汪穎厚，陳安杰，王斌，楊棟，辛世杰，蔡相軍

（1.中國人民解放軍第202醫(yī)院普通外科，沈陽110812；2.中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院血管甲狀腺外科，沈陽110001）

RHOA/ROCK-2信號通路在甲狀腺髓樣癌中的表達及意義

汪穎厚1，陳安杰1，王斌1，楊棟2，辛世杰2，蔡相軍1

（1.中國人民解放軍第202醫(yī)院普通外科，沈陽110812；2.中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院血管甲狀腺外科，沈陽110001）

Expression of RHOA/ROCK-2 Signaling Pathway in Medullary Thyroid Carcinoma and Its ClinicalSignificance

采用免疫組織化學染色方法檢測RHOA、ROCK-2蛋白在甲狀腺髓樣癌（MTC）組織及癌旁組織中的表達情況。結(jié)果顯示：MTC中RHOA、ROCK-2蛋白表達水平較癌旁甲狀腺組織中明顯增高，二者的表達與患者的性別、年齡及TNM分期無關(guān)，而ROCK-2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。RHOA、ROCK-2的表達可能對MTC的發(fā)生和發(fā)展有重要作用。

甲狀腺髓樣癌；RHOA；ROCK-2；轉(zhuǎn)移；免疫組織化學

甲狀腺髓樣癌（medullary thyroid carcinoma，MTC）是甲狀腺癌中比較少見的類型，約占所有甲狀腺惡性腫瘤的4%～10%［1］，屬中度惡性甲狀腺癌。MTC具有多灶性的特點，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移出現(xiàn)較早，且有遺傳傾向，預后一般［2］。近年來甲狀腺癌發(fā)病率迅速增加，MTC的發(fā)病率也隨之升高［3］，但導致其發(fā)生發(fā)展的具體機制目前尚未明確。研究表明，RET和RAS原癌基因突變可導致甲狀腺濾泡旁C細胞內(nèi)外區(qū)蛋白構(gòu)象的改變，誘導細胞增生過度而發(fā)生惡變，引發(fā)MTC［4］。而細胞的惡性增殖與多種信號通路的異常激活密切相關(guān)。RHOA/ROCK-2信號通路受多種上游因子的調(diào)控，通過調(diào)節(jié)其下游NFκB的轉(zhuǎn)錄活性，在眾多生理及病理過程中發(fā)揮作用，尤其在細胞的增殖、骨架重排、遷移和代謝以及血管重塑等方面起著關(guān)鍵作用［4，6］。實驗證明，RHOA、ROCK-2蛋白在多種惡性腫瘤中存在過表達，并在其發(fā)生、發(fā)展及侵襲過程中起重要作用［7］。然而，RHOA/ROCK-2在MTC中的表達及作用目前鮮有報道。本研究擬檢測RHOA、ROCK-2蛋白在MTC中的表達水平，旨在探討RHOA/ROCK-2信號通路是否與MTC的發(fā)生、發(fā)展存在相關(guān)性。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 標本來源及一般資料：收集中國人民解放軍第202醫(yī)院及中國醫(yī)科大學附屬第一醫(yī)院2008年至2012年術(shù)后病理確診為MTC的石蠟樣本30例，包括癌組織及癌旁組織。30例石蠟樣本中，男14例，女14例；年齡24～74歲，中位年齡47歲。依據(jù)2013年NCCN標準臨床分期：Ⅰ期7例，Ⅱ期6例，Ⅲ期6例，Ⅳ期11例。有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者17例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移者13例。

1.1.2 主要試劑：RHOA、ROCK-2多克隆抗體（Santa Cruz公司，美國）均為大鼠抗人抗體，兔抗大鼠二抗（北京中杉金橋公司）；SP法免疫組織化學試劑盒、DAB顯色液（福州邁新公司）。

1.2 方法

組織形態(tài)學檢查：取標本中段做4 μm切片，行HE染色及免疫組織化學染色（RHOA抗體稀釋比例為1∶100，ROCK-2抗體稀釋比例為1∶400）。奧林巴斯AX70U、BX61+DP71成像系統(tǒng)采集圖像，在高倍鏡下隨機計數(shù)4個視野，以細胞質(zhì)呈棕黃色為陽性，計算陽性細胞率，以無陽性細胞或陽性細胞＜10%為陰性（-），陽性細胞≥10%為陽性（+）。

1.3 統(tǒng)計學分析

2 結(jié)果

2.1 組織學檢查結(jié)果

30例MTC及癌旁組織中，RHOA在MTC組織中呈陽性表達27例，陽性表達率90.00%（27/30），ROCK-2在MTC組織中呈陽性表達24例，陽性表達率83.33%（24/30）；癌旁甲狀腺組織中無RHOA陽性表達，陽性表達率為0（0/30），癌旁甲狀腺組織中ROCK-2陽性表達1例，陽性表達率3.33%（1/30）（圖1）。RHOA、ROCK-2在MTC組織中的表達顯著高于癌旁組織（P＜0.01），差異有統(tǒng)計學意義（表1）。

2.2 RHOA、ROCK-2的表達與MTC臨床病理特征的關(guān)系

如表2所示：RHOA、ROCK-2的表達均與患者的性別、年齡及TNM分期無關(guān)，而ROCK-2與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.04）。

3 討論

甲狀腺癌是最常見的內(nèi)分泌惡性腫瘤，而MTC較少見，其惡性程度明顯高于甲狀腺乳頭狀腺癌（papillary thyroidcarcinoma，PTC）和甲狀腺濾泡狀腺癌（follicular thyroid carcinoma，F(xiàn)TC）［8］。文獻報道，MTC的10年生存率約為80%，而PTC和FTC的10年生存率分別為92%和90%［2］。目前公認的MTC主要發(fā)病原因是由RET基因突變引起，大量研究已確認RET基因突變是MTC發(fā)病的主要分子病因?qū)W基礎(chǔ)［4］，約94%的遺傳性MTC和70%的散發(fā)性MTC是由RET基因突變引起。但MTC是否還有其他發(fā)病機制，目前尚無定論。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與組織細胞內(nèi)的基因變化關(guān)系密切，某個或多個基因的缺失或激活都可能造成細胞的惡性增殖。RHOA/ROCK-2信號通路受多種上游因子調(diào)控，也可以影響多個下游因子，目前已知該通路與Wnt及Notch等多個經(jīng)典信號通路存在著極為緊密的關(guān)系［9，10］，而國內(nèi)外已有文獻報道Wnt信號通路與甲狀腺惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)［11，12］。RHOA/ROCK-2信號通路一旦被激活，將會影響其下游多種因子，如轉(zhuǎn)錄因子NFκB、基質(zhì)金屬蛋白酶（matrixmetallo proteinase，MMP）、金屬蛋白酶組織抑制因子（tissue inhibitor of metallo proteinase，TIMP）等，從而參與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展及浸潤和轉(zhuǎn)移［13］。

圖1 癌旁組織及MTC HE染色及RHOA、ROCK-2免疫組織化學結(jié)果×200

表1 RHOA、ROCK-2在MTC及癌旁組織中的組織學檢查結(jié)果分析

表2 RHOA/ROCK-2信號通路與PTC臨床病理特征的關(guān)系

目前為止，RHOA/ROCK-2信號通路與MTC發(fā)生、發(fā)展的相關(guān)研究甚少。本研究采用免疫組織化學技術(shù)檢測了MTC中RHOA、ROCK-2蛋白的表達情況，并根據(jù)免疫組織化學結(jié)果評估RHOA、ROCK-2與MTC患者的年齡、性別、腫瘤分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)性。免疫組織化學檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn)：30例MTC及癌旁組織中，MTC中RHOA陽性27例（90.00%），ROCK-2陽性24例（83.33%），癌旁甲狀腺組織中RHOA陽性0例（0），癌旁甲狀腺組織中ROCK-2陽性1例（3.33%），RHOA、ROCK-2在MTC中的表達明顯高于癌旁組織。統(tǒng)計學結(jié)果顯示：RHOA、ROCK-2的表達均與患者的性別、年齡及TNM分期無關(guān)，而ROCK-2的表達與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。

本研究結(jié)果證明RHOA、ROCK-2在MTC中表達水平明顯升高，且MTC患者ROCK-2的高表達與腫瘤淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)。盡管這些結(jié)果不能直接證明RHOA/ROCK-2信號通路與MTC的發(fā)生、發(fā)展存在著必然的聯(lián)系，但結(jié)合國外及其他領(lǐng)域的相關(guān)研究結(jié)果［14］，RHOA、ROCK-2極有可能與MTC乃至所有甲狀腺腫瘤的發(fā)生和發(fā)展存在相關(guān)性。本研究例數(shù)相對較少，未檢測RET基因的變異情況，而且缺乏RHOA、ROCK-2基因水平的相關(guān)研究，今后我們會完善與之相關(guān)的基因水平實驗，并在細胞水平上繼續(xù)探尋RHOA/ROCK-2信號通路與MTC的增殖、遷移、侵襲等方面的相關(guān)性?？傊?，闡明RHOA/ROCK-2信號通路對MTC發(fā)生、發(fā)展的作用機制有著重要的醫(yī)學價值。

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（編輯 王又冬）

R736.1

A

0248-4646（2014）04-0364-03

汪穎厚（1986-），男，醫(yī)師，碩士.

王斌，E-mail：202wangbin@sina.com

2013-12-19

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