參考《婦產(chǎn)科學(xué)》第8版，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)通過(guò)，并簽署知情同意書(shū)。患者年齡24～32歲，平均（28.6±1.5）歲，平均孕齡為（37.4±1.6）周，其中妊娠期高血壓34例，子癇前期26例。另選同時(shí)期我院無(wú)妊娠期高血壓疾病的孕婦60例為對(duì)照組，年齡25～34歲，平均（27.9±2.4）歲，平均孕齡為（36.8± 1.8）周。所有孕婦均無(wú)遺傳性疾病、血液性疾病或生殖器畸形，兩組人員年齡及孕齡等一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

在兩組孕婦入院之后均進(jìn)行處理前抽取空腹12 h的外周靜脈血10 mL，分別置于兩個(gè)試管中，并標(biāo)明1號(hào)試管及2號(hào)試管，其中1號(hào)試管采用乙二胺四乙酸二鈉抗凝后，采用過(guò)柱法對(duì)基因組DNA進(jìn)行提取，2號(hào)食管則通過(guò)EDTA抗凝，進(jìn)行充分搖勻后，送至離心機(jī)，3000 r/min離心10 min，將上層清液去除后，置于-80℃的超低溫冰箱中保存，分批待測(cè)。對(duì)DNA進(jìn)行提取時(shí)采用Set與Column set兩部分試劑盒進(jìn)行，均購(gòu)自大連寶生物工程有限公司。嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明說(shuō)進(jìn)行操作，以得到純化的高純度基因組DNA。采用熒光定量PCR技術(shù)，檢測(cè)MTHFR C677T、 A1298C的基因多態(tài)性。相關(guān)儀器、試劑均購(gòu)自美國(guó)ABI公司。每個(gè)反應(yīng)體系10 μL：1 μL DNA模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探針，3.5 μL去離子水。反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，92℃變性15 s，60℃延伸1 min，20個(gè)循環(huán)；89℃變性15 s，60℃延伸90 s，30個(gè)循環(huán)。反應(yīng)完成后，在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點(diǎn)熒光，利用分析軟件確定各個(gè)樣本的基因分型結(jié)果。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組MTHFR基因C677T多態(tài)性比較

試驗(yàn)組MTHFR C677T C/C、T/T基因型頻率與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.58、2.97，均P＞0.05）。試驗(yàn)組MTHFR C677T C/T基因型頻率明顯高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.03，P＜0.05）。試驗(yàn)組突變C等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.43，P＞0.05）。試驗(yàn)組突變T等位基因頻率顯著高于對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=4.26，P＜0.05）。見(jiàn)表1。

表1 兩組MTHFR基因C677T多態(tài)性對(duì)比

2.2 兩組MTHFR基因A1298C多態(tài)性比較

試驗(yàn)組MTHFR A1298C A/A、A/C、C/C基因型頻率與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.71、2.66、2.26，均P＞0.05）。試驗(yàn)組突變A、C等位基因頻率與對(duì)照組比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=2.09、2.57，均P＞0.05）。A1298C雜合子聯(lián)合C667T雜合子基因型發(fā)生妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)性無(wú)明顯差異，提示A1298基因多態(tài)性與妊娠期高血壓疾病發(fā)生無(wú)密切關(guān)系。見(jiàn)表2。

表2 兩組MTHFR基因A1298C多態(tài)性比較

3 討論

妊娠期高血壓作為孕婦妊娠期一類特有的疾病，現(xiàn)在臨床上與產(chǎn)后出血、感染、妊娠合并心臟病一同構(gòu)成造成孕產(chǎn)婦死亡的四大原因，為一類多器官損傷性疾病，發(fā)病率高達(dá)7%～10%，極易導(dǎo)致產(chǎn)婦及圍生兒的死亡。而對(duì)其病因及發(fā)病機(jī)制的研究一直作為產(chǎn)科相關(guān)專家及學(xué)者所研究的重點(diǎn)[3]。近年來(lái)，隨著醫(yī)療科學(xué)技術(shù)的不斷進(jìn)步，已有大量研究證實(shí)，MTHF基因多態(tài)性與先兆子癇的發(fā)病具有密切的關(guān)系。而據(jù)臨床研究資料顯示，妊娠期高血壓疾病發(fā)病過(guò)程中常伴隨著不同程度上的同型半胱氨酸水平升高，而同型半胱氨酸作為半胱氨酸及蛋氨酸代謝過(guò)程中的中間產(chǎn)物，其本身與蛋白質(zhì)的合成并無(wú)明顯關(guān)系[4]。大量研究表明，同型半胱氨酸不僅可通過(guò)誘導(dǎo)細(xì)胞快速進(jìn)入細(xì)胞分裂期達(dá)到促進(jìn)細(xì)胞增殖的目的，同時(shí)還可通過(guò)加速低密度脂蛋白的氧化過(guò)程，以促進(jìn)并激活血小板的黏附和聚集，從而對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞造成損傷，使其機(jī)體抵抗妊娠期高血壓等疾病的能力明顯下降[5-7]。同型半胱氨酸再甲基化途徑中一類不可或缺的酶即為MTHFR基因所編碼的產(chǎn)物。在同型半胱氨酸再甲基化的過(guò)程中，其與甲基供體合成所需的關(guān)鍵物質(zhì)為5-甲基四氫葉酸，該物質(zhì)能幫助二者進(jìn)一步合成四氫葉酸與蛋氨酸。而5，10-甲基四氫葉酸作為5-甲基四氫葉酸的還原前物質(zhì)，完成此過(guò)程則需要MTHFR的幫助，即同型半胱氨酸甲基化成為蛋氨酸所必需的葉酸衍生物則為MTHFR[8-9]。

有專家學(xué)者曾于1994年首次克隆出MTHFR基因，之后他們采用DNA測(cè)序技術(shù)及PCR技術(shù)發(fā)現(xiàn)MTHFR基因內(nèi)存在二十余種多態(tài)[10]。另有專家學(xué)者在研究中發(fā)現(xiàn)MTHFR C677T突變的雜合子或純合子與MTHFR酶熱不穩(wěn)定性增加或活性下降具有密切的聯(lián)系，此兩種情況可作為誘發(fā)血同型半胱氨酸水平升高的危險(xiǎn)因素。因此，可推測(cè)妊娠期高血壓疾病的發(fā)病與MTHFR基因多態(tài)性具有一定的關(guān)系[11]。MTHFR C677T點(diǎn)突變?yōu)橐环N臨床上較為常見(jiàn)的錯(cuò)義突變，發(fā)生突變的基因?yàn)榈?77位上的胞嘧啶被胸腺嘧啶所取代，造成了纈氨酸取代丙氨酸，從而改變了MTHFR的氨基酸結(jié)構(gòu)，影響了MTHFR酶的活性，最為顯著的表現(xiàn)為MTHFR酶活性下降，這就使得同型半胱氨酸無(wú)法正常完成向蛋氨酸的轉(zhuǎn)化，造成血同型半胱氨酸的含量明顯升高[12]。而A1298C點(diǎn)突變作為MTHFR基因在臨床上另一類較為常見(jiàn)的突變類型，是指位于MTHFR基因上的第7外顯子C端調(diào)節(jié)區(qū)域上的腺苷酸被胞嘧啶所取代，造成了谷氨酸被丙氨酸所取代[13]。另外，由于該位置的突變對(duì)MboⅡ內(nèi)切酶的識(shí)別位點(diǎn)造成破壞，這就使得酶的活性明顯降低，因此，MTHFR基因A1298C突變也可作為導(dǎo)致血中同型半胱氨酸水平升高的危險(xiǎn)因素[14]。

本次研究結(jié)果顯示，試驗(yàn)組MTHFR C677T C/T基因型頻率明顯高于對(duì)照組，但A1298C雜合子聯(lián)合C667T雜合子基因型發(fā)生妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)性無(wú)明顯差異。該結(jié)果說(shuō)明，MTHFR基因是誘發(fā)出現(xiàn)妊娠期高血壓疾病的常見(jiàn)因素，不同位置的點(diǎn)突變具有特異性，但并非都能引起疾病的發(fā)作[15]。通過(guò)本次試驗(yàn)研究可知，MTHFR基因C677T多態(tài)性可作為誘發(fā)妊娠期高血壓疾病的危險(xiǎn)因素，同時(shí)可將其作為評(píng)價(jià)妊娠期高血壓疾病預(yù)后情況的一項(xiàng)指標(biāo)，臨床工作者應(yīng)據(jù)此判斷妊娠期高血壓疾病的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)，并采取有效的治療措施進(jìn)行應(yīng)對(duì)[16]。

[1]林其德，劉偉.妊娠高血壓綜合征發(fā)病相關(guān)基因的研究策略[J].中華圍產(chǎn)醫(yī)學(xué)雜志，2004，12（7）：195-196.

[2]Ueland PM，Refsum H，Beresford SA，et al.The controversy over homocysteine and cardiovas-cular risk[J].Am J Clin Nutr，2000，72（2）：324-332.

[3]王素敏，沈嶸，石小燕，等.MTHFR基因多態(tài)性與妊娠高血壓綜合征的相關(guān)性研究[J].生殖與避孕，2006，26（6）：1099-1100.

[4]Carr DB，McDonald GB，Brateng D，et al.The relationship bet ween hemodynam ics and inflammatory activation in women at risk for preeclampsia[J].Obstet Gyneco，2001，98（6）：1109-1116.

[5]Ueland PM，Hustad S，Schneede J，et al.Biological and clinical implications of the MTHFR C677T polymorphism[J]. Trends Pharmacol Sci，2001，22（4）：195-201.

[6]劉梅顏，姜榮環(huán)，郭成軍，等.同型半胱氨酸水平與年齡因素在高血壓合并焦慮狀態(tài)中的作用探討[J].中國(guó)醫(yī)藥，2013，8（8）：1055-1057.

[7]陳順華，張冬花，郭芳，等.輕中度高同型半胱氨酸血癥與冠心病的關(guān)系探討[J].中國(guó)醫(yī)藥，2013，8（6）：733-735. [8]Geisel J，Zimbelmann I，Schorr H，et al.Genetic defects as important factors for moderate hyperhomocysteinemia[J]. Clin Chem Lab Med，2001，39（8）：698-704.

[9]張成森，劉翠薇，潘旭東，等.N5，N10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與青年腦梗死的關(guān)系[J].中國(guó)醫(yī)藥，2012，7（5）：570-572.

[10]Ling KH，Rosli R，Duraisamy G，et al.The prevalence of MTHFR 677 C-T missense mutation，total plasma homocysteine levels and associated risk factors in Malay subjects[J].Med J Malaysia，2003，58（2）：243-254.

[11]Wang J，Trudinger BJ，Duarte N，et al.Elevated circulating homocysteine levels in placental vascular disease and associated preeclampsia[J].BJOG，2000，107（7）：935-938.

[12]Perales D，Martinez de J，Villarreal LE，et al.Folic acid levels homocysteine and polymorphism of methylenetetra hydrofolate reductase enzyme（MTHFR）in patients with pre-eclampsia and eclampsia[J].Gineco Lobstet Mex，2001，23（69）：6-11.

[13]矯富燕，魯衍強(qiáng)，李瑛，等.煙臺(tái)市牟平區(qū)漢族女性亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成酶還原酶基因多態(tài)性分布研究[J].分子診斷與治療雜志，2014，6（2）：909-910.

[14]尹騎，呂永剛.亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態(tài)性與自然流產(chǎn)的相關(guān)性分析[J].吉林醫(yī)學(xué)，2012，33（21）：4250-4251.

[15]張艷麗，魯衍強(qiáng)，李華鋒，等.臨沂市漢族女性MTHFR和MZRR基因多態(tài)性分布及其與同型半胱氨酸水平的相關(guān)性[J].中華醫(yī)學(xué)遺傳學(xué)雜志，2012，29（6）：705-706.

[16]韓紅敬沈淀，王艷核，等.亞甲基四氫葉酸還原酶基因677位多態(tài)性、高同型半胱氨酸血癥與復(fù)發(fā)性流產(chǎn)[J].生殖與避孕，2012，32（7）：477-478.

Correlation between MTHFR gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy

LI Junhua
Department of Obstetrics and Gynecology,Maternal and Child Health Center of Langfang City,Hebei Province,Langfang065000,China

Objective To explore and analyze the correlation between 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR)gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy.Methods 60 cases with gestational hypertension from June 2013 to June 2014 in Maternal and Child Health Center of Langfang City were as test group,while 60 cases of pregnant women with gestational hypertension in same period were as control group.MTHFR C677T polymorphism and A1298C gene of patients in two groups were tested by PCR-RFLP.Results In the test group MTHFR C677T C/T genotype frequencies was 38.33%,which in the control group was 21.67%;the test group was significantly higher than that in the control group,the difference was statistically significant(χ2=4.03,P＜0.05).T allele frequency of the mutation in the test group was 24%;T allele mutation in the control group was 16%,the test group was significantly higher than this in the control group,the difference was statistically significant(χ2=4.26,P＜0.05).MTHFR A1298C A/A genotype frequencies in the test group was 55.00%,and in the control group was 60.00%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.71,P＞0.05).MTHFR A1298C A/C genotype frequency in the test group was 33.33%,and that in the control group was 26.67%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.66,P＞0.05). MTHFR A1298C C/C genotype frequencies in the test group was 11.67%,and 13.33%in the control group,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.26,P＞0.05).Mutant allele frequency in the test group of was 76.1%,in the control group was 79.0%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.09,P＞0.05).C mutant allele frequency in the test group was 23.9%,21.0%in the control group,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.57,P＞0.05).Conclusion There is significant correlation between gene A1298C MTHFR polymorphism and the incidence of gestational hypertension;and MTHFR gene C677T polymorphism can be a risk factor to pregnancy-induced hypertension,so it can be used as an indicator of evaluation gestational hypertension prognosis,which should be of great importance to clinicians.

Gestational hypertension;5,10-methylenetetrahydrofolate reductase;Gene polymorphism

R714.246

A

1673-7210（2014）10（b）-0011-04

2014-07-10本文編輯：任念）

河北省廊坊市科學(xué)技術(shù)研究與發(fā)展計(jì)劃項(xiàng)目（編號(hào)2013013010C）。