沈偉鵬，劉加軍，徐妍

急性白血病P53蛋白表達與化療效果的關(guān)系

沈偉鵬，劉加軍，徐妍

目的探討急性白血?。ˋL）P53蛋白表達水平及其與化療效果的關(guān)系。方法選取AL患者38例（初治組30例，難治復(fù)發(fā)組8例）、緩解組患者21例、骨髓象正常的非白血病患者16例（對照組）；AL各組又分為急性髓系白血?。ˋML）和急性淋巴細胞白血?。ˋLL）。使用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（SP）對各組骨髓細胞中的P53蛋白表達狀況進行檢測。結(jié)果初治組與難治復(fù)發(fā)組的P53蛋白表達率均明顯高于緩解組（均＜0.05），而緩解組P53蛋白表達水平與對照組差異無統(tǒng)計學意義（＞0.05）。各組AML與ALL患者間P53蛋白表達狀況差異無統(tǒng)計學意義（＞0.05）。結(jié)論P53蛋白的過度表達參與了AL的發(fā)病，P53水平檢測可預(yù)測AL患者的化療效果及預(yù)后。

白血??；蛋白質(zhì)p53；抗腫瘤聯(lián)合化療方案

目前急性白血病（AL）的治療仍以化療為主，而據(jù)研究報道，大多數(shù)化療藥物是通過誘導(dǎo)白血病細胞的凋亡來發(fā)揮抗腫瘤作用的[1]。目前已知，P53基因是人體內(nèi)研究最透徹、功能最強大的一種腫瘤抑制基因，人類50%以上腫瘤的發(fā)生都與P53基因的突變有關(guān)。P53基因可分為野生型與突變型兩種，野生型P53基因被譽為“基因組衛(wèi)士”，其編碼的野生型P53蛋白具有維持基因組的穩(wěn)定性、阻滯細胞周期、促進細胞凋亡及抑制腫瘤血管的生成等多重抑癌作用[2]。但是半衰期極短，野生型僅在組織中少量表達。而P53基因突變后，不僅失去對細胞生長、凋亡的調(diào)控作用，而且可使帶有突變堿基的細胞不斷復(fù)制，由抑癌作用轉(zhuǎn)變?yōu)榇侔┳饔?，?dǎo)致腫瘤的發(fā)生[3-4]。突變型P53基因在多種實體瘤中表達增加，且在腫瘤發(fā)生發(fā)展中發(fā)揮明確的促癌作用，但對于P53蛋白表達水平與AL化療效果的關(guān)系的報到尚不多見，因此，本實驗回顧性分析了59例白血病患者P53蛋白表達水平與化療效果的關(guān)系，報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2010年8月至2012年12月寧波市第二醫(yī)院血液科接受治療的AL患者38例，包括初治組30例，難治復(fù)發(fā)組8例。兩組中急性髓系白血病（AML）14例，急性淋巴細胞白血?。ˋLL）24例。其中男23例，女15例；年齡7～68歲，中位年齡43歲。選取緩解組患者21例，包括AML 5例，ALL 16例。選取16例骨髓象正常的非白血病患者作為對照組，其中男9例，女7例；年齡11～63歲，中位年齡39歲。

1.2 實驗方法所有入選病例均抽取骨髓液2ml并進行分離涂片，自然晾干后用乙醚乙醇液固定，再次晾干后用錫紙封存于4℃冰箱中備用。染色采用鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結(jié)法（SP），所用鼠抗人P53單克隆抗體及SP通用試劑盒（SP0000）均購自北京中山生物技術(shù)有限公司。從冰箱中取出備用標本，自然干燥后使用正常羊血清封閉標本10min，棄血清，滴加一抗并于4℃濕盒內(nèi)過夜（P53，1∶100稀釋），磷酸鹽緩沖液（PBS）沖洗，滴加羊抗鼠二抗（1∶200稀釋）1 h，滴加辣根過氧化物酶標記的鏈霉卵白素在37℃下孵育20min，PBS沖洗，二氨基聯(lián)苯胺（DAB）顯色液顯色，終止反應(yīng)，流水沖洗后蘇木素復(fù)染，硅膠封片。

1.3 結(jié)果判定P53蛋白陽性細胞為胞漿和/胞核呈棕黃色者，顯微鏡下計算1 000個細胞中的陽性細胞數(shù)及陽性細胞百分率。

1.4 統(tǒng)計方法采用SPSS12.2統(tǒng)計軟件進行分析，計量資料以均數(shù)±標準差表示，多組間比較采用方差分析，組間比較采用檢驗。＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

表1 各組P53蛋白陽性表達率及與化療效果的關(guān)系

3 討論

迄今為止，P53基因是人們發(fā)現(xiàn)的與腫瘤的發(fā)生關(guān)系最為密切的基因，定位于人類第17號染色體上，其編碼的野生型P53蛋白作為一種轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白，可阻止白血病細胞由G0/G1期進入S期，從而誘導(dǎo)細胞凋亡，發(fā)揮其抗腫瘤作用[5]。突變型P53蛋白卻是一種腫瘤刺激因子，可消除正常P53蛋白的抗腫瘤作用。國內(nèi)外的大量研究也證實，引起腫瘤形成的P53蛋白是P53基因突變后所形成的產(chǎn)物。正常細胞中，野生型P53蛋白含量極低，但當P53發(fā)生突變時，P53蛋白表達產(chǎn)物將急劇增加。

由于野生型P53蛋白易于水解，半衰期極短，所以實驗中以SP免疫組化法所檢測到的P53均為突變型P53蛋白。本文結(jié)果顯示，化療緩解后，AL患者骨髓細胞中的突變型P53蛋白較化療前及復(fù)發(fā)者明顯降低，且與正常人體內(nèi)的P53水平差異無統(tǒng)計學意義。而化療前及白血病復(fù)發(fā)者骨髓細胞中的P53水平較正常人明顯增高。此結(jié)果提示，突變型P53基因的表達不僅參與了AL的發(fā)病過程，而且會隨著AL病情的緩解而減弱。另外，難治復(fù)發(fā)組的P53陽性表達率明顯高于初治組，提示P53的高表達可是白血病細胞凋亡受阻而影響AL的緩解。以上結(jié)果說明P53的表達在化療后療效密切相關(guān)。臨床可根據(jù)P53的表達水平預(yù)測急性白血病患者對化療的敏感性，及其預(yù)后情況。

[1]史劍慧,許小平,程文英,等.白血病細胞p53和bcl-2表達與化療藥物誘導(dǎo)凋亡的關(guān)系,[J].中華內(nèi)科雜志,2000,39(3):5-9.

[2]陳元仲,吳勇,梁敏,等.P53基因誘導(dǎo)白血病細胞凋亡的機制研究[J].中華血液學雜志,2003,24(12):640-643.

[3]張建清,王志林.P53基因異常在白血病患者中的研究[J].臨床和實驗醫(yī)學雜志, 2010,9(21):1603-1605.

[4]石太新,趙衛(wèi)星,朱鳳蓮,等.急性白血病緩解前后P53、Bcl-2蛋白的表達意義[J].實用兒科臨床雜志,2001,16(3):132-133.

[5]鄒昭玲,曹祥山,王志林.復(fù)雜核型白血病患者的P53基因異常及臨床意義[J].中華醫(yī)學遺傳學雜志,2010,27(1):81-85.

10.3969/j.issn.1671-0800.2014.12.050

R733.7

A

1671-0800(2014)12-1548-02

315400 浙江省余姚，余姚市第二人民醫(yī)院（沈偉鵬）；中山大學附屬第三醫(yī)院（劉加軍）；寧波市第二醫(yī)院（徐妍）

徐妍，Email：xuyan5584@ 163.com