楊運華+石明旺+原麗+宋明

摘要：采用十字交叉法測定4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對小麥紋枯病菌（Ceratobasidium cornigerum）、小麥赤霉病菌（Fusarium graminearum）、葡萄炭疽病菌（Glomerella cingulata）、梨黑斑病菌（Alternaria kikuchiana）、柑橘綠霉菌（Penicillium digitatum）的抑菌作用。結(jié)果表明，4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種植物真菌性病害菌落生長均有一定的抑制作用，其中以卵胞白僵菌（Beauveria brongniartii）菌株BE-1對5種供試植物病原真菌菌落生長的平均抑制率最高。表明利用蟲生真菌代謝產(chǎn)物對開發(fā)抗植物病原菌活性物質(zhì)具有較大的開發(fā)潛力，值得進一步深入研究。

關(guān)鍵詞：抑菌作用；小麥紋枯病菌（Ceratobasidium cornigerum）；小麥赤霉病菌（Fusarium graminearum）；葡萄炭疽病菌（Glomerella cingulata）；梨黑斑病菌（Alternaria kikuchiana）；柑橘綠霉菌（Penicillium digitatum）

中圖分類號：S476+.12；S432.4+4；S482.2+92 文獻標(biāo)識碼：A 文章編號：0439-8114（2014）01-0076-03

Inhibitory Effect of Four Entomogenous Fungal Metabolites against Fungal Diseases of Plant

YANG Yun-hua，SHI Ming-wang，YUAN Li，SONG Ming

（College of Resources and Environment，Henan Institute of Science and Technology， Xinxiang 453003，Henan，China）

Abstract： The inhibitory effects of four entomogenous fungal metabolites against Ceratobasidium cornigerum， Fusarium graminearum， Glomerella cingulata， Alternaria kikuchiana and Penicillium digitatum were studied. The results showed that four strains had a certain inhibition against five kinds of fungal diseases of plant， among them the Beauveria brongniartii strains BE-1 had the highest inhibition rate on five kinds of plant pathogenic fungi tested. It is indicated that developeding anti - plant pathogens active substances from entomogenous fungal metabolites has great potential， therefore， further researches are worthwhile.

Key words： inhibitory effect； Ceratobasidium cornigerum； Fusarium graminearum； Glomerella cingulata； Alternaria kikuchiana； Penicillium digitatum.

收稿日期：2013-03-20

作者簡介：楊運華（1984-），男，河南周口人，碩士，主要從事害蟲生物防治研究，（電話）15903019020（電子信箱）hnkjxyyyh@163.com；

通訊作者，石明旺，教授，博士，主要從事害蟲生物防治研究，（電子信箱）shimw888@163.com。

在植物病害中，70%～80%的病害是病原真菌侵染所引起的。植物真菌病害除直接造成農(nóng)作物產(chǎn)量和品質(zhì)下降外，部分病原真菌在侵染農(nóng)作物過程中可分泌多種毒素和代謝物，對人、畜的安全構(gòu)成極大威脅。此外，重大農(nóng)作物真菌病害的控制往往依賴化學(xué)防治，殺菌劑的使用不僅加大生產(chǎn)成本，而且其反復(fù)施用不可避免地帶來環(huán)境污染與農(nóng)產(chǎn)品農(nóng)藥殘留問題[1]。因此需要不斷篩選具有新結(jié)構(gòu)或有效成分的抗菌活性物質(zhì)以滿足生產(chǎn)需要。

蟲生真菌是指那些在自然條件下就能直接侵入蟲體，增殖并快速引起昆蟲死亡或降低寄主活力使其衰弱的真菌類群。蟲生真菌種類多、數(shù)量大、代謝類型復(fù)雜，可產(chǎn)生多種功能特異的生物活性物質(zhì)，為人類開發(fā)新的藥品及其他領(lǐng)域的利用提供了重要的新資源[2]。目前，有關(guān)其生物活性物質(zhì)的研究受到廣泛關(guān)注[3-11]，但是，這些菌株主要集中在冬蟲夏草、蛹蟲草及其無性型等少數(shù)種類。對蟲生真菌代謝產(chǎn)物的抗植物真菌病害活性方面的研究尚鮮有報道。試驗以4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物為研究材料，測定了其對植物真菌性病害的抑制作用，以期為后期真菌性病害活性物質(zhì)的提取及有關(guān)藥物的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

1.1.1 供試菌株 BV是從田間自然感病的玉米螟蟲尸上經(jīng)分離純化獲得的；菌株BE-1、BE-2、MA均由河南科技學(xué)院昆蟲病理實驗室提供。經(jīng)鑒定菌株BV為球孢白僵菌（Beauveria bassiana），菌株BE-1、BE-2為卵胞白僵菌（Beauveria brongniartii），菌株MA為金龜子綠僵菌（Metarhizium anisopliae）。

1.1.2 供試病原真菌 2種小麥真菌性病害，小麥紋枯病菌（Ceratobasidium cornigerum）、小麥赤霉病菌（Fusarium graminearum）；3種果樹真菌性病害，葡萄炭疽病菌（Glomerella cingulata）、梨黑斑病菌（Alternaria kikuchiana）、柑橘綠霉菌（Penicillium digitatum）。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g切成1 cm3大小的小塊，加適量水煮沸約30 min，經(jīng)過濾除去馬鈴薯塊，剩余汁液繼續(xù)加熱，并加入20 g瓊脂，不斷攪拌，待瓊脂溶化后，再加入20 g葡萄糖，然后倒出汁液，定容至1 000 mL。分裝，121 ℃滅菌30 min，備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 代謝物的提取 菌株BV、BE-1、BE-2和MA，分別經(jīng)分離、純化，接種到PDA培養(yǎng)基上，25 ℃每天12 h光照培養(yǎng)22 d，將菌絲和培養(yǎng)基切成約0.5 cm×0.5 cm的小方塊，再用2倍體積的丙酮浸泡菌絲和培養(yǎng)基3次（每次浸泡3 d）。收集丙酮浸泡液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)（40 ℃）獲得固體發(fā)酵代謝產(chǎn)物粗提物。

1.3.2 抑制真菌的生物測定 （1）藥液制備。用無菌水溶解代謝產(chǎn)物粗提物，配成1 mg/mL的藥液；（2）打菌餅。將待測植物病原真菌接種到PDA培養(yǎng)基上，于產(chǎn)孢前用4 mm打孔器打菌餅；（3）生物測定方法。將1 mL藥液與培養(yǎng)皿中約50 ℃的PDA培養(yǎng)基混勻，待平板凝固后，菌餅置于平板上，每皿3個。72 h后觀察抑菌情況，采用十字交叉法測量抑菌圈直徑，重復(fù)3次，對照用無菌水處理。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用Excel 2003進行數(shù)據(jù)處理。

抑制率計算公式為：

抑制率=■×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種供試植物病原真菌菌落的抑制作用

4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種供試植物病原真菌菌落的抑制作用見表1。

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株MA、菌株BE-2、菌株BV，其中菌株BE-1、菌株MA、菌株BE-2對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制率相對較高，菌株BV對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制率相對較低。

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株BV、菌株MA，其中菌株BE-1、菌株BE-2對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制率較高；菌株MA對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制率較低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株MA、菌株BV，其中菌株BE-1、菌株BE-2對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制率較高；菌株MA和菌株BV對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制率較低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對梨黑斑病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株MA、菌株BV，其中菌株BE-1對梨黑斑病菌菌落生長的抑制率較其他3株蟲生真菌高。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對柑橘綠霉菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株MA、菌株BE-2、菌株BV、菌株BE-1，其中菌株MA對柑橘綠霉病菌菌落生長的抑制率最高；菌株BE-2、菌株BV、菌株BE-1對柑橘綠霉菌菌落生長的抑制率較低。

2.2 4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對同一供試植物病原真菌菌落的抑制作用比較

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種植物病原真菌菌落生長情況都有明顯影響。從植物病原真菌角度而言，4種蟲生真菌代謝物對柑橘綠霉菌菌落生長的平均抑制率最高，然后依次是小麥紋枯病菌、小麥赤霉病菌、葡萄炭疽病菌菌落，對梨黑斑病菌菌落生長的抑制率最低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種植物病原真菌菌落生長的平均抑制率分別為32.67%、28.46%、25.37%、23.33%、21.25%。

2.3 5種植物病原真菌對同一蟲生真菌代謝產(chǎn)物的敏感性比較

就蟲生真菌代謝產(chǎn)物而言，菌株BE-1對5種植物病原真菌菌落生長的平均抑制率較高，為30.78%；然后依次是菌株BE-2、菌株MA、菌株BV， 分別為26.80%、25.23%、22.04%。

不同植物病原真菌對同一蟲生真菌代謝產(chǎn)物的敏感性有很大差異。如： 小麥赤霉病菌、葡萄炭疽病菌、梨黑斑病菌對菌株BV的敏感性不如柑橘綠霉病菌、小麥紋枯病菌；菌株BE-1對5種植物病原真菌均較敏感；菌株BE-2對柑橘綠霉菌、小麥紋枯病菌較敏感，而對梨黑斑病菌的敏感性程度要差一些；菌株MA對柑橘綠霉菌較敏感，對梨黑斑病菌、葡萄炭疽病菌、小麥紋枯病菌的敏感性較差一些。

3 小結(jié)與討論

所有供試蟲生真菌代謝產(chǎn)物對植物病原真菌菌落生長都有一定的影響。其中，以卵胞白僵菌菌株BE-1對5種供試植物病原真菌菌落生長的平均抑制率最高。5種供試植物病原真菌中，以柑橘綠霉菌對蟲生真菌代謝產(chǎn)物最敏感。利用有益微生物制約有害微生物是開發(fā)利用微生物資源的重要研究領(lǐng)域[12]。本試驗中的4株蟲生真菌對植物病原真菌具有中等強度的抑菌活性，這足以說明利用蟲生真菌代謝產(chǎn)物開發(fā)抗植物病原真菌活性物質(zhì)具有較大的開發(fā)潛力，值得進一步深入研究。

蟲生真菌代謝產(chǎn)物對植物病原真菌雖有一定的抑制效果，但其作用卻不足以作為控制植物病原真菌的主要因素。為提高防效，可以考慮通過其他技術(shù)手段提高蟲生真菌代謝物活性或與高效、低毒農(nóng)藥混用等，這些都需要今后進一步研究。

參考文獻：

[1] 康振生.我國植物真菌病害的研究現(xiàn)狀及發(fā)展策略[J].植物保護，2010，36（3）：9-12.

[2] 邵 穎，丁 婷，葛 飛，等.40株蟲生真菌發(fā)酵液對白色念珠菌的抑制作用[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，32（3）：328-331.

[3] 蒲蟄龍，李增智.昆蟲真菌學(xué)[M].合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，1996.

[4] 梁宗琦.我國蟲草屬真菌研究開發(fā)的現(xiàn)狀及思考[J].食用菌學(xué)報，2001，8（2）：53-62.

[5] 張永剛，袁文鵬，夏雪奎，等.一株蟲生真菌殺線蟲活性代謝產(chǎn)物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2010，12（2）：225-228.

[6] 陳安徽，李春如，樊美珍.蟬擬青霉代謝產(chǎn)物清除DPPH自由基和抗真菌活性的研究[J].菌物學(xué)報，2008，27（3）：405-412.

[7] 張延威，韓燕峰，梁建東，等.5種蟲生擬青霉高產(chǎn)VE菌株的篩選及優(yōu)化[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（4）：1314-1315.

[8] 胡豐林，李增智.蟲草及相關(guān)真菌的次生代謝產(chǎn)物及其活性[J].菌物學(xué)報，2007，26（4）：607-632.

[9] 潘潔茹，張鴻聲，朱炎平，等.蟲生真菌座殼孢代謝產(chǎn)物殺蟲活性[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2007，36（1）：25-27.

[10] 楊 成，胡豐林，倪 健，等.細腳擬青霉代謝產(chǎn)物清除自由基和抑制單胺氧化酶活性的研究[J].菌物學(xué)報，2006，25（1）：63-69.

[11] 周蘭蘭，明 亮，馬傳庚，等.一種白僵菌代謝產(chǎn)物提取物抗抑郁作用的研究[J].中國藥理學(xué)通報，2005，21（3）：358-360.

[12] 蔣繼志，趙麗坤，史 娟，等.幾種真菌發(fā)酵液對致病疫霉的抑制作用[J].微生物學(xué)通報，2001，28（2）：55-59.

（責(zé)任編輯 童志婷）

1.1.2 供試病原真菌 2種小麥真菌性病害，小麥紋枯病菌（Ceratobasidium cornigerum）、小麥赤霉病菌（Fusarium graminearum）；3種果樹真菌性病害，葡萄炭疽病菌（Glomerella cingulata）、梨黑斑病菌（Alternaria kikuchiana）、柑橘綠霉菌（Penicillium digitatum）。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g切成1 cm3大小的小塊，加適量水煮沸約30 min，經(jīng)過濾除去馬鈴薯塊，剩余汁液繼續(xù)加熱，并加入20 g瓊脂，不斷攪拌，待瓊脂溶化后，再加入20 g葡萄糖，然后倒出汁液，定容至1 000 mL。分裝，121 ℃滅菌30 min，備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 代謝物的提取 菌株BV、BE-1、BE-2和MA，分別經(jīng)分離、純化，接種到PDA培養(yǎng)基上，25 ℃每天12 h光照培養(yǎng)22 d，將菌絲和培養(yǎng)基切成約0.5 cm×0.5 cm的小方塊，再用2倍體積的丙酮浸泡菌絲和培養(yǎng)基3次（每次浸泡3 d）。收集丙酮浸泡液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)（40 ℃）獲得固體發(fā)酵代謝產(chǎn)物粗提物。

1.3.2 抑制真菌的生物測定 （1）藥液制備。用無菌水溶解代謝產(chǎn)物粗提物，配成1 mg/mL的藥液；（2）打菌餅。將待測植物病原真菌接種到PDA培養(yǎng)基上，于產(chǎn)孢前用4 mm打孔器打菌餅；（3）生物測定方法。將1 mL藥液與培養(yǎng)皿中約50 ℃的PDA培養(yǎng)基混勻，待平板凝固后，菌餅置于平板上，每皿3個。72 h后觀察抑菌情況，采用十字交叉法測量抑菌圈直徑，重復(fù)3次，對照用無菌水處理。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用Excel 2003進行數(shù)據(jù)處理。

抑制率計算公式為：

抑制率=■×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種供試植物病原真菌菌落的抑制作用

4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種供試植物病原真菌菌落的抑制作用見表1。

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株MA、菌株BE-2、菌株BV，其中菌株BE-1、菌株MA、菌株BE-2對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制率相對較高，菌株BV對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制率相對較低。

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株BV、菌株MA，其中菌株BE-1、菌株BE-2對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制率較高；菌株MA對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制率較低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株MA、菌株BV，其中菌株BE-1、菌株BE-2對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制率較高；菌株MA和菌株BV對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制率較低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對梨黑斑病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株MA、菌株BV，其中菌株BE-1對梨黑斑病菌菌落生長的抑制率較其他3株蟲生真菌高。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對柑橘綠霉菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株MA、菌株BE-2、菌株BV、菌株BE-1，其中菌株MA對柑橘綠霉病菌菌落生長的抑制率最高；菌株BE-2、菌株BV、菌株BE-1對柑橘綠霉菌菌落生長的抑制率較低。

2.2 4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對同一供試植物病原真菌菌落的抑制作用比較

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種植物病原真菌菌落生長情況都有明顯影響。從植物病原真菌角度而言，4種蟲生真菌代謝物對柑橘綠霉菌菌落生長的平均抑制率最高，然后依次是小麥紋枯病菌、小麥赤霉病菌、葡萄炭疽病菌菌落，對梨黑斑病菌菌落生長的抑制率最低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種植物病原真菌菌落生長的平均抑制率分別為32.67%、28.46%、25.37%、23.33%、21.25%。

2.3 5種植物病原真菌對同一蟲生真菌代謝產(chǎn)物的敏感性比較

就蟲生真菌代謝產(chǎn)物而言，菌株BE-1對5種植物病原真菌菌落生長的平均抑制率較高，為30.78%；然后依次是菌株BE-2、菌株MA、菌株BV， 分別為26.80%、25.23%、22.04%。

不同植物病原真菌對同一蟲生真菌代謝產(chǎn)物的敏感性有很大差異。如： 小麥赤霉病菌、葡萄炭疽病菌、梨黑斑病菌對菌株BV的敏感性不如柑橘綠霉病菌、小麥紋枯病菌；菌株BE-1對5種植物病原真菌均較敏感；菌株BE-2對柑橘綠霉菌、小麥紋枯病菌較敏感，而對梨黑斑病菌的敏感性程度要差一些；菌株MA對柑橘綠霉菌較敏感，對梨黑斑病菌、葡萄炭疽病菌、小麥紋枯病菌的敏感性較差一些。

3 小結(jié)與討論

所有供試蟲生真菌代謝產(chǎn)物對植物病原真菌菌落生長都有一定的影響。其中，以卵胞白僵菌菌株BE-1對5種供試植物病原真菌菌落生長的平均抑制率最高。5種供試植物病原真菌中，以柑橘綠霉菌對蟲生真菌代謝產(chǎn)物最敏感。利用有益微生物制約有害微生物是開發(fā)利用微生物資源的重要研究領(lǐng)域[12]。本試驗中的4株蟲生真菌對植物病原真菌具有中等強度的抑菌活性，這足以說明利用蟲生真菌代謝產(chǎn)物開發(fā)抗植物病原真菌活性物質(zhì)具有較大的開發(fā)潛力，值得進一步深入研究。

蟲生真菌代謝產(chǎn)物對植物病原真菌雖有一定的抑制效果，但其作用卻不足以作為控制植物病原真菌的主要因素。為提高防效，可以考慮通過其他技術(shù)手段提高蟲生真菌代謝物活性或與高效、低毒農(nóng)藥混用等，這些都需要今后進一步研究。

參考文獻：

[1] 康振生.我國植物真菌病害的研究現(xiàn)狀及發(fā)展策略[J].植物保護，2010，36（3）：9-12.

[2] 邵 穎，丁 婷，葛 飛，等.40株蟲生真菌發(fā)酵液對白色念珠菌的抑制作用[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報，2005，32（3）：328-331.

[3] 蒲蟄龍，李增智.昆蟲真菌學(xué)[M].合肥：安徽科學(xué)技術(shù)出版社，1996.

[4] 梁宗琦.我國蟲草屬真菌研究開發(fā)的現(xiàn)狀及思考[J].食用菌學(xué)報，2001，8（2）：53-62.

[5] 張永剛，袁文鵬，夏雪奎，等.一株蟲生真菌殺線蟲活性代謝產(chǎn)物的分離與結(jié)構(gòu)鑒定[J].農(nóng)藥學(xué)學(xué)報，2010，12（2）：225-228.

[6] 陳安徽，李春如，樊美珍.蟬擬青霉代謝產(chǎn)物清除DPPH自由基和抗真菌活性的研究[J].菌物學(xué)報，2008，27（3）：405-412.

[7] 張延威，韓燕峰，梁建東，等.5種蟲生擬青霉高產(chǎn)VE菌株的篩選及優(yōu)化[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué)，2008，36（4）：1314-1315.

[8] 胡豐林，李增智.蟲草及相關(guān)真菌的次生代謝產(chǎn)物及其活性[J].菌物學(xué)報，2007，26（4）：607-632.

[9] 潘潔茹，張鴻聲，朱炎平，等.蟲生真菌座殼孢代謝產(chǎn)物殺蟲活性[J].福建農(nóng)林大學(xué)學(xué)報（自然科學(xué)版），2007，36（1）：25-27.

[10] 楊 成，胡豐林，倪 健，等.細腳擬青霉代謝產(chǎn)物清除自由基和抑制單胺氧化酶活性的研究[J].菌物學(xué)報，2006，25（1）：63-69.

[11] 周蘭蘭，明 亮，馬傳庚，等.一種白僵菌代謝產(chǎn)物提取物抗抑郁作用的研究[J].中國藥理學(xué)通報，2005，21（3）：358-360.

[12] 蔣繼志，趙麗坤，史 娟，等.幾種真菌發(fā)酵液對致病疫霉的抑制作用[J].微生物學(xué)通報，2001，28（2）：55-59.

（責(zé)任編輯 童志婷）

1.1.2 供試病原真菌 2種小麥真菌性病害，小麥紋枯病菌（Ceratobasidium cornigerum）、小麥赤霉病菌（Fusarium graminearum）；3種果樹真菌性病害，葡萄炭疽病菌（Glomerella cingulata）、梨黑斑病菌（Alternaria kikuchiana）、柑橘綠霉菌（Penicillium digitatum）。

1.2 培養(yǎng)基

馬鈴薯葡萄糖瓊脂（PDA）培養(yǎng)基：馬鈴薯200 g切成1 cm3大小的小塊，加適量水煮沸約30 min，經(jīng)過濾除去馬鈴薯塊，剩余汁液繼續(xù)加熱，并加入20 g瓊脂，不斷攪拌，待瓊脂溶化后，再加入20 g葡萄糖，然后倒出汁液，定容至1 000 mL。分裝，121 ℃滅菌30 min，備用。

1.3 試驗方法

1.3.1 代謝物的提取 菌株BV、BE-1、BE-2和MA，分別經(jīng)分離、純化，接種到PDA培養(yǎng)基上，25 ℃每天12 h光照培養(yǎng)22 d，將菌絲和培養(yǎng)基切成約0.5 cm×0.5 cm的小方塊，再用2倍體積的丙酮浸泡菌絲和培養(yǎng)基3次（每次浸泡3 d）。收集丙酮浸泡液，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)（40 ℃）獲得固體發(fā)酵代謝產(chǎn)物粗提物。

1.3.2 抑制真菌的生物測定 （1）藥液制備。用無菌水溶解代謝產(chǎn)物粗提物，配成1 mg/mL的藥液；（2）打菌餅。將待測植物病原真菌接種到PDA培養(yǎng)基上，于產(chǎn)孢前用4 mm打孔器打菌餅；（3）生物測定方法。將1 mL藥液與培養(yǎng)皿中約50 ℃的PDA培養(yǎng)基混勻，待平板凝固后，菌餅置于平板上，每皿3個。72 h后觀察抑菌情況，采用十字交叉法測量抑菌圈直徑，重復(fù)3次，對照用無菌水處理。

1.4 統(tǒng)計方法

應(yīng)用Excel 2003進行數(shù)據(jù)處理。

抑制率計算公式為：

抑制率=■×100%

2 結(jié)果與分析

2.1 4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種供試植物病原真菌菌落的抑制作用

4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種供試植物病原真菌菌落的抑制作用見表1。

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株MA、菌株BE-2、菌株BV，其中菌株BE-1、菌株MA、菌株BE-2對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制率相對較高，菌株BV對小麥赤霉病菌菌落生長的抑制率相對較低。

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株BV、菌株MA，其中菌株BE-1、菌株BE-2對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制率較高；菌株MA對小麥紋枯病菌菌落生長的抑制率較低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株MA、菌株BV，其中菌株BE-1、菌株BE-2對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制率較高；菌株MA和菌株BV對葡萄炭疽病菌菌落生長的抑制率較低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對梨黑斑病菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株BE-1、菌株BE-2、菌株MA、菌株BV，其中菌株BE-1對梨黑斑病菌菌落生長的抑制率較其他3株蟲生真菌高。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對柑橘綠霉菌菌落生長的抑制作用由大到小依次為菌株MA、菌株BE-2、菌株BV、菌株BE-1，其中菌株MA對柑橘綠霉病菌菌落生長的抑制率最高；菌株BE-2、菌株BV、菌株BE-1對柑橘綠霉菌菌落生長的抑制率較低。

2.2 4株蟲生真菌代謝產(chǎn)物對同一供試植物病原真菌菌落的抑制作用比較

由表1可知，4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種植物病原真菌菌落生長情況都有明顯影響。從植物病原真菌角度而言，4種蟲生真菌代謝物對柑橘綠霉菌菌落生長的平均抑制率最高，然后依次是小麥紋枯病菌、小麥赤霉病菌、葡萄炭疽病菌菌落，對梨黑斑病菌菌落生長的抑制率最低。4種蟲生真菌代謝產(chǎn)物對5種植物病原真菌菌落生長的平均抑制率分別為32.67%、28.46%、25.37%、23.33%、21.25%。

2.3 5種植物病原真菌對同一蟲生真菌代謝產(chǎn)物的敏感性比較

就蟲生真菌代謝產(chǎn)物而言，菌株BE-1對5種植物病原真菌菌落生長的平均抑制率較高，為30.78%；然后依次是菌株BE-2、菌株MA、菌株BV， 分別為26.80%、25.23%、22.04%。

不同植物病原真菌對同一蟲生真菌代謝產(chǎn)物的敏感性有很大差異。如： 小麥赤霉病菌、葡萄炭疽病菌、梨黑斑病菌對菌株BV的敏感性不如柑橘綠霉病菌、小麥紋枯病菌；菌株BE-1對5種植物病原真菌均較敏感；菌株BE-2對柑橘綠霉菌、小麥紋枯病菌較敏感，而對梨黑斑病菌的敏感性程度要差一些；菌株MA對柑橘綠霉菌較敏感，對梨黑斑病菌、葡萄炭疽病菌、小麥紋枯病菌的敏感性較差一些。

3 小結(jié)與討論

所有供試蟲生真菌代謝產(chǎn)物對植物病原真菌菌落生長都有一定的影響。其中，以卵胞白僵菌菌株BE-1對5種供試植物病原真菌菌落生長的平均抑制率最高。5種供試植物病原真菌中，以柑橘綠霉菌對蟲生真菌代謝產(chǎn)物最敏感。利用有益微生物制約有害微生物是開發(fā)利用微生物資源的重要研究領(lǐng)域[12]。本試驗中的4株蟲生真菌對植物病原真菌具有中等強度的抑菌活性，這足以說明利用蟲生真菌代謝產(chǎn)物開發(fā)抗植物病原真菌活性物質(zhì)具有較大的開發(fā)潛力，值得進一步深入研究。

蟲生真菌代謝產(chǎn)物對植物病原真菌雖有一定的抑制效果，但其作用卻不足以作為控制植物病原真菌的主要因素。為提高防效，可以考慮通過其他技術(shù)手段提高蟲生真菌代謝物活性或與高效、低毒農(nóng)藥混用等，這些都需要今后進一步研究。

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（責(zé)任編輯 童志婷）