張金彪，代榮琴，林佳靜，李 涓，翟文燕

CA-1500血凝儀免疫比濁法檢測(cè)D-二聚體的實(shí)驗(yàn)性能評(píng)價(jià)

張金彪，代榮琴，林佳靜，李 涓，翟文燕

目的：評(píng)價(jià)CA-1500血凝儀檢測(cè)D-二聚體的實(shí)驗(yàn)性能。方法：參照CLSI發(fā)布的系列文件，評(píng)估CA-1500血凝儀檢測(cè)D-二聚體的批內(nèi)精密度、批間精密度、相關(guān)性分析、分析測(cè)量范圍（analytical measurement range，AMR）、臨床可報(bào)范圍（clinical reportable range，CRR）、最大稀釋倍數(shù)、抗干擾物質(zhì)實(shí)驗(yàn)等內(nèi)容。利用低、高值校準(zhǔn)品檢測(cè)精密度；隨機(jī)選擇門(mén)診及住院患者50份109 mmol/L的枸櫞酸鈉抗凝血，與CS-5100血凝儀進(jìn)行相關(guān)性分析；選擇正常水平（L1）、中間水平（L2）、高水平（L3）樣本進(jìn)行臨床可報(bào)范圍評(píng)測(cè)；臨床留取血紅蛋白、膽紅素、甘油三酯、膽固醇4種干擾血漿進(jìn)行干擾試驗(yàn)評(píng)價(jià)。結(jié)果：高值質(zhì)控品批內(nèi)和批間精密度評(píng)價(jià)均小于15%；CA-1500血凝儀與CS-5100具有良好的線(xiàn)性關(guān)系（P=0.103＞0.01，r=0.935）；評(píng)價(jià)CA-1500血凝儀檢測(cè)D-二聚體的測(cè)量線(xiàn)性范圍為0～5 mg/L；CRR評(píng)價(jià)最適合稀釋倍數(shù)為1/8，結(jié)合線(xiàn)性范圍確定CRR為0.03～40 mg/L；抗干擾物實(shí)驗(yàn)影響度均小于±10%。結(jié)論：從研究結(jié)果來(lái)看，CA-1500血凝儀實(shí)驗(yàn)性能符合原廠家質(zhì)量要求，符合CLSI發(fā)布的系列文件，在精密度、相關(guān)性、AMR、CRR、抗干擾能力等方面能夠?yàn)閷?shí)驗(yàn)室及臨床提供可靠結(jié)果及質(zhì)量保證。

血凝儀；D-二聚體；性能評(píng)價(jià)

0 引言

隨著人們生活水平的提高，出血和止血疾病的發(fā)病率呈上升趨勢(shì)。出凝血功能的檢測(cè)技術(shù)進(jìn)步較快，以前的手工法逐漸由半自動(dòng)和全自動(dòng)設(shè)備所替代。CA-1500血凝儀（以下簡(jiǎn)稱(chēng)CA-1500）是日本Sysmex公司生產(chǎn)的全自動(dòng)血凝分析儀，國(guó)內(nèi)應(yīng)用較為普遍。為了解CA-1500檢測(cè)D-二聚體的性能，筆者進(jìn)行了性能評(píng)價(jià)，評(píng)價(jià)內(nèi)容包括：批內(nèi)精密度、批間精密度、相關(guān)性分析、分析測(cè)量范圍（analytical measurement range，AMR）、臨床可報(bào)范圍（clinical reportablerange，CRR）、最大稀釋度、抗干擾物質(zhì)實(shí)驗(yàn)等。

1 材料和方法

1.1 儀器與試劑

Sysmex公司生產(chǎn)的CA-1500，所用試劑均為進(jìn)口配套試劑（INNOVANCE），校準(zhǔn)品、質(zhì)控品均為配套試劑盒內(nèi)包裝（見(jiàn)表1）。

表1 試劑規(guī)格及批號(hào)

1.2 標(biāo)本來(lái)源

隨機(jī)選取50份標(biāo)本，來(lái)自門(mén)診及住院患者，均為109 mmol/L枸櫞酸鈉1∶9抗凝血；抗干擾物實(shí)驗(yàn)樣本為臨床檢測(cè)標(biāo)本留取。

1.3 精密度評(píng)價(jià)

分別將低高值質(zhì)控品連續(xù)檢測(cè)20次（n=20），得到20個(gè)質(zhì)控結(jié)果；分別將低高值質(zhì)控品分裝成5份，冷凍保存，每天將一份分裝質(zhì)控品連續(xù)檢測(cè)4次，連續(xù)檢測(cè)5 d（n=20），得到20個(gè)質(zhì)控結(jié)果。將批內(nèi)、批間結(jié)果計(jì)算x、s、CV。

1.4 相關(guān)性分析

隨機(jī)選取50份門(mén)診及住院患者標(biāo)本分別在Sysmex CS-5100血凝儀（以下簡(jiǎn)稱(chēng)CS-5100）和Sysmex CA-1500上檢測(cè)，記錄并統(tǒng)計(jì)分析，以Sysmex CA-1500檢測(cè)結(jié)果為y，以Sysmex CS-5100為x，計(jì)算線(xiàn)性回歸方程和相關(guān)系數(shù)（r）。

1.5 分析測(cè)量范圍（AMR）實(shí)驗(yàn)方案

參考EP6-A文件[1]，選取一份接近預(yù)期上限的高值全血樣本（H），分別按100%、75%、50%、25%、0%的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)總€(gè)稀釋度重復(fù)測(cè)定2次，計(jì)算均值。將實(shí)測(cè)值與理論值作比較（重復(fù)測(cè)定偏離小于5%，符合偏離小于10%的標(biāo)準(zhǔn)），計(jì)算y=ax+b，驗(yàn)證線(xiàn)性范圍。若實(shí)驗(yàn)的每個(gè)濃度的線(xiàn)性偏離均在允許誤差范圍之內(nèi)，則實(shí)驗(yàn)所涉及的濃度區(qū)間即為AMR。本實(shí)驗(yàn)要求a值在1±0.1范圍內(nèi)，相關(guān)系數(shù)r≥0.975。

1.6 臨床可報(bào)范圍（CRR）評(píng)價(jià)

選取L1、L2、L3等3個(gè)濃度水平的標(biāo)本分別進(jìn)行1∶2、1∶5、1∶8、1∶10稀釋倍數(shù)檢測(cè)D-二聚體，測(cè)量值與預(yù)測(cè)值進(jìn)行比較，計(jì)算出稀釋回收率。可接受的稀釋回收率范圍為90%～110%。結(jié)合試劑廠家給定的檢測(cè)靈敏度0.03 mg/L和最大稀釋倍數(shù)來(lái)確定CRR。

1.7 抗干擾物質(zhì)實(shí)驗(yàn)

從臨床標(biāo)本中留取實(shí)驗(yàn)用干擾血漿，其最高濃度分別為血紅蛋白（Hb）5.0 g/L、總膽紅素（TBiL）282 mmol/L、甘油三酯（TG）20.8 mmol/L、膽固醇（TC）12.4 mmol/L。各干擾物質(zhì)按100%、80%、60%、40%、20%的比例進(jìn)行稀釋?zhuān)瑢⒉煌瑵舛鹊母蓴_物質(zhì)和待測(cè)血漿按1∶9的比例混合，各樣本分別測(cè)定2次取均值，計(jì)算其影響度；影響度（%）=（加入后測(cè)定值-加入前測(cè)定值）/加入前測(cè)定值×100%。要求影響度（%）在±10%范圍內(nèi)。

2 結(jié)果

2.1 批內(nèi)和批間精密度評(píng)價(jià)

D-二聚體試劑廠家產(chǎn)品性能指標(biāo)要求CV＜15%，實(shí)驗(yàn)均達(dá)到要求，見(jiàn)表2。

表2 低高值質(zhì)控品批內(nèi)和批間計(jì)算精密度（n=20）

2.2 相關(guān)性分析評(píng)價(jià)

相關(guān)性分析評(píng)價(jià)采用t檢驗(yàn)，t=2.35，t＜t0.01(49)，P= 0.103＞0.01，CA-1500與CS-5100具有良好的線(xiàn)性關(guān)系，兩者比較無(wú)差異，見(jiàn)表3。

表3 CA-1500與CS-5100的相關(guān)實(shí)驗(yàn)（n=50）

2.3 分析測(cè)量范圍（AMR）評(píng)價(jià)

從表4可以看出，CA-1500檢測(cè)D-二聚體的線(xiàn)性范圍為0～5 mg/L。

表4 AMR實(shí)驗(yàn)方案實(shí)施結(jié)果

2.4 臨床可報(bào)范圍（CRR）評(píng)價(jià)

從表5可以看出，3個(gè)不同濃度的樣本經(jīng)過(guò)梯度稀釋后稀釋回收率最接近于100%的稀釋倍數(shù)為1∶8，故可視1∶8為最大稀釋倍數(shù)。結(jié)合AMR和檢測(cè)靈敏度（0.03 mg/L），可以確定CA-1500檢測(cè)D-二聚體的臨床可報(bào)告范圍為0.03～40 mg/L。

2.5 抗干擾物質(zhì)評(píng)價(jià)

從表6可以看出，計(jì)算出的影響度結(jié)果均在±10%范圍內(nèi)，表明4種干擾血漿在該濃度下不會(huì)影響D-二聚體的檢測(cè)結(jié)果。

表5 3個(gè)水平標(biāo)本（L1、L2、L3）D-二聚體稀釋回收率評(píng)價(jià)結(jié)果

表6 4種干擾血漿實(shí)驗(yàn)結(jié)果

3 討論

目前，由于生活環(huán)境改變和社會(huì)壓力增加，出血、止血相關(guān)疾病發(fā)病率在逐年上升，尤其是血栓疾病在近幾年有明顯增加。臨床實(shí)驗(yàn)室對(duì)D-二聚體的檢測(cè)也日漸重視。Sysmex CA-1500血凝儀在全國(guó)大中型醫(yī)院已推廣使用，該儀器利用免疫比濁法檢測(cè)D-二聚體也較為普遍。但D-二聚體檢測(cè)方法有多種，檢測(cè)儀器也有較多不同系列，本文研究了CA-1500檢測(cè)D-二聚體的性能評(píng)價(jià)，目的在于能夠給臨床提供統(tǒng)一、高效、可靠的檢測(cè)結(jié)果，能夠充分地被接受并應(yīng)用于臨床診治。

檢測(cè)系統(tǒng)或檢測(cè)方法的分析性能評(píng)價(jià)是臨床檢驗(yàn)質(zhì)量管理的重要內(nèi)容[2-4]。通過(guò)本研究結(jié)果可以了解到：D-二聚體的批內(nèi)和批間精密度評(píng)價(jià)均小于15%；同系列的Sysmex CA-1500與CS-5100具有良好的相關(guān)性（P=0.103＞0.01，r=0.935）；Sysmex CA-1500檢測(cè)D-二聚體的測(cè)量線(xiàn)性范圍為0～5 mg/L，基本上能夠滿(mǎn)足臨床需求；CRR評(píng)價(jià)最適合稀釋倍數(shù)為1∶8，結(jié)合線(xiàn)性范圍確定CRR為0.03～40 mg/L，如果遇到D-二聚體含量很高的標(biāo)本，檢測(cè)結(jié)果超出了CRR，筆者建議臨床可報(bào)范圍大于40mg/L，因?yàn)槟壳吧袩o(wú)相關(guān)文獻(xiàn)闡明D-二聚體濃度超過(guò)40 mg/L臨床意義有明顯不同。但如果臨床要求具體數(shù)值時(shí)，可手工稀釋即可，但結(jié)果僅供參考；4種干擾物質(zhì)實(shí)驗(yàn)影響度均小于±10%，說(shuō)明CA-1500檢測(cè)D-二聚體結(jié)果真實(shí)可靠，常見(jiàn)的干擾物質(zhì)影響度較小。從各個(gè)性能評(píng)價(jià)結(jié)果可知，各參數(shù)皆符合CLIA′88法案的要求（美國(guó)臨床實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)化協(xié)會(huì)修正方案CLSI-CLIA′88）?？傊治鰞x器和檢測(cè)試劑的檢測(cè)性能水平是實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量的重要保證，而檢測(cè)人員的規(guī)范操作以及對(duì)儀器和方法學(xué)的理解和運(yùn)用也不容忽視，畢竟再先進(jìn)的儀器、再精準(zhǔn)的試劑也是由人員來(lái)操作的。

[1]Clinical and Laboratory Standards Institute.Evaluation of the linearityof quantitative analytical methods：approved guideline（EP6-A）[S]. Wayne：CLSI，2004.

[2]張秀明，莊俊華，鄭松柏.臨床化學(xué)發(fā)光免疫法檢測(cè)AFP的分析性能驗(yàn)證與實(shí)驗(yàn)方法[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2007，30（11）：1 293-1 297.

[3]唐筑靈，徐國(guó)賓.快速免疫熒光法測(cè)定血漿NT-proBNP的分析性能評(píng)價(jià)[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2010，33（12）：1 208-1 212.

[4] 國(guó)秀芝，邱玲，劉荔.三種用于自動(dòng)生化分析儀的半胱氨酸抑制酶C試劑的分析性能驗(yàn)證[J].中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2011，34（6）：561-567.

（收稿：2014-02-18 修回：2014-05-08）

Experimental performance evaluation by CA-1500 blood coagulation analyzer for D-dimer by immune turbidimetry

ZHANG Jin-biao1,DAI Rong-qin2,LIN Jia-jing1,LI Juan1,ZHAI Wen-yan1
（1.Department of Clinical Laboratory,Cangzhou Hospital of Traditional Chinese and Western Medicine，Cangzhou 061001, Hebei Province,China;2.Laboratory Section of Microbiology,Immunology and Biochemistry,Cangzhou Medical College, Cangzhou 061001,Hebei Province,China）

ObjectiveTo evaluate the experimental performance of CA-1500 blood coagulation analyzer for D-dimer. MethodsAccording to series of files issued by CLSI,CA-1500 blood coagulation analyzer was applied to D-dimer test and assessed for the within-assay precision,interassay precision,correlation analysis,analytical measurement range (AMR),clinical reportable range(CRR),maximal dilution rate and etc.Low-and high-value calibrators were used to detect the precision.Totally 50 sodium citrate anticoagulation blood samples were selected randomly from the outpatients and inpatients,and then the correlation with CS-1500 blood coagulation analyzer was analyzed.CRRs were measured for the samples at normal level(L1),intermediate level(L2)and high level(L3).Interference tests were carried out with four kinds of interference plasmas of hemoglobin,bilirubin,triglyceride and cholesterol.ResultsThe within-assay precision and interassay precision of the high-value calibrators were both less than 15%.CA-1500 blood coagulation analyzer gained high correlation with CS-1500 analyzer,with P=0.103＞0.01 and r=0.935.The AMR of CA-1500 blood coagulation analyzer for D-dimer was between 0 and 5 mg/L.The optimal dilution rate for CRR was 1/8,and CRR was determined between 0.03 and 40 mg/L.Interference tests proved that the influence degrees were all less than±10%.ConclusionCA-1500 blood coagulation analyzer has its experimental performance meet the requirements of the manufacturer and series files issued by CLSI,and can provide references at precision,correlation,AMR,CRR,anti interference and etc.[Chinese Medical Equipment Journal，2014，35（11）：95-97]

blood coagulation analyzer;D-dimer;performance evaluation

R318.6；TH776

A

1003-8868（2014）11-0095-03

10.7687/J.ISSN1003-8868.2014.11.095

張金彪（1980—），男，主要從事臨床檢驗(yàn)、血液學(xué)檢驗(yàn)方面的研究工作。

061001河北滄州，河北省滄州中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院實(shí)驗(yàn)診斷科（張金彪，林佳靜，李 涓，翟文燕）；061001河北滄州，滄州醫(yī)專(zhuān)微免生化檢驗(yàn)教研室（代榮琴）