李俊華，魯衍強(qiáng)，馬少杰*，趙玉娟，楊 琦

(1.廊坊市婦幼保健中心，河北廊坊065000;2.上海靶向分子醫(yī)學(xué)研究所，上海200433;3.中國(guó)疾病預(yù)防控制中心婦幼保健中心，北京100101)

5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶(5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR)和甲硫氨酸合成酶還原酶(5-methyltetrahydrofolate-homocysteine methyltransferase reductase，MTRR)是參與體內(nèi)葉酸代謝的關(guān)鍵酶，其基因多態(tài)性會(huì)影響體內(nèi)葉酸及同型半胱氨酸水平，與神經(jīng)管畸形、復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓疾病的發(fā)生密切相關(guān)，嚴(yán)重影響母嬰健康。

本研究針對(duì)廊坊市漢族女性，開展大樣本的分子流行病學(xué)調(diào)查，旨在闡明本地區(qū)人群的遺傳特征，為個(gè)體化的孕期保健提供依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 一般資料:選取自2013年6月至2014年1月在廊坊市婦幼保健中心進(jìn)行孕前與孕期檢查的漢族女性，排除籍貫非本市者，入組對(duì)象共1 267 例，平均年齡(27.3 ±4.9)歲。根據(jù)知情同意原則，采集口腔黏膜細(xì)胞。

1.2 方法:利用硅膠吸附方法提取口腔黏膜細(xì)胞樣本的基因組DNA。采用熒光定量PCR 技術(shù)，檢測(cè)MTHFR C677T、A1298C 和MTRR A66G 的基因多態(tài)性。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS19.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，應(yīng)用HaploView4.2 軟件進(jìn)行SNPs 的Hardy-Weinberg 平衡、LD水平和單倍型結(jié)構(gòu)分析。

2 結(jié)果

2.1 Hardy-Weinberg 平衡分析:MTHFR C677T、A1298C 和MTRR A66G 基因多態(tài)性，檢驗(yàn)結(jié)果符合Hardy-Weinberg 遺傳平衡，說明樣本具有本區(qū)域群體代表性。

2.2 MTHFR 和MTRR 基因型和等位基因頻率:如表1、表2所示，MTHFR C677T、A1298C 位點(diǎn)和MTRR A66G 位點(diǎn)的基因型和等位基因頻率。

2.3 MTHFR C677T 和A1298C 兩位點(diǎn)連鎖情況及單倍型分析:MTHFR C677T 和A1298C 兩位點(diǎn)組合情況見表3。單倍型分析表明，存在3 種組合:677T-1298A(58.3%)、677C-1298A(28.1%)、677C-1298C(13.6%)。兩位點(diǎn)間存在完全連鎖不平衡現(xiàn)象(D'=1)，與貴州布依族和苗族人群的報(bào)道類似［1］。

表1 廊坊市漢族女性MTHFR、MTRR 基因型頻數(shù)和頻率Table 1 MTHFR and MTRR genotype distribution and frequencies among Han women in Langfang City［n(%)］

表2 廊坊市漢族女性MTHFR、MTRR 等位基因頻數(shù)和頻率Table 2 MTHFR and MTRR allele frequencies among Han women in Langfang City［n(%)］

表3 MTHFR C677T 和A1298C 連鎖型分布Table 3 MTHFR C677T and A1298C linkage analysis［n(%)］

3 討論

出生缺陷是中國(guó)嚴(yán)重的公共衛(wèi)生問題和社會(huì)問題。河北是中國(guó)出生缺陷高發(fā)省份之一，2001—2012年出生缺陷監(jiān)測(cè)結(jié)果顯示，出生缺陷總發(fā)生率呈逐年上升趨勢(shì)，先天性心臟病、多指(趾)、總唇裂、總外耳其他畸形、先天性腦積水、神經(jīng)管畸形是排名前6 位的出生缺陷種類［2］。出生缺陷的發(fā)生受環(huán)境、營(yíng)養(yǎng)和遺傳因素的共同影響。作為參與體內(nèi)葉酸代謝的關(guān)鍵酶，MTHFR C677T 和A1298C 位點(diǎn)的多態(tài)性會(huì)降低酶活性，影響葉酸代謝和利用，與神經(jīng)管畸形、先天性心臟病、唇腭裂、唐氏綜合征等出生缺陷，以及復(fù)發(fā)性流產(chǎn)、妊娠期高血壓等孕期疾病密切相關(guān)。

廊坊市漢族女性MTHFR C677T、A1298C 和MTRR A66G位點(diǎn)多態(tài)性與其他地區(qū)［3］漢族女性的頻率存在差異。這種差異可能與人群對(duì)多種疾病的群體易感性有關(guān)。北方飲食習(xí)慣所致的膳食葉酸攝入不足(營(yíng)養(yǎng)因素)在MTHFR、MTRR基因多態(tài)性(遺傳因素)的作用下，更增加了神經(jīng)管畸形、先天性心臟病、唇腭裂等出生缺陷的發(fā)病風(fēng)險(xiǎn)。遺傳因素如何與營(yíng)養(yǎng)因素、環(huán)境因素綜合作用導(dǎo)致出生缺陷的發(fā)生，仍需深入研究。

［1］張婷，謝淵，李毅，等.貴州3 個(gè)民族亞甲基四氫葉酸還原酶基因的遺傳多態(tài)性［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2013，42:3413-3415.

［2］李進(jìn)華，張英奎，趙麗娜，等.2001～2012年河北省主要出生缺陷發(fā)生率及變化趨勢(shì)分析［J］.中國(guó)婦幼保健，2013，28:4767-4771.

［3］王維鵬，魯衍強(qiáng)，芮欣憶，等.湖北省漢族女性亞甲基四氫葉酸還原酶和甲硫氨酸合成酶還原酶基因多態(tài)性分布研究［J］.中國(guó)婦幼保健，2013，28:140-143.