李進(jìn)波盛婧李想潘良文呂蓉楊捷琳

（1.華東理工大學(xué)生物工程學(xué)院，上海 200237；2.上海出入境檢驗(yàn)檢疫局，上海 200135；3.上海市亭新中學(xué)，上海 201505）

五種DNA提取方法對(duì)魚加工制品DNA提取效果的比較

李進(jìn)波1，2盛婧3李想2潘良文2呂蓉2楊捷琳2

（1.華東理工大學(xué)生物工程學(xué)院，上海 200237；2.上海出入境檢驗(yàn)檢疫局，上海 200135；3.上海市亭新中學(xué)，上海 201505）

比較5種DNA提取方法對(duì)各種魚加工制品的DNA提取效果，為后續(xù)檢測(cè)提供更加有效的DNA提取方案。以11種不同加工方式和加工程度的魚制品為樣本，采用5種DNA提取方法——CTAB法以及4種常用市售試劑盒進(jìn)行DNA提取。對(duì)DNA的提取質(zhì)量、濃度和用于PCR擴(kuò)增的效果及方法的可操作性等方面進(jìn)行比較研究。結(jié)果顯示，5種方法均可用于大多數(shù)魚加工制品的DNA提取，但每種方法各有利弊。因此認(rèn)為沒(méi)有一種DNA提取試劑盒可以廣泛地對(duì)所有類型魚制品樣品均有非常好的提取效果。

魚加工制品 DNA提取 DNA純化 PCR

魚肉及其加工制品是人們佐餐的重要原料，作為日常消費(fèi)的主要副食品深受廣大消費(fèi)者喜愛。魚肉加工方式多樣，可冰鮮切片、油浸、煎炸、烘烤、腌漬、煙熏及醬燒等，而制成罐頭、魚子醬、魚片干、咸魚干、魚丸及魚松等食品，也制備成干粉、脫水干片等加入嬰兒食品、方便面及其他速食食品中。冰鮮、冷凍等魚加工制品在我國(guó)出口食品中占有主導(dǎo)地位，主要輸往日本、韓國(guó)、美國(guó)和歐洲等國(guó)家和地區(qū)，而每年我國(guó)從俄羅斯、美國(guó)、秘魯和日本等地進(jìn)口各種魚類等食用水產(chǎn)品100多萬(wàn)噸［1，2］。在食品制備過(guò)程中，很多加工程序又包括了多個(gè)處理步驟而使魚肉改變了原有的形態(tài)特征，因此從外觀上很難進(jìn)行區(qū)分和辨認(rèn)。許多國(guó)家的食品監(jiān)管部門在市場(chǎng)上發(fā)現(xiàn)魚類制品假冒替代、以次充好現(xiàn)象十分嚴(yán)重。僅美國(guó)在1998年-2007年間就有34%水產(chǎn)品亂貼標(biāo)簽、以次充好、以養(yǎng)殖冒充自然捕撈的現(xiàn)象。為此，2010年國(guó)家質(zhì)檢總局曾發(fā)布警示通報(bào)，要求加強(qiáng)標(biāo)簽檢驗(yàn)、感官查驗(yàn)和品種鑒別［3］。

而同樣，美國(guó)部分水產(chǎn)品進(jìn)口商從2012年5月起啟動(dòng)對(duì)部分水產(chǎn)品的DNA檢驗(yàn)程序，以確保產(chǎn)品如實(shí)申報(bào)，消除水產(chǎn)品以次充好、以養(yǎng)殖冒充自然捕撈的亂象［4］。

為此，在檢測(cè)方法建立初期，尋找適宜的DNA提取方案至關(guān)重要，是后續(xù)試驗(yàn)順利進(jìn)行的保障。魚肉制品在加工過(guò)程中很多都經(jīng)過(guò)長(zhǎng)時(shí)間高溫等操作，破壞了細(xì)胞的正常結(jié)構(gòu)，而使DNA鏈斷裂［5］，也使DNA鏈與蛋白質(zhì)之間產(chǎn)生交聯(lián)阻礙DNA提取或擴(kuò)增［6-8］；另外，加工過(guò)程中還經(jīng)常添加如脂類、酚類等大分子化合物以增加色香味，但這些物質(zhì)在DNA提取中是較難去除的抑制因子，而且化學(xué)處理也會(huì)使DNA鏈隨機(jī)斷裂而形成大小不一的片段。同時(shí)，加工過(guò)程中的酸性或堿性物質(zhì)也會(huì)使DNA鏈的氫鍵易于水解［9］。這些因素對(duì)DNA的提取和純化以及后續(xù)檢測(cè)影響很大。因此，本研究對(duì)現(xiàn)有的主要DNA提取方法和試劑盒進(jìn)行比較和評(píng)價(jià)，旨在為基于核酸的檢測(cè)方法建立提供必要的數(shù)據(jù)和樣品處理方案。

1 材料與方法

1.1 材料

采用11種不同加工方式的魚制品為材料，包括醬煮、油浸、與沙拉醬混合、魚子醬、煙熏、腌漬烘干、烤制、粉碎、烤制魚骨、魚松和冰鮮等，基本涵蓋了目前市售的主要加工方式魚制品（表1）。

表1 本研究采用的不同加工方式魚制品列表

1.2 方法

1.2.1 樣品處理和DNA提取 用無(wú)菌手術(shù)刀將試驗(yàn)材料切成小塊，先在液氮中將樣品迅速冷凍，后用冷凍研磨機(jī)（Spex 6850型，美國(guó)）研磨成均勻的粉末。按照試劑盒說(shuō)明書或方法要求稱取一定量的樣品，采用目前國(guó)內(nèi)外應(yīng)用較廣泛的Qiagen、Tiangen、Promega和TaKaRa公司生產(chǎn)的動(dòng)物組織相關(guān)DNA提取試劑盒以及傳統(tǒng)的CTAB法分別對(duì)11份樣品進(jìn)行DNA提取，每種試劑盒每個(gè)樣品設(shè)置3個(gè)平行重復(fù)，即取樣3管。同時(shí)設(shè)提取空白對(duì)照。

1.2.1.1 CTAB法 各樣品分別取100 mg于2 mL離心管中，加入500 μL 2.0% CTAB 緩沖液（2.0% CTAB，100 mmol/L Tris-HCl，pH8.0；20 mmol/L EDTA-Na，1.4 mol/L NaCl）和5 μL蛋白酶K（天根生化科技有限公司，Cat#RT403）溶液；65℃恒溫孵育30 min，15 000 ×g離心10 min；吸出上清，加入200 μL 氯仿，15 000 ×g離心10 min；吸出上清，加入2倍體積0.5% CTAB 緩沖液（0.5% CTAB，40 mmol/L NaCl，pH 8.0），靜置1 h；15 000 ×g離心5 min，棄上清；加入350 μL TE 緩沖液溶解DNA；加入10 μL RNaseA溶液（天根生化科技有限公司，Cat#RT405-02），37℃溫浴20 min；加入350 μL氯仿，15 000 ×g離心10 min；取出上清，加入0.7倍體積異丙醇，15 000 ×g離心10 min；棄上清，加入200 μL 70% 乙醇洗沉淀2次；吹干殘余乙醇，將DNA晾干；加入100 μL TE 緩沖液溶解DNA。

1.2.1.2 DNeasy Blood & Tissue Kit（Qiagen Cat.# 69504）（以下簡(jiǎn)稱Qiagen 試劑盒）分別稱取25 mg樣品，按照試劑盒說(shuō)明書提取DNA，最后在吸附柱中加入100 μL Buffer AE洗脫DNA。

1.2.1.3 海洋動(dòng)物組織基因組DNA提取試劑盒（Tiangen Cat. # DP324-03）（以下簡(jiǎn)稱Tiangen試劑盒）分別稱取30 mg樣品，按照試劑盒說(shuō)明書提取DNA，最后在吸附柱中加入100 μL TE洗脫液洗脫DNA。

1.2.1.4 Wizard? Genomic DNA Purification Kit（Promega Cat. #A1120）（以下簡(jiǎn)稱Promega試劑盒）分別稱取20 mg樣品，按照試劑盒說(shuō)明書提取DNA，最后加入100 μL DNA Rehydration Solution溶解DNA。

1.2.1.5 Universal Genomic DNA Extraction Kit（Takara Cat. #DV811A）（以下簡(jiǎn)稱TaKaRa試劑盒）分別稱取100 mg樣品，按照試劑盒說(shuō)明書提取DNA，最后向吸附柱中加入100 μL Elution Buffer洗脫DNA。

1.2.2 樣品DNA質(zhì)量和濃度測(cè)定 采用微量分光光度計(jì)（GE公司NanoPlus）分別測(cè)定DNA在230、260和280 nm的吸收值，以及A260/A280和A260/A230值，以評(píng)估提取的DNA中蛋白質(zhì)和鹽分等雜質(zhì)去除情況。同時(shí)，測(cè)定提取的DNA濃度。

1.2.3 PCR擴(kuò)增

1.2.3.1 DNA樣品稀釋 由于每種DNA提取方法的取樣量不同，為了在同一水平上比較和評(píng)價(jià)各提取方法，先對(duì)提取的DNA進(jìn)行稀釋。以取樣量最低的Promega試劑盒（20 mg樣品）為標(biāo)準(zhǔn)，采用0.1×TE緩沖液進(jìn)行稀釋，則CTAB法和TaKaRa試劑盒提取的DNA需要稀釋5倍，Qiagen試劑盒提取的DNA需要稀釋1.25倍，Tiangen試劑盒提取的DNA需要稀釋1.5倍。調(diào)整后樣品DNA濃度單位均為ng/μL·20 mg樣品。為了使DNA濃度適于PCR擴(kuò)增，將調(diào)整后的所有樣品DNA均稀釋10倍后再加入反應(yīng)液中。

1.2.3.2 引物 采用在魚類樣本中均存在的檢測(cè)線粒體上12S rRNA基因的引物（12S-F1 5'-TAAGAGGGCCGGTAAAACTC-3'和 12S-R2 5'-GTGGGGTATCTAATCCCAG-3'）［10］對(duì)提取的DNA進(jìn)行擴(kuò)增，片段大小為224 bp。引物由寶生物工程（大連）有限公司合成和純化。

1.2.3.3 PCR擴(kuò)增 采用25 μL體系進(jìn)行PCR擴(kuò)增，其中包括12.5 μL HSTaqMasteMix預(yù)混液（寶生物工程（大連）有限公司），400 nmol/L上下游引物，5 μL DNA模板（空白對(duì)照用ddH2O補(bǔ)齊）。反應(yīng)條件為：94℃，5 min；36個(gè)循環(huán)×（94℃，30 s；55℃，30 s；72℃，30 s）；72℃，5 min。

1.2.4 凝膠電泳檢測(cè) 配制0.8%瓊脂糖凝膠，吸取5 μL提取的樣品基因組DNA溶液混入上樣緩沖液后加入上樣孔，同時(shí)在一個(gè)孔中加入DL 10000分子量標(biāo)準(zhǔn)（寶生物工程（大連）有限公司）；配制2.0%瓊脂糖凝膠，在PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中混入上樣緩沖液后加入上樣孔，同時(shí)在一個(gè)孔中加入DL 2000分子量標(biāo)準(zhǔn)（寶生物工程（大連）有限公司）。調(diào)節(jié)電壓在120 V，電泳30 min后在凝膠成像分析系統(tǒng)拍照留存。

2 結(jié)果

對(duì)4種DNA提取試劑盒和CTAB方法在DNA提取和純化效果上的比較，包括對(duì)DNA完整性和純度的測(cè)定以及DNA用于PCR擴(kuò)增的穩(wěn)定性。

2.1 DNA完整性測(cè)定

在DNA提取后，首先將基因組DNA在0.8%瓊脂糖凝膠上電泳，但僅有5號(hào)煙熏三文魚和11號(hào)冰鮮三文魚樣品可見高分子量的基因組DNA條帶（＞10 kb），其余加工樣品在分子量標(biāo)準(zhǔn)250 bp條帶左右有彌散條帶（結(jié)果未在此呈現(xiàn)），表明DNA已在樣品加工過(guò)程中發(fā)生不同程度的降解。

2.2 DNA純度測(cè)定

采用紫外分光光度法測(cè)定提取的DNA雜質(zhì)去除情況，A260/A280比值用來(lái)衡量蛋白質(zhì)的去除情況，A260/A230比值用來(lái)衡量鹽分去除情況，結(jié)果如表2所示。不同樣品采用5種DNA提取方法的A260/A280比值有較大差異。相對(duì)而言，樣品的加工程度越低，獲得的DNA A260/A280比值越接近理想的1.8-2.0之間，如5號(hào)煙熏三文魚樣品和11號(hào)冰鮮三文魚樣品采用5種方法提取的DNA A260/A280比值差異不大。從每種DNA提取方法對(duì)所有樣品的提取效果來(lái)看，CTAB法和Tiangen 公司試劑盒在各加工樣品間DNA提取效果差異較大，A260/A280比值在1.7-4.7之間，多數(shù)樣品的該比值均大于2.0，有些甚至大于4.0（采用CTAB法提取的小黃魚咸魚干），表明可能存在大分子雜質(zhì)產(chǎn)生了光吸收，也可能存在未降解的RNA在260 nm處產(chǎn)生了較高吸收值。其他3種方法提取的各樣品DNA A260/A280比值基本在1.8-2.0附近，表明蛋白質(zhì)去除效果較好。

230 nm波長(zhǎng)是多肽、芳香基團(tuán)、苯酚和一些碳水化合物的吸光度，因此A260/A230的大小反映了DNA樣品中存在的碳水化合物、鹽類或有機(jī)溶劑等的污染情況。結(jié)果表明，A260/A230比值在各樣品之間差異明顯，仍然與樣品的加工方式和加工程度有關(guān)。相比較而言，采用Qiagen公司和TaKaRa公司試劑盒提取的5號(hào)和11號(hào)樣品A260/A230比值更接近理想的1.8-2.0，表明采用上述兩種方法提取加工程度較低的魚制品雜質(zhì)去除效果好。其余3種方法提取的5號(hào)和11號(hào)樣品A260/A230比值均＜1.0，表明雜質(zhì)殘留較多，可能的原因之一是三文魚中含有大量的油脂較難去除，與某些鹽離子產(chǎn)生吸附。從每

種DNA提取方法對(duì)所有樣品的總體提取效果來(lái)看，Qiagen公司和TaKaRa公司試劑盒A260/A230比值更接近1.8-2.0；而其余3種方法對(duì)所有樣品A260/A230比值均＜1.0，有些值還≤0.1，表明雜質(zhì)去除效果不佳。

表2 五種方法提取的DNA純度

2.3 DNA濃度測(cè)定

考慮到每種方法取樣量不同，將濃度均換算為每20 mg樣品所提取的DNA濃度，結(jié)果如表3所示。相比較而言，加工程度最低的5號(hào)和11號(hào)樣品采用各提取方法均得到該方法提取的最高DNA濃度，其中采用Qiagen試劑盒得到了最高濃度（分別為246.62 ng/μL和198.66 ng/μL）。而4號(hào)樣品鮭魚子醬提取的DNA濃度最低，采用TaKaRa試劑盒只得到0.6 ng/μL DNA。采用5種方法提取的3號(hào)樣品紅三文魚沙拉的DNA濃度從1.25-53.28 ng/μL 不等，濃度相差近50倍，說(shuō)明沙拉醬中的混合油脂等大分子物質(zhì)在DNA提取中是較難去除的雜質(zhì)，不同的提取方案對(duì)分離純化沙拉醬中的DNA效率有較大差異。6號(hào)樣品小咸魚黃魚干的DNA濃度在各提取方法間差異較大，采用TaKaRa試劑盒法只得到1.79 ng/μL，CTAB法得到3.53 ng/μL，Promega試劑盒提取也只得到7.32 ng/μL DNA，說(shuō)明這些方法對(duì)鹽漬樣品的DNA提取效果較差。總體而言，TaKaRa試劑盒提取的所有樣品DNA濃度均較低，除5號(hào)和20號(hào)樣品外均低于10 ng/μL，表明該試劑盒提取的DNA得率最低。3個(gè)平行重復(fù)間相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）大于50%的樣品均為DNA濃度較低的樣品，造成此現(xiàn)象的原因可能是當(dāng)DNA濃度較低時(shí)，其實(shí)際濃度已偏離紫外風(fēng)光光度計(jì)線性測(cè)量范圍，造成測(cè)定不準(zhǔn)確。

2.4 PCR擴(kuò)增

將各方法提取的每個(gè)樣品3個(gè)平行管DNA分別擴(kuò)增魚類12S rRNA基因，電泳結(jié)果見圖1所示。5種方法的陽(yáng)性對(duì)照均可得到明顯的擴(kuò)增條帶，空白

對(duì)照無(wú)可見條帶產(chǎn)生（數(shù)據(jù)未在此呈現(xiàn)）。整體來(lái)看，各樣品間擴(kuò)增條帶明暗程度差異較大，基本與DNA提取濃度大小趨勢(shì)相一致。如DNA濃度較高的5號(hào)和11號(hào)樣品條帶很亮，在3個(gè)平行管間條帶亮度無(wú)顯著差異。此外，7號(hào)、9號(hào)和10號(hào)樣品擴(kuò)增條帶也比較明亮。說(shuō)明上述5個(gè)樣品采用5種提取方法均可得到質(zhì)量較好、不影響PCR擴(kuò)增的DNA溶液。

表3 五種方法提取的DNA濃度（ng /μL）

其余6個(gè)樣品，即1-4號(hào)、6號(hào)和8號(hào)樣品的擴(kuò)增條帶在不同提取方法間有明顯差異。1號(hào)樣品醬煮鮐魚采用前3種方法（CTAB法、Qiagen試劑盒和Tiagen試劑盒）提取DNA的擴(kuò)增條帶較其他兩種方法要亮一些，從條帶亮度看醬煮過(guò)程對(duì)DNA的破壞比較明顯；2號(hào)樣品油浸金槍魚的擴(kuò)增條帶整體都比較暗，說(shuō)明油浸處理引起了DNA的大量降解；3號(hào)樣品紅三文魚沙拉采用Tiagen和Promega試劑盒法提取DNA擴(kuò)增條帶明顯比其余三種方法提取DNA的擴(kuò)增條帶亮，與DNA濃度測(cè)定結(jié)果一致；4號(hào)樣品鮭魚子醬測(cè)定的DNA濃度雖然很低，但擴(kuò)增條帶較亮，說(shuō)明雜質(zhì)含量較少，對(duì)PCR擴(kuò)增影響小；6號(hào)樣品小黃魚咸魚干的擴(kuò)增結(jié)果在幾種方法間差異最大，采用CTAB法和Promega試劑盒提取DNA沒(méi)有明顯可見擴(kuò)增條帶產(chǎn)生，TaKaRa試劑盒提取DNA有較淡條帶產(chǎn)生，說(shuō)明長(zhǎng)期腌漬對(duì)DNA的破壞力很大，而從鹽漬樣品中提取DNA采用適宜的方法至關(guān)重要；8號(hào)樣品大魚丸采用Tiagen試劑盒提取的DNA可見較淡的擴(kuò)增條帶，雖然DNA濃度測(cè)定值與其他試劑盒相比較高，但可能存在某些

抑制因子對(duì)PCR擴(kuò)增不利。

圖1 PCR擴(kuò)增結(jié)果

2.5 各種DNA提取方法的比較

根據(jù)上述DNA濃度的測(cè)定結(jié)果，分光光度計(jì)對(duì)DNA A260/A280和A260/A230兩個(gè)比值的測(cè)定結(jié)果，以及PCR擴(kuò)增結(jié)果對(duì)各DNA提取方法進(jìn)行綜合分析，同時(shí)對(duì)提取過(guò)程的簡(jiǎn)易程度等其他因素也進(jìn)行了分析和總結(jié)，各方法的優(yōu)缺點(diǎn)歸納于表4。

表4 五種DNA提取方法優(yōu)缺點(diǎn)比較

3 討論

樣品處理和DNA提取是檢測(cè)流程中至關(guān)重要的第一步，是檢測(cè)方法得以順利實(shí)施的前提條件。本研究采用將樣品完全冷凍后研磨的方法使樣品可以充分破碎，為后續(xù)DNA提取打下良好的基礎(chǔ)。本研究對(duì)市售的11種不同加工方式魚制品采用5種常見DNA提取方法和試劑盒進(jìn)行DNA提取。11種魚制品包括熱處理、油漬、鹽漬、烤制、煙熏、粉碎及沙拉醬等調(diào)料混合等加工方式，基本涵蓋了目前魚來(lái)源加工產(chǎn)品的各種加工技術(shù)?，F(xiàn)有的DNA提取方法一般先基于SDS試劑或CTAB試劑裂解細(xì)胞，然后通過(guò)有機(jī)試劑（如酚、氯仿）去除蛋白質(zhì)等大分子物質(zhì)和雜質(zhì)，或采用特異性膜吸附DNA（即膜吸附柱）進(jìn)行純化。本研究使用的5種DNA提取方法采用的均為上述原理之一，因此也對(duì)目前常見的各種提取方法對(duì)不同加工處理魚制品的DNA提取效果進(jìn)行了全面的比較。

與其他比較食品樣品DNA提取方法的研究結(jié)果相似，本研究也發(fā)現(xiàn)DNA的質(zhì)量和得率與樣品的加工程度呈負(fù)相關(guān)，即樣品的加工程度越高DNA的質(zhì)量越差，得率越低［9，11，12］。而且，很明顯DNA提取方法對(duì)DNA的質(zhì)量、DNA得率以及PCR擴(kuò)增效果影響很大，因此對(duì)不同加工處理的食品樣品采

用適宜的DNA提取方法至關(guān)重要。本研究通過(guò)對(duì)DNA中蛋白質(zhì)和其他影響后續(xù)檢測(cè)的雜質(zhì)去除情況、DNA濃度和得率，以及PCR擴(kuò)增情況的綜合分析結(jié)果表明，并沒(méi)有一個(gè)“萬(wàn)能的”方法或試劑盒對(duì)所有樣品均有最好的DNA提取效果，每一種方法（試劑盒）均有其特定的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)。相比較而言，CTAB法由于純化步驟少，去除蛋白質(zhì)和雜質(zhì)效果不好，對(duì)特殊處理樣品（如腌漬和沙拉醬混合樣品）的DNA提取效果較差，但價(jià)格便宜。4種市售試劑盒對(duì)不同加工處理樣品的提取效果有一定差異，在對(duì)未知魚類加工制品進(jìn)行DNA提取前，需對(duì)樣品類別進(jìn)行比照，后選擇合適的提取方法進(jìn)行DNA提取。對(duì)鹽漬類樣品，也可選擇Qiagen試劑盒、Tiangen試劑盒和TaKaRa試劑盒進(jìn)行DNA提取。對(duì)沙拉醬等混合魚制品，可選擇Tiangen試劑盒和Promega試劑盒進(jìn)行DNA提取。

4 結(jié)論

本研究采用目前比較常見的5種DNA提取方法和試劑盒對(duì)11種不同加工方法和加工程度的魚類來(lái)源制品的DNA提取效果進(jìn)行了比較。經(jīng)對(duì)提取的DNA質(zhì)量、得率和PCR擴(kuò)增效果的比較，結(jié)果表明，每種DNA提取方法各有利弊，沒(méi)有一種DNA提取試劑盒可以對(duì)所有類型魚類加工制品樣品均有最好的提取效果。尤其在對(duì)加工程度較高的魚制品樣品進(jìn)行DNA提取時(shí)，需要選擇適宜的DNA提取方法方能得到最佳的DNA提取效果。

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（責(zé)任編輯 狄艷紅）

Evaluation of Five DNA Extraction Methods for Different Processed Fish Samples

Li Jinbo1，2Sheng Jing3Li Xiang2Pan Liangwen2Lü Rong2Yang Jielin2
（1. Institute of Biotechnology，East China University of Science and Technology，Shanghai 200237；2. Shanghai Entry-Exit Inspection & Quarantine Bureau，Shanghai 200135；3. Shanghai Tingxin Middle School，Shanghai 201505）

It was to find more effective method for DNA extraction, five methodologies for DNA extraction from eleven different processed fish samples were compared. Five methods, including CTAB method and four commercial DNA extraction kits were employed and compared on the extraction of DNA from 11 processed fish samples, such as boiled, oil immersed, fumed, roasted, dried and salt-dried fish etc. The quality and quantity of the extracted DNA were evaluated by measurement of the absorbance at 230, 260 and 280 nm, and by qualitative PCR. The result showed that five methods can all be used to extract from the most processed fish samples, but the quality and quantity of the extracted DNA were different. So every method has its benefits and disadvantages.

Processed fish samples DNA extraction DNA purification PCR

2013-09-22

國(guó)家“十二五”農(nóng)村領(lǐng)域國(guó)家科技計(jì)劃課題（2011AA100807），上海市技術(shù)性貿(mào)易措施應(yīng)對(duì)專項(xiàng)（12TBT011）

李進(jìn)波，男，碩士研究生，研究方向：分子生物學(xué)；E-mail：jinbo_li@live.com

李想，女，博士，高級(jí)工程師，研究方向：分子生物學(xué)；E-mail：idealne@163.com