王雪芹，林海君，鞠世影，霍貴成（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150030）

兩株糞腸球菌的安全性評(píng)價(jià)

王雪芹，林海君，鞠世影，霍貴成*（東北農(nóng)業(yè)大學(xué)，乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，黑龍江哈爾濱150030）

乳酸菌KLDS6.0610和KLDS6.0611是兩株分離于傳統(tǒng)乳制品的糞腸球菌，這兩株菌均會(huì)產(chǎn)生高效抗李斯特菌的細(xì)菌素，而且產(chǎn)生的細(xì)菌素具有良好的加工穩(wěn)定性。本實(shí)驗(yàn)主要是評(píng)價(jià)這兩株菌的安全性，為其實(shí)際應(yīng)用提供可靠的理論依據(jù)。通過(guò)對(duì)兩株菌的耐藥性、有害代謝產(chǎn)物、機(jī)體指標(biāo)、急性毒理實(shí)驗(yàn)以及溶血性和易位實(shí)驗(yàn)得到：急性毒理實(shí)驗(yàn)中，動(dòng)物的體重變化正常而且主要臟器無(wú)異常；兩株菌對(duì)大部分常見(jiàn)的抗生素都沒(méi)有耐藥性，只是對(duì)慶大霉素具有抗性，不含有可轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒；而且菌株的生長(zhǎng)代謝過(guò)程中不會(huì)產(chǎn)生硝基還原酶、膽鹽羧化酶和氨基脫羧酶；谷胱甘肽和丙二醛含量基本正常，不會(huì)產(chǎn)生溶血和易位現(xiàn)象。通過(guò)對(duì)兩株菌的安全性評(píng)價(jià)可知乳酸菌KLDS6.0610和KLDS6.0611是安全的。

糞腸球菌，安全性，耐藥性，機(jī)體指標(biāo)

乳酸菌是一群能使可發(fā)酵碳水化合物產(chǎn)生大量乳酸的革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌的統(tǒng)稱[1]，乳酸菌具有調(diào)節(jié)腸道菌群平衡、增強(qiáng)機(jī)體免疫、促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收和益生等功能，所以廣泛應(yīng)用于乳制品、保健品和添加劑中而被人們所消費(fèi)。通常使用的乳酸菌被認(rèn)為是人體腸道的重要菌群，對(duì)人體是無(wú)害的[2]，但是乳酸菌的安全問(wèn)題仍不容忽視，尤其是一些沒(méi)有長(zhǎng)時(shí)間安全使用歷史的新開(kāi)發(fā)菌株，應(yīng)確保其安全性再投入到實(shí)際應(yīng)用中。

現(xiàn)階段，我國(guó)還沒(méi)有完善的乳酸菌及其產(chǎn)品的安全性評(píng)價(jià)方法和體系，一般都是從耐藥性評(píng)價(jià)、有害代謝產(chǎn)物評(píng)價(jià)和動(dòng)物性實(shí)驗(yàn)幾個(gè)方面進(jìn)行菌株的安全性評(píng)估[3]。本實(shí)驗(yàn)的兩株乳酸菌KLDS6.0610和KLDS6.0611均分離于傳統(tǒng)的乳制品中，通過(guò)電鏡觀察和16SrDNA的鑒定，兩株均為糞腸球菌[4]。KLDS6.0610和KLDS6.0611是兩株高產(chǎn)高效抗李斯特菌細(xì)菌素的乳酸菌，而且產(chǎn)生的細(xì)菌素有良好的加工穩(wěn)定性，具有潛在的應(yīng)用價(jià)值和前景[4]。本實(shí)驗(yàn)對(duì)兩株糞腸球菌進(jìn)行耐藥性實(shí)驗(yàn)、機(jī)體指標(biāo)和有害代謝產(chǎn)物的評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)以及急性毒理實(shí)驗(yàn)，評(píng)價(jià)這兩株菌的安全性，為其以后的實(shí)際應(yīng)用提供理論的參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

乳酸菌KLDS6.0610和KLDS6.0611 由乳品科學(xué)教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室工業(yè)微生物菌種保藏中心（KLDSDICC）提供；清潔級(jí)昆明雄性小鼠 由中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院哈爾濱獸醫(yī)研究所提供，許可證號(hào)scxk2011-027，平均體重為12～16g；BASM培養(yǎng)基 配方見(jiàn)文獻(xiàn)[5]；MRS培養(yǎng)基 配方見(jiàn)文獻(xiàn)[4]；蛋白胨、酵母膏、多價(jià)胨、牛肉膏、胰蛋白胨、北京奧博星；瓊脂糖、葡萄糖、吐溫80、氯化鈉 北京博奧拓達(dá)；酪氨酸、組氨酸、賴氨酸 天津TBD公司；藥敏紙片 杭州微生物試劑有限公司；質(zhì)粒提取試劑盒、丙二醛測(cè)定試劑盒，BCA蛋白質(zhì)測(cè)定試劑盒 碧云天試劑有限公司；硝基還原酶測(cè)試盒、還原型谷胱甘肽檢測(cè)試劑盒 南京建成試劑有限公司。

電熱恒溫培養(yǎng)箱DHP-9272 上海-恒科技有限公司；全自動(dòng)高壓滅菌鍋HVE-50HIRAYAMA；DK-98-11A電熱恒溫水浴鍋 天津市泰斯特儀器有限公司；電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱DH-101-3BS 天津市中環(huán)實(shí)驗(yàn)電爐有限公司；快速混勻器XK96-A、勻漿器 姜堰市新康醫(yī)療器械有限公司；紫外分光光度儀、酶標(biāo)儀 美國(guó)Beckman公司；潔凈工作臺(tái)VD-1320 北京東聯(lián)哈爾儀器制造有限公司；低速離心機(jī)LD4-2 北京醫(yī)用離心機(jī)。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 耐藥性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

1.2.1.1 藥敏片實(shí)驗(yàn) 采用藥敏片瓊脂擴(kuò)散法[6]。將待測(cè)菌液培養(yǎng)過(guò)夜，取100μL待試菌液均勻涂布于MRS固體培養(yǎng)基中，菌液完全被吸收后，然后把藥敏片放入每個(gè)MRS培養(yǎng)基中，所用的藥敏片分別為：萬(wàn)古霉素、卡那霉素、四環(huán)素、氨芐青霉素、氯霉素、青霉素和慶大霉素。靜置20min后，放入37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，24h后測(cè)量各藥敏片的抑菌圈大小。

1.2.1.2 質(zhì)粒提取實(shí)驗(yàn) 取1.5mL培養(yǎng)14h的實(shí)驗(yàn)菌液，用質(zhì)粒提取試劑盒采用可以特異性結(jié)合DNA的離心吸附柱和獨(dú)特的緩沖液系統(tǒng)提取菌液的基因組DNA。將0.5g瓊脂糖溶解于100mL的1×TAE電泳緩沖液中，冷卻至室溫，并向其中加入0.5μL溴乙錠，倒入電泳槽中制備電泳所用的膠。將4μL提取完質(zhì)粒的液體與2μL的6×Buffer混合，向瓊脂糖凝膠中點(diǎn)樣。電壓為150V，工作時(shí)間為20min。電泳液為1×TAE溶液，電泳結(jié)束后，使用凝膠成像儀進(jìn)行觀察。

1.2.2 有害代謝產(chǎn)物評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

1.2.2.1 硝基還原酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn) 將培養(yǎng)14h的實(shí)驗(yàn)菌液3000r/min離心20min，吸取上層清液，使用硝基還原酶測(cè)試盒測(cè)定待測(cè)菌液中硝基還原酶的濃度。硝基還原酶檢測(cè)方法各管試劑添加順序見(jiàn)表1，添加完成后混勻，3500r/min離心10min，取上清，于540nm處測(cè)定吸光值。

表1 硝基還原酶檢測(cè)方法Table 1 The test method of nitrate reductase

1.2.2.2 氨基脫羧酶活性檢測(cè)實(shí)驗(yàn) 使用渦旋混勻器將過(guò)夜培養(yǎng)的實(shí)驗(yàn)菌液混合均勻，取100μL菌液均勻涂布于BASM培養(yǎng)基中，菌液完全吸收后，放入37℃培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)，24h后觀察菌落周?chē)欠裼蓄伾兓?/p>

1.2.3 動(dòng)物實(shí)驗(yàn)

1.2.3.1 適應(yīng)性喂養(yǎng) 在環(huán)境為20℃，濕度為50%，光照12h的條件下，給予足夠的食物和純凈水進(jìn)行喂養(yǎng)3～5d。

1.2.3.2 急性毒理實(shí)驗(yàn) 將結(jié)束了適應(yīng)性喂養(yǎng)的清潔級(jí)昆明雄性小鼠隨機(jī)分成四組，每組5只。分別編號(hào)為KLDS6.0610對(duì)照組、KLDS6.0610實(shí)驗(yàn)組、KLDS6.0611對(duì)照組和KLDS6.0611實(shí)驗(yàn)組。將過(guò)夜培養(yǎng)的菌液濃度調(diào)至109cfu/0.2mL 0.9%NaCl溶液，灌胃開(kāi)始前16h禁食，但不限制飲水。按每只0.2mL/10g體重的劑量進(jìn)行灌胃，一日三次，每次間隔2～3h。灌胃結(jié)束后，觀察7日內(nèi)小鼠的活動(dòng)狀態(tài)和體重變化，第8d將全部的小鼠用頸椎脫臼法處死，觀察主要器官的變化。

1.2.4 主要機(jī)體指標(biāo)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

1.2.4.1 丙二醛血清（MDA）濃度檢測(cè)實(shí)驗(yàn)和肝總谷胱甘肽（GSH）濃度檢測(cè)實(shí)驗(yàn) 將結(jié)束了適應(yīng)性喂養(yǎng)的20只昆明雄性小鼠隨機(jī)分成4組，每組5只。別為KLDS6.0610對(duì)照組、KLDS6.0610實(shí)驗(yàn)組、KLDS6.0611對(duì)照組和KLDS6.0611實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組的菌液濃度為109cfu/0.2mL 0.9%NaCl溶液，對(duì)照組使用0.9%NaCl溶液進(jìn)行灌胃，劑量均為0.2mL/10g，每天一次，連續(xù)20d。在第21d時(shí)，對(duì)全部的小鼠進(jìn)行眼球取血，3000r/min離心20min，吸取上層清液，使用丙二醛測(cè)定試劑盒進(jìn)行丙二醛含量的測(cè)定。同時(shí)，將小鼠處死，稱取0.1g肝臟溶于1mL 0.9%NaCl溶液中，在冰水浴的條件下進(jìn)勻漿，然后3000r/min離心20min，吸取上層清液，使用BCA蛋白質(zhì)試劑盒和谷胱甘肽濃度檢測(cè)試劑盒檢測(cè)肝總谷胱甘肽的濃度。

1.2.4.2 膽鹽羧化酶活性的檢測(cè) 普通的MRS固體培養(yǎng)基中加入5g牛黃脫氧膽酸鈉鹽，121℃15min滅菌后，傾倒于平板中，將待測(cè)菌液均勻涂布于平板中，放入37℃培養(yǎng)箱中，24h后觀察是否有白色沉淀產(chǎn)生。

1.2.5 其他評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

1.2.5.1 溶血實(shí)驗(yàn) 菌株KLDS6.0610和KLDS6.0611在MRS中37℃培養(yǎng)14h，然后轉(zhuǎn)移到血瓊脂基質(zhì)平板上。平板在37℃培養(yǎng)14h。通過(guò)觀察菌落周?chē)欠裼星逦娜芫?，記錄溶血反?yīng)結(jié)果。

1.2.5.2 易位實(shí)驗(yàn) 將結(jié)束了適應(yīng)性喂養(yǎng)的20只昆明雄性小鼠隨機(jī)分成4組，每組5只。分別為KLDS6.0610對(duì)照組、KLDS6.0610實(shí)驗(yàn)組、KLDS6.0611對(duì)照組和KLDS6.0611實(shí)驗(yàn)組。實(shí)驗(yàn)組的菌液濃度為109cfu/0.2mL 0.9%NaCl溶液，對(duì)照組使用0.9%NaCl溶液進(jìn)行灌胃，劑量均為0.2mL/10g，每天一次，連續(xù)10d。每天記錄小鼠的體重變化，在第11d，稱取1g處死小鼠的心、肝、脾、肺、腎，并加入9mL的生理鹽水在冰水浴的條件下進(jìn)行勻漿，制備成10%的勻漿液。并將勻漿液均勻涂布于MRS培養(yǎng)基上，37℃倒置培養(yǎng)24h后，觀察平板上是否有菌落生長(zhǎng)。

1.3 數(shù)據(jù)處理

使用SPSS軟件對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行差異性分析。數(shù)據(jù)的表示方式為：平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差。相同字母代表差異性不顯著，不同字母代表差異性顯著。

2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果

2.1 耐藥性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

耐藥性實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表2。通過(guò)KLDS6.0610和KLDS6.0611對(duì)7種常見(jiàn)抗生素的敏感性實(shí)驗(yàn)可知，兩株菌對(duì)大部分抗生素都很敏感，沒(méi)有抗藥性，但是對(duì)慶大霉素不敏感。瓊脂糖凝膠電泳實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖1，兩株菌的泳道均沒(méi)有條帶，可以判定KLDS6.0610和KLDS6.0611都沒(méi)有質(zhì)粒存在。

表2 耐藥性實(shí)驗(yàn)結(jié)果Table 2 The results of resistance test

圖1 質(zhì)粒提取的電泳圖Fig.1 Electrophoregram of plasmid extractio

2.2 有害代謝產(chǎn)物評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

氨基脫羧酶檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表3，兩株菌均表現(xiàn)出陰性反應(yīng)，可以認(rèn)定KLDS6.0610和KLDS6.0611均不含有氨基脫羧酶。硝基還原酶濃度檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)表4，KLDS6.0610和KLDS6.0611中硝酸還原酶的濃度與對(duì)照組無(wú)顯著差異性，所以可以判定兩株菌中均沒(méi)有硝基還原酶的存在。

表3 氨基脫羧酶檢測(cè)結(jié)果Table 3 The detection results of amino acid decarboxylase

表4 硝基還原酶檢測(cè)結(jié)果Table 4 The test results of nitrate reductase

2.3 急性毒理實(shí)驗(yàn)

灌胃結(jié)束的7d內(nèi)，小鼠的活動(dòng)正常，無(wú)異常行為，進(jìn)食和飲水正常，皮毛正常，而且實(shí)驗(yàn)組的小鼠體重呈現(xiàn)正常的增長(zhǎng)趨勢(shì)，與對(duì)照組無(wú)顯著差異性（見(jiàn)圖2）。在第8d時(shí)對(duì)小鼠進(jìn)行解刨，觀察到實(shí)驗(yàn)組小鼠的心、肝、脾、肺、腎均無(wú)異?，F(xiàn)象。

圖2 動(dòng)物的體重變化Fig.2 The weight change of animals

2.4 主要機(jī)體指標(biāo)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

在20d的灌胃期間內(nèi)，沒(méi)有小鼠出現(xiàn)死亡的現(xiàn)象，而且小鼠的進(jìn)食、飲水和排便均正常，精神狀態(tài)良好，活動(dòng)正常，通過(guò)對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組的小鼠體重進(jìn)行差異性分析可知，實(shí)驗(yàn)組小鼠的體重也與對(duì)照組一樣呈現(xiàn)正常增長(zhǎng)趨勢(shì)，無(wú)顯著差異（見(jiàn)表5）。

GSH和MDA的檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)圖3～圖4。實(shí)驗(yàn)組的丙二醛濃度與對(duì)照組無(wú)顯著差異（p＞0.05），而谷胱甘肽的含量顯著高于對(duì)照組（p＜0.05）。將兩株菌分別涂在含有牛黃脫氧膽酸耐鹽的MRS上培養(yǎng)24h后發(fā)現(xiàn)沒(méi)有白色沉淀產(chǎn)生，說(shuō)明兩株菌都不含有牛黃脫氧膽酸鈉鹽。

表5 動(dòng)物的體重（g）變化結(jié)果（x±SD；n=5）Table 5 The results of weight（g）change of animals（x±SD；n=5）

圖3 GSH的檢測(cè)結(jié)果Fig.3 The detection results of content of GSH

圖4 MDA的檢測(cè)結(jié)果Fig.4 The detection results of content of MDA

2.5 其他評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

KLDS6.0610和KLDS6.0611均沒(méi)有出現(xiàn)溶血現(xiàn)象，在易位實(shí)驗(yàn)的10d灌胃期間內(nèi)，小鼠的體重?zé)o異常變化（見(jiàn)表6），而且處死小鼠的心、肝、脾、肺、腎勻漿處理后涂布在MRS培養(yǎng)基上過(guò)夜培養(yǎng)的結(jié)果顯示：沒(méi)有出現(xiàn)乳酸菌生長(zhǎng)的現(xiàn)象，所以沒(méi)有發(fā)生細(xì)菌的易位現(xiàn)象。

表6 易位實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重（g）變化結(jié)果（x±SD；n=5）Table 6 The weight（g）change of animals translocation experiment（x±SD；n=5）

3 討論

3.1 耐藥性評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

近年來(lái)，隨著抗生素的廣泛使用，乳酸菌也不斷出現(xiàn)耐藥性的現(xiàn)象，特別是有些乳酸菌對(duì)萬(wàn)古霉素的耐藥性為臨床治療帶來(lái)了很大的困難[7]。乳酸菌的耐藥性主要來(lái)自于兩個(gè)原因：乳酸菌自身具有編碼耐藥性的基因，這個(gè)基因可能位于染色體上，也可能位于質(zhì)粒上?；蛘呤峭ㄟ^(guò)基因水平轉(zhuǎn)移獲得耐藥因子，長(zhǎng)期攝入具有耐藥性的乳酸菌會(huì)對(duì)人的身體產(chǎn)生嚴(yán)重的危害[8]。

通過(guò)藥敏實(shí)驗(yàn)可知：KLDS6.0610和KLDS6.0611均對(duì)萬(wàn)古霉素、卡那霉素、四環(huán)素、氨芐青霉素、氯霉素、青霉素很敏感，只是對(duì)慶大霉素具有抗性。說(shuō)明兩株菌有潛在的應(yīng)用前景。在質(zhì)粒檢測(cè)實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)，兩株菌均不含有質(zhì)粒，這有可能是因?yàn)閮芍昃⒉缓心退幓?，或者是耐藥基因存在于染色體上，但是可以判定在這兩種情況下，兩株菌都不會(huì)通過(guò)基因水平轉(zhuǎn)移將耐藥基因轉(zhuǎn)移，在實(shí)際應(yīng)用中應(yīng)該是安全。

3.2 機(jī)體指標(biāo)評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

體重異常是引起各種疾病的一個(gè)異常前兆，在20d的灌胃期間內(nèi)。實(shí)驗(yàn)組的小鼠體重增長(zhǎng)正常，精神狀態(tài)良好，無(wú)死亡現(xiàn)象。說(shuō)明KLDS6.0610和KLDS6.0611的攝入不會(huì)引起小鼠體重的異常變化，降低各種疾病的發(fā)病率。

谷胱甘肽在動(dòng)物的肝臟中含量較為豐富，具有保護(hù)肝臟的功能[9]，實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)組小鼠的谷胱甘肽含量略高于對(duì)照組，可能與敗血癥急性期有關(guān)系，但是，對(duì)機(jī)體沒(méi)有明顯的影響。脂質(zhì)發(fā)生過(guò)氧化反應(yīng)會(huì)產(chǎn)生丙二醛，丙二醛會(huì)引起蛋白質(zhì)、核酸等大分子的交聯(lián)，具有細(xì)胞毒性[9]。實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)到實(shí)驗(yàn)組與對(duì)照組的血清丙二醛濃度沒(méi)有明顯差異，說(shuō)明KLDS6.0610和KLDS6.0611并沒(méi)有增加脂類(lèi)超氧化能力，避免了細(xì)胞毒性的產(chǎn)生。

3.3 有害代謝產(chǎn)物評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

硝基還原酶可以將人體內(nèi)攝入的硝酸鹽還原成亞硝酸鹽，并在一定的條件下產(chǎn)生硝酸銨，對(duì)人體具有致癌變的危害[10]。氨基脫羧酶能夠?qū)⑹称分械陌被崦擊冗€原成生物胺類(lèi)物質(zhì)[11]，當(dāng)體內(nèi)積累過(guò)多的生物胺類(lèi)物質(zhì)時(shí)，機(jī)體會(huì)產(chǎn)生嚴(yán)重的中毒癥狀。KLDS6.0610和KLDS6.0611均不含有硝基還原酶和氨基脫羧酶，可以應(yīng)用于實(shí)際生產(chǎn)中。

3.4 其他評(píng)價(jià)實(shí)驗(yàn)

溶血性細(xì)菌的侵入引起的溶血現(xiàn)象會(huì)導(dǎo)致敗血癥的發(fā)生，實(shí)驗(yàn)證實(shí)KLDS6.0610和KLDS6.0611不會(huì)引起溶血現(xiàn)象，對(duì)紅細(xì)胞沒(méi)有影響。細(xì)菌易位是腸道內(nèi)的細(xì)菌越過(guò)腸粘膜屏障，出現(xiàn)在其他臟器的一種現(xiàn)象，這種腸道微生態(tài)被嚴(yán)重破壞后會(huì)對(duì)機(jī)體造成不良的影響，易位實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：KLDS6.0610和KLDS6.0611均不會(huì)在小鼠體內(nèi)發(fā)生易位現(xiàn)象。

4 結(jié)論

通過(guò)對(duì)兩株高產(chǎn)細(xì)菌素的糞腸球菌進(jìn)行全面的安全性評(píng)價(jià)可知：兩株菌對(duì)大部分常見(jiàn)的抗生素均無(wú)抗性，只是對(duì)慶大霉素有抗性，不含有可轉(zhuǎn)移的質(zhì)粒。不會(huì)產(chǎn)生硝基還原酶、膽鹽羧化酶和氨基脫羧酶。急性毒理實(shí)驗(yàn)可知：實(shí)驗(yàn)組的動(dòng)物體重與對(duì)照組無(wú)顯著差異性，主要器官無(wú)異常變化。動(dòng)物喂養(yǎng)實(shí)驗(yàn)可知：谷胱甘肽和丙二醛的含量基本正常，不會(huì)產(chǎn)生溶血和易位現(xiàn)象。所以，乳酸菌KLDS6.0610和KLDS6.0611是安全的。

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Safe assessment of two Enterococcus faecalis

WANG Xue-qin，LIN Hai-jun，JU Shi-ying，HUO Gui-cheng*
（Northeast Agriculture University，Key Laboratory of Dairy Science，Ministry of Education，Harbin 150030，China）

Two Enterococcus faecalis coded as KLDS6.0610 and KLDS6.0611 were separated from traditional dairy.They could produce bacteriocins active against L.monocytogenes and had good stability in the processing.The objective of the present study was to evaluate the safety of the Enterococci.In the acute toxicology experiment，the weight changes of animals was normal.Two strains did not present multi-resistance to antibiotics and had no transferable plasmid.They did not produce nitrate reductase，bile acid carboxylase and amino acid decarboxylase.The content of GSH and MDA were normal.They had no hemolytic activity and translocation phenomenon.So，both KLDS6.0610 and KLDS6.0611 were safe.

Enterococci faecalis；safety；drug resistance；body index

TS201.1

A

1002-0306（2014）08-0166-05

10.13386/j.issn1002-0306.2014.08.029

2013－08－05 *通訊聯(lián)系人

王雪芹（1989-），女，碩士研究生，研究方向：乳品科學(xué)與微生物。

國(guó)家“863”項(xiàng)目（2011AA100902）。