李 英 唐英琪

1.遼寧省沈陽市第二中醫(yī)醫(yī)院，遼寧沈陽 110101；2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，遼寧大連 116011

載脂蛋白E(ApoE)基因多態(tài)性與2型糖尿病(T2DM)血脂及其腦梗死并發(fā)癥的關(guān)系研究

李 英1唐英琪2

1.遼寧省沈陽市第二中醫(yī)醫(yī)院，遼寧沈陽 110101；2.大連醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院內(nèi)分泌科，遼寧大連 116011

目的 分析并研究載脂蛋白E基因多態(tài)性與2型糖尿病血脂及其腦梗死并發(fā)癥的關(guān)系。方法 從2012年5月—2014年5月期間該院收治的2型糖尿病患者中選取100例作為臨床研究對(duì)象，設(shè)定為試驗(yàn)組，其中50例患者并發(fā)腦梗死，50例患者無并發(fā)癥；同時(shí)從全市范圍內(nèi)征集100例健康者作為對(duì)照組。兩組實(shí)驗(yàn)者均采用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性方法檢測(cè)其ApoE基因多態(tài)性，通過基因多樣性的檢結(jié)果分析并研究其與2型糖尿病血脂及其腦梗死并發(fā)癥的關(guān)系。結(jié)果 對(duì)照組和試驗(yàn)組等位基因分布頻率相差不大，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；對(duì)試驗(yàn)組的100例患者進(jìn)行組間比較發(fā)現(xiàn)，患者低密度脂蛋白與膽固醇含量在攜帶E4等位基因的患者中最高，在攜帶E2等位基因的患者中最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。且實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示并發(fā)腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率高，無并發(fā)腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論 載脂蛋白基因多樣性與2型糖尿病之間不存在必然的關(guān)系；2型糖尿病高脂血癥及其并發(fā)腦梗死與E4等位基因的攜帶有關(guān)。

載脂蛋白E基因多態(tài)性；2型糖尿??；血脂；腦梗死

2型糖尿病具有明顯的遺傳傾向和家族群發(fā)現(xiàn)象，是一類與 血漿脂蛋白代謝有關(guān)的基因疾病[1]。而載脂蛋白是構(gòu)成血漿脂蛋白的重要成分，在血漿脂蛋白的代謝中發(fā)揮著極其重要的作用，因此載脂蛋白與2型糖尿病之間存在著密切的關(guān)系[2]。臨床研究發(fā)現(xiàn)[3]2型糖尿病患者且并發(fā)腦梗死的患者往往表現(xiàn)為低密度脂蛋白和膽固醇水平的異常增高。在該研究中，對(duì)2型糖尿病載脂蛋白E基因多態(tài)性與其血脂及其腦梗死并發(fā)癥的關(guān)系進(jìn)行分析和研究，現(xiàn)分析2012年5月—2014年5月間該院收治的100例2型糖尿病患者的臨床資料，報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

從該院收治的2型糖尿病患者中選取100例作為臨床研究對(duì)象，設(shè)定為試驗(yàn)組，其中 50例患者并發(fā)腦梗死，50例患者無并發(fā)癥；同時(shí)從全市范圍內(nèi)征集100例健康者作為對(duì)照組。對(duì)照組 100例，男性 48例，女性 52例；年齡 21～86歲，平均（53.3± 10.1）歲；對(duì)照組的100人經(jīng)全身檢查確定為健康者。試驗(yàn)組100例，男性55例，女性45例，年齡24～82歲，平均（53.8±10.2）歲；病程1～3年，平均（2.5±1.1）年。

1.2 檢測(cè)方法

首先采集標(biāo)本：參加實(shí)驗(yàn)的200名受試者于清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集靜脈血8 mL，其中的3 mL用于血脂檢查，檢測(cè)其低密度脂蛋白和膽固醇含量，其余5 mL加入抗凝劑后低溫保存。隨后提取DNA：應(yīng)用酚-氯仿法從低溫保存的靜脈血液樣品中提取DNA,立即放入冰箱中低溫保存等待下步實(shí)驗(yàn)時(shí)再取出。然后擴(kuò)增PCR：該反應(yīng)在PCR擴(kuò)增儀中進(jìn)行，其中引物位于ApoE基因第四外顯子內(nèi)，包含了兩個(gè)多態(tài)性位點(diǎn)，反應(yīng)物包括適量模板DNA，dNTP，Mgcl2,Kcl,二甲亞砜及相應(yīng)的反應(yīng)酶等，隨后循環(huán)進(jìn)行變性，退火，延伸等過程直至得PCR產(chǎn)物。最后向PCR產(chǎn)物中加入內(nèi)切酶得酶切產(chǎn)物行凝膠電泳后，染色觀察。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

應(yīng)用 SPSS l5.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)數(shù)資料采用百分比表示,數(shù)據(jù)對(duì)比采取χ2校驗(yàn)。

2 結(jié)果

2.1 等位基因分布頻率

對(duì)兩組受試者等位基因分布頻率進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)E2，E3，E4分布頻率相差不大，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，見表1。

表1 兩組等位基因分布頻率比較[n（%）]

2.2 ApoE基與腦梗死并發(fā)癥的關(guān)系

將試驗(yàn)組中的50例并發(fā)腦梗死者與50例無并發(fā)癥者進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)并發(fā)腦梗死組21例攜帶E4基因，無并發(fā)癥組7例攜帶E4基因，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），見表2。

表2 ApoE基與腦梗死并發(fā)癥的關(guān)系

3 討論

載脂蛋白是一種關(guān)系到體內(nèi)脂蛋白轉(zhuǎn)運(yùn)的多態(tài)性蛋白，其多態(tài)性與機(jī)體多種疾病有著密切關(guān)系。其具有多態(tài)性的原因主要是載脂蛋白基因的多態(tài)性與基因多樣性表達(dá)。目前，關(guān)于載脂蛋白E基因多態(tài)性與疾病的關(guān)系已成為研究的熱點(diǎn)[4]。在該研究中設(shè)置了對(duì)照實(shí)驗(yàn)，其中對(duì)照組為 100名健康者，試驗(yàn)組為100例2型糖尿病患者，對(duì)這200例受試者E2，E3，E4等位基因進(jìn)行檢測(cè)。E3為野生型基因而E2和E4為突變型基因，突變型基因與人體內(nèi)血脂的含量有著密切的關(guān)系[5-6]。E2基因所表達(dá)的載脂蛋白與低密度脂蛋白的親和力較低而E4基因表達(dá)產(chǎn)物與低密度脂蛋白的親和力較高[7-8]。E4與低密度脂蛋白以及膽固醇的高親和力，大大降低了體內(nèi)血脂的代謝速度，從而使血脂含量較高，隨后通過高血脂來促進(jìn)腦梗死的病發(fā)，而E4與2型糖尿病的發(fā)生并無直接關(guān)系[9-10]。在該實(shí)驗(yàn)中，對(duì)兩組檢測(cè)結(jié)果進(jìn)行比較，對(duì)照組和試驗(yàn)組等位基因分布頻率相差不大，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；患者低密度脂蛋白與膽固醇含量在攜帶E4等位基因的患者中最高，在攜帶E2等位基因的患者中最低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。且并發(fā)腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率高，無并發(fā)腦梗死的患者E4等位基因的攜帶率低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

綜上所述，2型糖尿病高脂血癥及其并發(fā)腦梗死與E4等位基因的攜帶有密切的關(guān)系。

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Study of the Relationship Between Apolipoprotein E(ApoE)Gene Polymorphism,Type 2 Diabetes(T2DM)Blood Lipid and Cerebral Infarction Complication

LI Ying1TANG Yingqi2
1.Liaoning Shenyang Second Hospital of Traditional Chinese Medicine,Shenyang,Liaoning Province,110101,China;2.Department of Endocrinology,The First Affiliated Hospital of Dalian Medical University,Dalian,Liaoning Province,116011,China

Objective To analyze and study the relationship between apolipoprotein E gene polymorphism and type 2 diabetes blood lipid and complication of cerebral infarction.Methods 100 cases with type 2 diabetes admitted in our hospital from May 2012 to May 2014 were selected as the clinical subjects and set as the experimental group,including 50 cases with cerebral infarction and 50 cases without.And 100 healthy controls selected from the city were set as the control group during the same period.Polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism method was used to detect the ApoE gene polymorphism of the two groups.The detection results of genetic diversity were analyzed and the relationship between type 2 diabetes blood lipid and complication of cerebral infarction was studied.Results The distribution frequency of allele in the control group and the experimental group had no obvious difference,the difference was not statistically significant(P＞0.05);It was found by comparing 100 patients in the experimental group that patients carrying E4 allele had the highest low density lipoprotein and cholesterol content, while patients carrying E2 allele had the lowest,the difference was statistically significant(P＜0.05).The experimental results showed that diabetic patients with cerebral infarction had high carrying rate of E4 allele,while those without cerebral infarction had low carrying rate of E4 allele,the difference was statistically significant(P＜0.05).Conclusion There is no necessary relationship between diversity of apolipoprotein gene with type 2 diabetes;type 2 diabetic hyperlipemia and cerebral infarction complication have certain relationship with the carrying of E4 alleles.

Apolipoprotein E gene polymorphism;Type 2 diabetes;Blood lipid;Cerebral infarction

R743.33

A

1674-0742（2014）11（a）－0037-03

李英(1965.2-),女，遼寧沈陽人，本科，副主任醫(yī)師，研究方向：腦血管病。