師 江 劉興勇

（1．云南省熱帶作物職業(yè)學(xué)院，云南 普洱 665000；2．云南省農(nóng)業(yè)科學(xué)院質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)與檢測(cè)技術(shù)研究所，云南 昆明 650223）

油茶（Camellia oleifera L．）在 中 國(guó) 品 種 繁 多，分 布 廣泛，資源豐富，其茶籽是食用油、飼料的主要來源，還是茶皂素、多糖及植物蛋白的原料。目前各地紛紛培育出各種優(yōu)良品種，但不同油茶品系在含油量、脂肪酸組成及含量上差異較大［1，2］，其它營(yíng)養(yǎng)成分累積時(shí)間也各不相同，給油茶的采摘帶來困難。籽仁榨油后的餅粕中還含有6%～10%的粗脂肪和較高含量的茶皂素［3，4］，而以往對(duì)油茶最佳采摘期的研究主要是以油脂及茶皂素作為評(píng)價(jià)指標(biāo)。羅凡等［5］對(duì)不同采摘時(shí)間的油茶茶油品質(zhì)分析得出最佳采摘時(shí)期為11月份至落果之前。王小藝等［2］在對(duì)生長(zhǎng)發(fā)育過程中油茶的研究中指出：9月上旬和10月上旬是油茶油脂形成的2個(gè)高峰期，并且油脂主要成分為不飽和脂肪酸，以油酸為主。油茶籽仁除了油脂和皂素外還含有茶籽多糖、蛋白、纖維素等營(yíng)養(yǎng)成分，具有較高的營(yíng)養(yǎng)、藥用價(jià)值，但對(duì)這些營(yíng)養(yǎng)成分在生長(zhǎng)階段的詳細(xì)變化需要結(jié)合特定的油茶品系才能更好的指導(dǎo)生產(chǎn)實(shí)踐，研究其生長(zhǎng)過程中各種物質(zhì)的累積對(duì)合理栽培管理、采摘及其科學(xué)合理開發(fā)應(yīng)用具有十分重要的意義。

云南德宏梁河縣是中國(guó)發(fā)展油茶產(chǎn)業(yè)較早的地方之一，距今已有100多年歷史，之前由于缺乏技術(shù)支持，未形成產(chǎn)業(yè)化，造成產(chǎn)值下降。梁河縣年均氣溫在18 ℃左右，降雨量1 000mm 以上，適宜多種經(jīng)濟(jì)林木的生長(zhǎng)［6］。在近年生物特色產(chǎn)業(yè)的建設(shè)中油茶種植規(guī)模不斷擴(kuò)大，為適應(yīng)新形勢(shì)的需求，本研究擬以梁河無性系普通油茶為研究對(duì)象，通過測(cè)定不同時(shí)間段油茶籽仁主要營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)含量，確定油茶的最佳采摘時(shí)間，為油茶的栽培管理提供一定理論依據(jù)。

1 材料與方法

1．1 材料與儀器

1．1．1 材料

油茶籽：產(chǎn)于云南德宏梁河縣，分別于7、8、9月的15日采集在相同栽培環(huán)境條件下的普通油茶，去殼得籽仁，樣品經(jīng)粉碎混合均勻后備用。

1．1．2 試驗(yàn)儀器

凱式定氮儀：K360型，瑞士Buchi公司；

電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱：YHG－9050A 型，上海姚氏儀器設(shè)備廠；

氨基酸自動(dòng)分析儀：L－8800型，日本日立公司；紫外分光光度計(jì)：UV－2401PC型，日本島津公司；電子天平：AL－104型，瑞士梅特勒－托利多集團(tuán)。

1．2 試驗(yàn)方法

1．2．1 常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的檢測(cè)方法

（1）水分和干物質(zhì)的檢測(cè)：參照GB／T 5009．3－2003，采用105 ℃恒重法；

（2）蛋白質(zhì)的檢測(cè)：參照GB／T 5009．5－2010，采用凱氏定氮法測(cè)定；

（3）粗纖維檢測(cè)：參照GB／T 6434－2006，采用過濾法；

（4）粗脂肪檢測(cè)：參照GB／T 5009．6－2003，采用索氏提取法測(cè)定。

1．2．2 水解氨基酸檢測(cè) 參照GB／T 5009．124－2003，樣品處理完成后用日立L－8800氨基酸自動(dòng)檢測(cè)儀測(cè)定樣品中氨基酸含量。色譜條件：標(biāo)準(zhǔn)分析柱4．6mm×60．0mm，反應(yīng) 柱 溫 度57．0 ℃，反 應(yīng) 器 溫 度136．0 ℃，緩 沖 液 流 速0．4mL／min，茚 三 酮 溶 液 流 速0．350 mL／min，自 動(dòng) 進(jìn) 樣20μL。

1．2．3 油茶皂素提取 參照文獻(xiàn)［7］、［8］，準(zhǔn)確稱取油茶籽仁5．000 0g，添加80%的乙醇溶液25 mL，于67 ℃水浴提取3次，每次3h，合并濾液至100mL容量瓶并定容備用。

茶皂素標(biāo)準(zhǔn)曲線的制作：稱取茶皂素標(biāo)準(zhǔn)品0．005 0g于50mL容量瓶中，加去離子水溶解并定容至刻度，得到含量0．1mg／mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。分別準(zhǔn)確量取0，0．1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6 mL 標(biāo) 準(zhǔn) 溶 液 于25 mL 具 塞 試 管 中，加 入0．5mL蒸餾水后，準(zhǔn)確加入8%香草醛溶液0．5mL，冷卻后加入77%硫酸4．0mL搖勻，混合物于60 ℃加熱15min，取出置于室溫冷卻，以試劑空白為參比于550nm 下測(cè)吸光度。液體樣品中茶皂素含量測(cè)定參照濃硫酸－香草醛顯色法［8］。量取1mL提取液于潔凈的試管中，按標(biāo)準(zhǔn)曲線步驟測(cè)定樣品中茶皂素吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上查得相應(yīng)茶皂素濃度。樣品中茶皂素含量按式（1）計(jì)算。

式中：

W—— 餅粕茶皂素含量，mg／mL；

m—— 油茶籽仁質(zhì)量，g；

V—— 提取液體積，mL；

25—— 稀釋倍數(shù)；

C—— 由回歸方程得提取液茶皂素濃度，mg／mL。

1．3 數(shù)據(jù)處理及分析方法

1．3．1 氨基酸含量的測(cè)定 以峰面積測(cè)定結(jié)果，外標(biāo)法定量。

1．3．2 營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià) 參照文獻(xiàn)［9］，根據(jù)氨基酸分析結(jié)果，用氨基酸比值系數(shù)法評(píng)價(jià)油茶籽仁氨基酸營(yíng)養(yǎng)價(jià)值。計(jì)算樣品EAA 的氨基酸比值（ratio of amino acid，RAA），氨基酸比值系 數(shù)（ratiocoefficient of amino acid，RC）和 比 值 系 數(shù) 分（score of RC，SRC），分別按式（2）～（6）計(jì)算。

式中：

RAA—— 樣品中某種必需氨基酸含量與標(biāo)準(zhǔn)氨基酸模式中對(duì)應(yīng)必需氨基酸比值；

EAAi—— 樣品中某種必需氨基酸含量，i 表示樣品中各必需氨基酸；

EAAj—— 標(biāo)準(zhǔn)氨基酸模式中某種必需氨基酸含量，j表示標(biāo)準(zhǔn)模式中對(duì)應(yīng)各必需氨基酸；

RAA—— 樣品中RAA 平均數(shù)；

RC—— 樣品中某種必需氨基酸的氨基酸比值系數(shù)；

SRC——RC 的標(biāo)準(zhǔn)差；

RC——RC 的平均數(shù)；

SRC—— 氨基酸比值系數(shù)分。

1．3．3 試驗(yàn)數(shù)據(jù) 采用SPSS17．0統(tǒng)計(jì)軟件中描述性分析和方差分析程序進(jìn)行處理。

2 結(jié)果與分析

2．1 油茶籽仁常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分的變化

由表1可知，不同月份采摘的油茶籽仁營(yíng)養(yǎng)成分含量差異很大。7月中旬采摘的油茶籽仁水分、蛋白質(zhì)、粗纖維含量最高，與8、9月中旬差異顯著（P＜0．05）。8、9月中旬采摘的除粗脂肪含量差異顯著外其余均不顯著（P＞0．05），與7月采摘的相比，干物質(zhì)、脂肪含量較高，水分、粗纖維和蛋白質(zhì)含量低。綜合以上指標(biāo)，在7月下旬至8月上旬是油茶主要成分變化的主要階段，油茶脂肪累積也集中在這一時(shí)段，雖然在7月份其蛋白含量高，但相差并不太大，而脂肪含量差異顯著，因此，普通油茶采摘應(yīng)在8月下旬至9月份進(jìn)行。

2．2 油茶籽仁氨基酸的變化及營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)

由表2可知，除色氨酸（Trp）因水解破壞沒有測(cè)定外油茶蛋白質(zhì)中共測(cè)定出17種氨基酸，種類較齊全。從氨基酸含量看，油茶采摘的后兩個(gè)月氨基酸總量相近，比7月采摘的低，變幅為0．65。不同采摘時(shí)間中，含量較低的為Cys和Met，其次為Pro，均在0．1%左右，其中9月份采摘的油茶籽仁Pro未檢出。含量較高的氨基酸為Glu，在1．5%左右，其次為Asp、Leu、Lys，在0．5%左右。從必需氨基酸看，7種人體必需氨基酸含量大概為0．1%～0．5%，最高的為L(zhǎng)ys。必需氨基酸與總氨基酸的比值（EAA／TAA）均在30%以上，以非必需氨基酸（NEAA）的比值8月份最高，在50%以上?？傮w來看，普通油茶籽仁中氨基酸總量和必須氨基酸量隨著采摘時(shí)間的推遲有降低的趨勢(shì)，EAA／TAA 值變化不大，EAA／NEAA 呈現(xiàn)先升后降趨勢(shì)。從單個(gè)氨基酸來看，隨著采摘時(shí)間的推遲，Glu、Ala、Cys含量呈增加趨勢(shì)，而Asp、Thr、Ser、Val、Met、Ile、Tyr、Phe、Lys、His、Arg、Pro呈降低趨勢(shì)，Gly、Leu基本保持平穩(wěn)。

表1 不同采摘時(shí)間油茶籽仁常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分比較Table1 Nutritional comparison between different pick time of Camellia oil－tea Seeds ／%

表2 不同采摘時(shí)間油茶籽仁氨基酸含量及比值Table2 Amino acids content and ratio between different pick time of Camellia oil－tea Seeds ／%

不管作為食物資源還是飼料配方，蛋白質(zhì)中必需氨基酸含量及所占比例是決定其營(yíng)養(yǎng)及食用價(jià)值的重要因素。為確定油茶的最佳采摘時(shí)間，參照氨基酸比值系數(shù)法對(duì)其蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值進(jìn)行評(píng)價(jià)，不同采摘時(shí)間油茶籽仁中氨基酸評(píng)分見表3。不同采摘時(shí)間油茶籽仁必需氨基酸與標(biāo)準(zhǔn)蛋白模式比較，Met和Cys的RC值在0．5左右，為油茶籽仁中第一限制性氨基酸，其余必需氨基酸RC 值均接近或者大于1。由于限制性氨基酸含量較低，使得油茶籽仁中必需氨基酸比例不協(xié)調(diào)，嚴(yán)重限制了其它氨基酸的利用，致使最終SRC 分值不理想。9月份采摘的油茶，籽仁中限制性氨基酸Cys含量升高，使得最終評(píng)分最高（75），相對(duì)來說其營(yíng)養(yǎng)價(jià)值最高。SRC值越接近100則表示營(yíng)養(yǎng)價(jià)值越高，因此，從蛋白質(zhì)的氨基酸營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)角度來看普通油茶采摘應(yīng)在8月下旬至9月上旬期間進(jìn)行。

2．3 油茶籽仁皂素的變化

茶皂素的標(biāo)準(zhǔn)曲線見圖1，以吸光度為縱坐標(biāo)，茶皂素濃度為橫坐標(biāo)，得出回歸方程為Y ＝1．308 6 X＋0．037 5，相關(guān)系數(shù)R2為0．997 8。 不同采摘月份油茶樣品中茶皂素含量見圖2，由圖2可知，油茶中皂素含量隨著成熟時(shí)間的增加而增加，7月中旬采摘含量最低，為7．61%，與8月8．69%、9月8．78%含量差異顯著（P＜0．05）?？梢姴柙硭卦?月下旬至8月上旬是累積的高峰期，從茶皂素含量來看普通油茶采摘也應(yīng)在8月下旬至9月份進(jìn)行。

3 結(jié)論

本研究以云南普通油茶籽仁為研究對(duì)象，結(jié)合其主要應(yīng)用價(jià)值，對(duì)其成熟階段的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)累積變化情況進(jìn)行檢測(cè)，結(jié)果如下：

（1）常規(guī)營(yíng)養(yǎng)成分隨著油茶籽仁的逐漸成熟，干物質(zhì)、粗脂肪和茶皂素含量增加，而水分、蛋白質(zhì)、氨基酸、粗纖維呈降低趨勢(shì)。

（2）油茶籽仁限制性氨基酸為Met＋Cys，隨著采摘時(shí)間的延遲，限制性氨基酸含量略微增加，氨基酸評(píng)分增加。

表3 不同采摘時(shí)間氨基酸營(yíng)養(yǎng)評(píng)價(jià)比較Table3 Comparison of the RAA，RC and SRC between different pick time

圖1 茶皂素標(biāo)準(zhǔn)曲線Figure1 Tea saponin concentrations

圖2 茶皂素含量變化Figure2 Changes of tea saponin content

（3）綜合油茶不同采摘時(shí)間營(yíng)養(yǎng)成分含量及蛋白質(zhì)營(yíng)養(yǎng)價(jià)值評(píng)價(jià)，7月份與8、9月差異顯著（P＜0．05），采摘時(shí)間以8月中旬至9月上旬為宜。

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