秦沐婷，王曉非

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，沈陽(yáng)110004）

CXCL16在系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血清中的表達(dá)及意義

秦沐婷，王曉非

（中國(guó)醫(yī)科大學(xué)附屬盛京醫(yī)院風(fēng)濕免疫科，沈陽(yáng)110004）

目的探討CXCL16在系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者外周血清中表達(dá)水平及其臨床意義。方法采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測(cè)來(lái)自系統(tǒng)性紅斑狼瘡（SLE）患者（34名）的47份血清和正常對(duì)照組14份血清CXCL16水平，收集被檢者同批次實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)，計(jì)算SLE活動(dòng)指數(shù)（SLEDAI），進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。結(jié)果SLE患者血清中CXCL16水平高于正常對(duì)照組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.04）；具有面部皮損SLE患者血清CXCL16水平較無(wú)皮損組高、腎臟損傷SLE患者血清CXCL16水平高于無(wú)腎損傷組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.04）；病情相對(duì)活動(dòng)SLE患者（SLEDAI≥10）血清CXCL16水平較相對(duì)緩解組（SLEDAI＜10）高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.04）；12例經(jīng)治療SLE患者SLEDAI評(píng)分及血清CXCL16水平減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.04）。結(jié)論CXCL16參與SLE的發(fā)病過(guò)程且與疾病嚴(yán)重程度有一定相關(guān)性；CXCL16可能參與了SLE患者皮膚炎癥和腎臟損害的發(fā)病過(guò)程；血清CXCL16水平變化對(duì)于判斷SLE治療效果有一定參考意義。

紅斑狼瘡；系統(tǒng)性；趨化因子；CXCL16

系統(tǒng)性紅斑狼瘡（systemic lupus erythematosus，SLE）是一種多種因素互相作用下以T、B淋巴細(xì)胞異?；罨a(chǎn)生大量自身抗體，臨床表現(xiàn)多樣，常造成多系統(tǒng)損害為特征的慢性自身免疫性疾病。細(xì)胞趨化因子在參與炎癥和免疫應(yīng)答過(guò)程中起重要作用，趨化因子CXCL16以可溶分泌型（Soluble CXCL16，S-CXCL16）和跨膜膜結(jié)合型（Transmembrane CXCL16，TM-CXCL16）兩種形式存在，既可以以可溶形式參與激活的T淋巴細(xì)胞趨化作用，又可以與其受體CXCR6結(jié)合促進(jìn)炎癥進(jìn)展，已證實(shí)在腎炎［1］、肺部疾患［2］、動(dòng)脈粥樣硬化［3］等多種炎性病變組織中表達(dá)。目前已有CXCL16與類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎、干燥綜合征等結(jié)締組織疾病相關(guān)探索研究。國(guó)內(nèi)外關(guān)于CXCL16與SLE尚缺乏相關(guān)性研究，本文通過(guò)檢測(cè)SLE患者外周血清CXCL16表達(dá)水平，旨在探討其水平變化與SLE發(fā)病機(jī)制和疾病活動(dòng)程度關(guān)系及其臨床意義。

1 材料與方法

1.1 研究對(duì)象及其分組

根據(jù)美國(guó)風(fēng)濕病學(xué)會(huì)（ACR）2009年制訂的SLE分類標(biāo)準(zhǔn)，收集來(lái)自34名SLE患者血清，其中男1例，女34例，病程3月～32年，平均年齡37.43±14.34歲（18歲～67歲）；正常對(duì)照組血清14例取自同期健康體檢者，女14例，男1例，平均年齡42.21±8.84歲（22歲～63歲）；SLE患者組與正常對(duì)照組的年齡、性別構(gòu)成無(wú)明顯差異；入組人群入院檢查均未發(fā)現(xiàn)腫瘤或感染性疾病。

將SLE患者分為腎臟損傷組（16例）與非腎臟損傷組（19例）；血液損傷組（19例）與非血液損傷組（16例）；有關(guān)節(jié)腫痛組（16例）與無(wú)關(guān)節(jié)腫痛組（19例）；有面部皮損組（21例）與無(wú)面部皮損組（14例）；有雷諾現(xiàn)象組（14例）與無(wú)雷諾現(xiàn)象組（20例）；腎臟損傷標(biāo)準(zhǔn)為蛋白尿（24 h尿蛋白定量＞0.4 g/d）或管型尿，除外其他疾病導(dǎo)致腎損傷；血液損傷標(biāo)準(zhǔn)為有溶血性貧血伴網(wǎng)織紅細(xì)胞增多或白細(xì)胞＜4×109/L或血小板＜100×1012/L（以上指標(biāo)至少2次且除外藥物影響）。

1.2 主要試劑及儀器

人CXCL16酶聯(lián)免疫檢測(cè)試劑盒購(gòu)自R&D公司；酶標(biāo)儀為瑞士帝肯公司Rain-bow型。

1.3 標(biāo)本采集

獲得研究對(duì)象同意情況下，采清晨空腹靜脈血3 mL，離心（3 000 r/min，10 min）后取上清，置PC管中-20℃保存，同批檢測(cè)。

1.4 CXCL16的測(cè)定

采用生物素雙抗體夾心酶聯(lián)免疫吸附法，標(biāo)本加入預(yù)包被人CXCL16單克隆抗體酶標(biāo)孔中，溫育，加入生物素標(biāo)記的抗CXCL16抗體，與鏈霉親和素-HRP結(jié)合，加入底物，酸化，嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書(shū)程序進(jìn)行操作。酶標(biāo)儀440 nm處測(cè)OD值，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，計(jì)算CXCL16濃度值。

1.5 資料收集

記錄患者血常規(guī)、尿常規(guī)、CRP、ESR、抗ds-DNA抗體、ANA滴度、補(bǔ)體C3、補(bǔ)體C4、24小時(shí)尿蛋白定量等實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)由我院檢驗(yàn)科協(xié)助完成，異常判定均參考同期該檢查的正常值。同時(shí)收集整理患者其他臨床資料，并計(jì)算患者SLEDA2評(píng)分。

1.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 血清CXCL16的表達(dá)

結(jié)果顯示SLE患者血清中CXCL16水平（2.41± 0.99 μg/L）高于正常對(duì)照組（1.37±0.30 μg/L），差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（t=4.73，P＜0.000 1，圖1）

圖1 SLE患者與對(duì)照組血清CXCL16表達(dá)Fig.1 Expression of serum CXCL16 in SLE and normal control group

2.2 不同臨床特征SLE患者血清中CXCL16水平表達(dá)

面部皮損組SLE患者血清中CXCL16水平較無(wú)皮損SLE患者組高、腎臟損傷組血清中SLE水平高于無(wú)腎損傷組，且差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.04）；伴有關(guān)節(jié)腫痛癥狀SLE患者血清中CXCL16水平低于無(wú)關(guān)節(jié)腫痛患者、伴雷諾現(xiàn)象患者血清中CXCL16水平低于無(wú)雷諾現(xiàn)象患者，但差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.04），見(jiàn)表1。

2.3 SLE患者血清CXCL16與臨床指標(biāo)相關(guān)性分析

SLE患者血清中CXCL16水平與ESR（r=0.177，P=0.333）、CRP（r=-0.09，P=0.78）、抗ds-DNA滴度（r=-0.11，P=0.47）、ANA滴度（r=0.030，P=0.321）、IgG（r=0.03，P=0.87）、IgM（r=-0.02，P=0.89）、IgA（r=0.26，P=0.14）、C3（r=-0.189，P=0.346）、C4（r=-0.19，P=0.34）、24 h尿蛋白定量（r=-0.01，P= 0.94）均無(wú)相關(guān)性（均P＞0.04）。

2.4 SLE患者病情活動(dòng)程度與血清中CXCL16水平相關(guān)性

采用2000年SLE疾病活動(dòng)度評(píng)分（SLE disease activity index，SLEDAI）［4］對(duì)SLE患者病情活動(dòng)評(píng)分。

參考SLEDAI將SLE患者分為基本無(wú)活動(dòng)（SLEDAI=0～4）、輕度活動(dòng)（SLEDAI=4～9）、中度活動(dòng)（SLEDAI=10～14）、重度活動(dòng)（SLEDAI≥14）4組，進(jìn)行方差分析，比較濃度差異?？傮w比較4組患者血清中CXCL16水平有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（F=3.64P=0.023）（圖2）。

將SLE患者按SLEDAI≥10分為相對(duì)活動(dòng)組（22例），SLEDAI＜10分為相對(duì)緩解組（13例）。相對(duì)活動(dòng)組血清CXCL16水平較相對(duì)緩解組高，濃度分別為（2.73±1.12 μg/L）及（1.90±0.43 μg/L），且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.017）。

表1 血清CXCL16表達(dá)與SLE臨床特征的關(guān)系Tab.1 Correlation between the expression of serum CXCL16 and clinical manifestation of SLE

圖2 CXCL16表達(dá)與SLEDAI關(guān)系Fig.2 Correlation between the expression of CXCL16 and SLEDAI

2.5 SLE患者治療前后血清CXCL16水平比較

12例SLE初治患者應(yīng)用糖皮質(zhì)激素及免疫抑制劑治療（其中2例患者僅接受糖皮質(zhì)激素，7例患者接受糖皮質(zhì)激素聯(lián)合環(huán)磷酰胺，余3例患者接受糖皮質(zhì)激素聯(lián)合霉酚酸酯治療），檢測(cè)患者應(yīng)用藥物前及治療2月后血清CXCL16水平，并對(duì)該患者重新進(jìn)行SLEDAI評(píng)分；治療后SLE患者血清CXCL16水平（1.91±0.43 μg/L）較治療前（2.43±1.04 μg/L）明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.023）；且治療后SLE患者SLEDAI評(píng)分（9.42±3.68）相比治療前（14.74±6.31）亦明顯減低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P= 0.021），見(jiàn)圖3。

3 討論

人CXCL16是由Matloubian于2000年首次報(bào)道［4］，由入侵部位的防御性免疫細(xì)胞產(chǎn)生的CXC家族趨化因子，CXCR6為CXCL16目前發(fā)現(xiàn)的唯一受體。TM-CXCL16在單核-巨噬細(xì)胞及樹(shù)突細(xì)胞呈現(xiàn)高表達(dá)，炎性環(huán)境下，經(jīng)去整合素樣金屬蛋白酶10（A disintegrin and metalloprotease 10，ADAM-10）及ADAM-17水解后，TM-CXCL16趨化功能區(qū)從細(xì)胞表面脫落，形成S-CXCL16［6］，募集炎性細(xì)胞聚集、黏附、穿過(guò)內(nèi)皮細(xì)胞到達(dá)靶位點(diǎn)，激活單核-巨噬細(xì)胞產(chǎn)生大量免疫調(diào)節(jié)因子，誘導(dǎo)肝細(xì)胞產(chǎn)生大量急性反應(yīng)蛋白。炎性條件下TM-CXCL16表達(dá)亦增強(qiáng)，將募集到的炎性細(xì)胞固定于炎性反應(yīng)部位，加速炎癥進(jìn)展。本研究中SLE患者外周血清CXCL16表達(dá)水平升高，可能與CXCL16通過(guò)上述途徑誘導(dǎo)并促進(jìn)了炎癥進(jìn)展有關(guān)。

皮膚黏膜損害在SLE中發(fā)生率較高且表現(xiàn)多樣，本研究顯示伴有面部皮損SLE患者外周血清CXCL16表達(dá)水平增加。皮膚盤(pán)狀紅斑目前被認(rèn)為是一種由Th1主導(dǎo)的疾病，Scholz［7］研究發(fā)現(xiàn)CXCL16可在人類及小鼠正常皮膚角質(zhì)形成細(xì)胞表面表達(dá)，IFN-γ，TNF-α等細(xì)胞因子可誘導(dǎo)角質(zhì)形成細(xì)胞表達(dá)CXCL16及CXCR6增加；S-CXCL16與表達(dá)CXCR6細(xì)胞特異性結(jié)合，促進(jìn)Th1細(xì)胞浸潤(rùn)，提示可能在皮膚盤(pán)狀紅斑發(fā)病中發(fā)揮作用。本實(shí)驗(yàn)中腎臟損傷組SLE患者血清CXCL16表達(dá)亦有增加，可能與TM-CXCL16可在腎小球血管內(nèi)皮細(xì)胞、腎足突細(xì)胞表達(dá)，腎小球浸潤(rùn)的炎性細(xì)胞對(duì)S-CXCL16產(chǎn)生強(qiáng)烈應(yīng)答［8］有關(guān)。然而本研究中未發(fā)現(xiàn)CXCL16表達(dá)水平與患者尿蛋白定量有相關(guān)性，SLE患者腎臟損傷機(jī)制復(fù)雜，CXCL16可能與多種致病因子共同參與腎臟炎性損傷及病理改變。

圖3 治療前后CXCL16及SLEDAI變化Fig.3 Changes of CXC16 expression and SLEDAI before and after treatment

Th1/Th2失衡被認(rèn)為參與SLE發(fā)病機(jī)制：Th1促進(jìn)炎癥發(fā)生，Th2對(duì)Th1作用逆向調(diào)控，抑制炎癥進(jìn)展，SLE病情活動(dòng)度也與Th1/Th2比率有關(guān)。CXCR6主要在Th1細(xì)胞中表達(dá)，Th2細(xì)胞表達(dá)量很少［9］，CXCL16僅對(duì)高表達(dá)CXCR6的細(xì)胞產(chǎn)生趨化作用。本試驗(yàn)中按SLEDAI評(píng)分比較SLE患者血清CXCL16表達(dá)，結(jié)果顯示隨病情活動(dòng)程度增高，血清CXCL16表達(dá)水平變化趨勢(shì)相同；按SLEDAI=10分為水準(zhǔn)將患者分為相對(duì)活動(dòng)組及相對(duì)緩解組，相對(duì)活動(dòng)組血清CXCL16水平明顯高于相對(duì)緩解組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.017）。SLE患者經(jīng)有效治療隨SLEDAI評(píng)分降低，外周血清CXCL16表達(dá)亦有減少，推測(cè)CXCL16可在一定程度上反應(yīng)SLE病情活動(dòng)程度，但靈敏程度有待進(jìn)一步探究。實(shí)驗(yàn)中亦未發(fā)現(xiàn)血清CXCL16表達(dá)水平與CRP、ESR、補(bǔ)體C3/C4、ANA滴度、抗ds-DNA抗體滴度等病情活動(dòng)相關(guān)的實(shí)驗(yàn)室指標(biāo)具有相關(guān)關(guān)系，可進(jìn)一步驗(yàn)證血清CXCL16反映SLE病情活動(dòng)程度有限。但血清CXCL16水平變化是否可作為判斷SLE治療效果的參考指標(biāo)之一，由于本實(shí)驗(yàn)存在病例數(shù)較少，統(tǒng)計(jì)學(xué)意義有限，有待擴(kuò)大樣本數(shù)量行進(jìn)一步研究。

綜上所述：CXCL16參與SLE的發(fā)病過(guò)程，與SLE皮膚黏膜損害、腎臟損傷可能相關(guān)，外周血清CXCL16表達(dá)水平在一定程度上反映疾病活動(dòng)，但能否作為疾病活動(dòng)程度、治療效果的參考檢測(cè)指標(biāo)有待進(jìn)一步探究。

［1］Riedel JH，Paust HJ，Turner JE，et al.Immature renal dendritic cells recruit regulatory CXCR6+invariant natural killer T cells to attenuate crescentic GN［J］.J Am Soc Nephrol，2012，23（12）：1987-2000.

［2］Day C，Patel R，CuiIlen C，et al.The chemokine CXCLl6 is highly and constitutively expressed by human bronchial epithelial［J］.Exp Lung Res，2009，34（4）：272-283.

［3］Oliver H，Thomas E，Nicholas JS，et al.SR-PSOX at sites predisposed to atherosclerotic lesion formation mediates monocyte-endothelial cell adhesion［J］.Atherosclerosis，2011，217（2）：371-378.

［4］Gladman DD，Iba?ez D，Urowitz MB.Systemic lupus erythematosus disease activity index 2000［J］.J Rheumatol，2002，29（2）：288-291.

［5］Matloubian M，David A，Engel S，et al.A transmembrane CXC chemokine is a ligand for HIV-coreceptor Bonzo［J］.Nat Immunol，2000，1（4）：98-304.

［6］Paul G，Anja S，Nina S，et al.Tumoural CXCL16 expression is a novel prognostic marker of longer survival times in renal cell cancer patients［J］.Eur J Cancer，2009，44（3）：478-489.

［7］Scholz F，Schulte A，Adamski F，et al.Constitutive expression and regulated release of the transmembrane chemokine CXCL16 in human and murine skin［J］.J Invest Dermatol，2007，127（6）：1444-1444.

［8］Gabriela E，Garcia，Luan D，et al.Inhibition of CXCL16 attenuates inflammatory and progressive phases of anti-glomerular basement membrane antibody-associated glomerulonephritis［J］.Am J Pathol，2007，170（4）：1484-1496.

［9］Peeters MA，Chizzolini C.Cardiovascular risk in autoimmune and inflammatory disorders［J］.Rev Med Suisse，2011，7（291）：867-871.

（編輯 裘孝琦）

The Expression and ClinicalSignificanceofCXCL16 in Serum from Patientswith Systemic Lupus Erythematosus

QINMu-ting，WANGXiao-fei
（DepartmentofRheumatology and Immunology，Shengjing Hospital，China MedicalUniversity，Shenyang 110004，China）

ObjectiveTo investigate the levels and clinicalsignificance ofserum CXCL16 in patients with systemic lupus erythematosus.MethodsThe expression ofserum CXCL16 was measured by ELISA method in 34 patients with SLE（47 serum samples）and 14 normalcontrols.The correlation ofserum levels ofCXCL16 with clinicalactive index was analyzed.ResultsThe serum levelofCXCL16 in patients with SLEwashigherthan the normal controls（P＜0.04）.In addition，higher serum CXCL16 level was found in patients with cutaneous manifestations compared to others（P＜0.04）.Serum CXCL16 level in SLE patients with kidney damage was higher than these non-kidney damage ones（P＜0.04）.Serum CXCL16 levelin relatively active group（SLEDAI≥10）was higherthan these relatively release ones（SLEDAI＜10）（P＜0.04）.Both SLEDAIand the serum level of CXCL16 decreased after conventional treatment in 12 SLE patients（P＜0.04）.ConclusionThe SLE patients has high expression of CXCL16 in serum.CXCL16 may be involved in the process of pathogenesis of epithelial inflammation and renal damage.Variation of serum CXCL16 levelin SLE patientshasa certain reference value in monitoring therapeutic effects.

lupus erythematosus；systemic；chemokine；CXCL16

R493.24

A

0248-4646（2014）04-0300-04

遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃（2011224014）；沈陽(yáng)市科學(xué)技術(shù)計(jì)劃（F12-277-1-84）

秦沐婷（1989-），女，碩士研究生.

王曉非，E-mail：wangxf@sj-hospital.org

2014-02-19

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