尹冬華 譚明娟 周辰 潘曉東 趙慧娟

老年慢性心力衰竭患者輔助性T細(xì)胞17及白介素?17的檢測及臨床意義

尹冬華 譚明娟 周辰 潘曉東 趙慧娟

目的研究老年慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）患者外周血中輔助性T細(xì)胞17（Th17）的比例及白介素?17（IL?17）的變化及臨床意義。方法選擇老年CHF住院患者作為CHF組（n＝30），同時設(shè)置對照組（n＝30），利用流式細(xì)胞技術(shù)和ELISA法分別檢測2組患者外周血中Th17細(xì)胞比例和IL?17的水平。結(jié)果CHF組外周血中Th17／CD4＋T細(xì)胞比例顯著高于對照組［（3.83±1.04）%比（2.25±0.78）%，P＜0.05］；CHF組患者外周血中IL?17水平顯著高于對照組［（8.97±3.06）ng／L比（6.12±2.34）ng／L，P＜0.05］。結(jié)論老年CHF患者外周血中Th17細(xì)胞比例及IL?17水平升高，調(diào)節(jié)Th17細(xì)胞的治療可能為CHF治療提供新思路。

老年人；慢性心力衰竭；Th17細(xì)胞；白介素?17；流式細(xì)胞學(xué)

慢性心力衰竭（chronic heart failure，CHF）是常見的老年病之一，基本機制是心臟重構(gòu)。近年來心力衰竭與炎癥、免疫相互關(guān)系的研究，進一步深化了對心力衰竭發(fā)病機制的理解。輔助性T細(xì)胞17（Th17）在炎癥發(fā)生發(fā)展過程中的作用逐漸引起人們重視［1］，白介素?17（IL?17）是Th17細(xì)胞的主要效應(yīng)因子，具有較強的致炎作用。新近動物實驗發(fā)現(xiàn)［2?3］：IL?17通過OPG／RANK／RANKL和MMP／TIMP系統(tǒng)參與自身免疫性心臟疾病和非自身免疫性心臟疾病引起的心力衰竭心臟重構(gòu)病理過程，可能是各種心力衰竭心臟重構(gòu)的共同致病因子。因此，研究IL?17在心力衰竭中的意義可能為心力衰竭治療帶來新的啟示。目前國內(nèi)外關(guān)于Th17細(xì)胞在心血管疾病方面的研究較少，且僅有少量的關(guān)于＜65歲人群的臨床研究［4］。

本研究通過對老年CHF患者外周血Th17細(xì)胞及IL?17水平的檢測，探討Th17細(xì)胞及IL?17是否與CHF有關(guān)，為CHF的治療以及進一步的研究提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取江蘇省省級機關(guān)醫(yī)院干部保健科病房2009年1月至2013年8月慢性充血性心力衰竭住院患者30例，為CHF組，CHF的診斷標(biāo)準(zhǔn)參照慢性充血性心力衰竭診治指南，排除以下情況：（1）急、慢性感染；（2）肝腎功能嚴(yán)重?fù)p害；（3）急性冠脈綜合征；（4）風(fēng)濕性疾??；（5）甲狀腺功能亢進癥；（6）自身免疫性疾病；（7）惡性腫瘤。其中男28例，女2例，年齡65～95歲，平均（80.90±9.62）歲。同時設(shè)置對照組30例，其中，男27例，女3例，為江蘇省省機關(guān)醫(yī)院干部保健科體檢患者，年齡65～90歲，平均（78.12±8.74）歲，均無CHF。2組患者在年齡、糖化血紅蛋白、高密度脂蛋白、低密度脂蛋白、血肌酐、收縮壓、舒張壓等一般資料間差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），2組具有可比性。

1.2 實驗方法

1.2.1 標(biāo)本采集：入院第2天清晨從研究對象前臂周圍靜脈抽取空腹血標(biāo)本10 ml兩管，標(biāo)本置入肝素鈉抗凝管內(nèi)，離心后留取血清，置于－80℃冰箱保存。

1.2.2 觀察2組外周血中Th17／CD4＋T細(xì)胞比例：采用流式細(xì)胞術(shù)檢測外周血中Th17比例。（1）淋巴細(xì)胞的刺激培養(yǎng)：實驗前4～6 h加PMA（50μg／ml）、Ion?omyein（1μg／ml）、BFA（1μg／ml）；（2）收獲細(xì)胞，細(xì)胞膜表面染色：用FITC標(biāo)記的抗人CD4抗體2μl／樣本染色30 min（冰上孵育或4℃冰箱）；（3）3%FCS洗滌液洗滌，按細(xì)胞內(nèi)染色試劑盒說明書進行后續(xù)細(xì)胞內(nèi)染色；（4）固定透膜：固定透膜劑4℃孵育20min或過夜；（5）3%FCS洗滌液洗滌3次；（6）加PE標(biāo)記的抗人IL?17，4℃避光孵育30 min，洗滌后上機；（7）同時選用FITC?Mouse IgG1作為同型對照。檢測Th17細(xì)胞占外周血CD4＋細(xì)胞的比率。

1.2.3 采用ELISA法測定外周血中IL?17水平：具體實驗步驟按照試劑盒說明書操作，試劑盒購自上海邦亦商貿(mào)（biswamp）。

1.2.4 心功能檢測：采用GE公司的Vivid 7彩色超聲儀，探頭頻率為2.0～4.0 MHz。于左心長軸切面腱索水平取M型超聲測得左室射血分?jǐn)?shù)、短軸縮短率。1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 采用SPSS 16.0統(tǒng)計軟件包進行數(shù)據(jù)處理，數(shù)據(jù)均以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（s）表示，在方差齊性的基礎(chǔ)上，兩兩比較采用成組t檢驗。P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 CHF組患者與對照組心功能比較 CHF組左室射血分?jǐn)?shù)及短軸縮短率均低于對照組（P＜0.05），提示2組心臟收縮功能存在明顯差異。見表1。

表1 2組射血分?jǐn)?shù)和短軸縮短率比較（s，%，n＝30）

表1 2組射血分?jǐn)?shù)和短軸縮短率比較（s，%，n＝30）

注：與對照組比較，?P＜0.05

組別左室射血分?jǐn)?shù)短軸縮短率CHF組45.7±5.9?20.8±2.6?對照組62.5±7.1 35.1±3.6

2.2 2組患者外周血中IL?17水平及Th17／CD4＋細(xì)胞比例比較 CHF組患者外周血中IL?17水平較對照組高（P＜0.05）；流式細(xì)胞檢測中，CHF患者外周血中Thl7／CD4＋T細(xì)胞比例明顯高于對照組（P＜0.05）。見表2。

表2 2組Th17細(xì)胞比例及IL?17水平比較（s，n＝30）

表2 2組Th17細(xì)胞比例及IL?17水平比較（s，n＝30）

注：與對照組比較，?P＜0.05

組別Th17／CD4＋細(xì)胞比例（%）IL?17（ng／L）CHF組3.83±1.04?8.97±3.06?對照組2.25±0.78 6.12±2.34

3 討論

3.1 Th17細(xì)胞與IL?17 Th17細(xì)胞是新近發(fā)現(xiàn)的CD4＋細(xì)胞中新的成員，因為能夠分泌大量的IL?17而被命名為Th17細(xì)胞，IL?17是Th17主要效應(yīng)因子，不僅有較強的致炎作用，同時也可以調(diào)節(jié)炎癥反應(yīng)，可刺激內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞及成纖維細(xì)胞等釋放IL?6、IL?8、金屬蛋白酶?1、單核細(xì)胞化學(xué)趨化蛋白（MCP）?1和粒細(xì)胞集落刺激因子（G?CSF）等細(xì)胞因子［1，5?6］。體外研究發(fā)現(xiàn)，IL?17與TNF?α產(chǎn)生協(xié)同作用促進粒?巨噬細(xì)胞集落刺激因子（GM?csv）、IL?8、IL?6的作用，遠(yuǎn)大于各自的作用［7?9］。

3.2 CD4＋T細(xì)胞與CHF 大部分情況下，CHF是指心肌收縮力下降使心排出量不能滿足機體代謝需要，器官、組織灌流不足，同時出現(xiàn)體循環(huán)和（或）肺循環(huán)淤血表現(xiàn)，在快速老齡化的今天，CHF是很多老年心臟病患者死亡的重要原因。神經(jīng)體液機制、氧化應(yīng)激和心肌細(xì)胞凋亡在CHF發(fā)病機制中發(fā)揮不同的作用［11?13］。近年來關(guān)于心力衰竭與炎癥和免疫失調(diào)關(guān)系的研究，尤其是CD4＋T細(xì)胞、Th17細(xì)胞與CHF的關(guān)系日漸受到關(guān)注。有研究提示Th1／Th2平衡失調(diào)及Treg細(xì)胞功能異常促進了CHF的發(fā)生發(fā)展及惡化［7］。3.3 Th17細(xì)胞、IL?17在老年CHF患者外周血中的變化 本研究中我們觀察到，流式細(xì)胞儀檢測老年CHF患者外周血Th17／CD4＋比例以及ELISA法檢測IL?17水平均顯著高于對照組，推測由于Th17細(xì)胞比例的增加，通過釋放效應(yīng)因子IL?17調(diào)節(jié)致炎因子的水平，放大炎癥反應(yīng)，從而引起心肌細(xì)胞損害。至于Th17細(xì)胞比例以及IL?17是否與老年患者心功能惡化的程度相關(guān)有待我們進一步加大樣本量研究。關(guān)于Th17細(xì)胞比例以及IL?17水平在老年CHF發(fā)病中的具體機制有待于進一步研究。

本研究認(rèn)為Th17細(xì)胞及其分泌的IL?17可能在老年CHF發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要作用，對于CHF的發(fā)病機制是一個較好的補充，完善了關(guān)于Th1／Th2平衡失調(diào)在CHF發(fā)病中理論上的不足。通過對Th17細(xì)胞與老年CHF關(guān)系的深入研究，能夠為CHF的治療提供新的思路和策略。

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Significance of the detection of Th17 and IL?17 in the elderly patients with chronic heart failure．

YIN Dong?hua，TAN Ming?juan，ZHOU Chen，PAN Xiao?dong，ZHAO Hui?juan．Department of Cardre Health，Jiangsu Provincial Official Hospital，Nanjing 210046，China

ObjectiveTo study the significance of the detection of Th17 and IL?17 in the peripheral blood of the elderly patients with chronic heart failure（CHF）.M ethods30 hospitalized patients with CHF（80.90±9.62 years old）were selected as study group，and 30 patients（78.12±8.74 years old）without CHF were selected as control group.The number of Th17 cells and IL?17 levelwere detected by flow cytometermethod and ELISA.ResultsThe ratio of Thl7／CD4＋T in peripheral blood of patients with CHF were higher than that of normal controls［（3.83±1.04）%vs（2.25± 0.78）%，P＜0.05］.The IL?17 level in peripheral blood of patients with CHF was higher than that of normal controls［（8.97±3.06 ng／L）vs（6.12±2.34 ng／L），P＜0.05］.ConclusionsTh17 cell and IL?17 level in peripheral blood are increased in the elderly patientswith CHF.It can provide a theoretical and experimental basis for the clinical diagnosis and treatment of CHF.

aged；chronic heart failure；Th17 cell；interleukin?17；flow cytometermethod

R 541.6

A

10.3969／j.issn.1003?9198.2014.01.016

2013?06?13）

210024江蘇省南京市，江蘇省省級機關(guān)醫(yī)院干部保健科