周 瀛，侯立朝，任 利，李衍飛

(青海大學(xué)附屬醫(yī)院肝膽外科，青海西寧810001)

幽門螺桿菌(Helicobacter pylori，Hp)已被世界衛(wèi)生組織列為Ⅰ類致癌物，與胃癌和原發(fā)性肝癌等的發(fā)生密切相關(guān)［1］。為探討Hp 感染與腫瘤增殖、凋亡及侵襲的關(guān)聯(lián)，本研究就Hp 感染與膽囊癌組織中Ki67、MMP2 及Fas 表達(dá)的關(guān)系進(jìn)行研究。

1 資料與方法

1.1 資料:收集青海大學(xué)附屬醫(yī)院2010年5月至2013年8月原發(fā)性膽囊癌手術(shù)切除病理組織石蠟標(biāo)本124 例，所有患者術(shù)前未經(jīng)放化療治療。男性73 例，女性51 例，平均年齡56.7 歲。另選擇同期進(jìn)行肝臟手術(shù)切除或膽囊手術(shù)常規(guī)切除膽囊30 例作為對(duì)照組，標(biāo)本均為正常組織，其中男性18例，女性12 例，平均年齡51.2 歲。兩組在年齡、性別方面無(wú)顯著性差異。所有標(biāo)本均經(jīng)10%甲醛溶液固定，常規(guī)脫水、透明、浸蠟和石蠟包埋，并均經(jīng)HE 染色后確認(rèn)病理診斷，臨床資料完整。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，實(shí)施前簽定患者知情同意書(shū)。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑:兔抗人Ki67 抗體、鼠抗人Fas 抗體(武漢博士德生物工程有限公司);鼠抗人MMP-2 抗體(上海太陽(yáng)生物技術(shù)有限公司);免疫組化試劑盒(北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司)。

1.2.2 Hp 檢測(cè):采用W-S 銀染色法與快速尿素酶試驗(yàn)兩種方法聯(lián)合檢測(cè)Hp，檢測(cè)結(jié)果均為陽(yáng)性者判斷為陽(yáng)性，均陰性者判斷為陰性，單陽(yáng)性者退出實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 免疫組化及結(jié)果判定:采用S-P 法二步，操作按照試劑盒說(shuō)明書(shū)進(jìn)行，用PBS 替代一抗作為陰性對(duì)照。采用雙盲法觀察陽(yáng)性反應(yīng)。以細(xì)胞被染成黃色或棕色為陽(yáng)性細(xì)胞，隨機(jī)選擇6 個(gè)高倍視野，每個(gè)視野計(jì)數(shù)400 個(gè)細(xì)胞，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞數(shù)所占的百分比均值，當(dāng)此均值＞10%即為陽(yáng)性表達(dá)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:用SPSS 17.0 軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理，組間比較采用卡方檢驗(yàn)，兩變量關(guān)聯(lián)性分析采用Spearman 相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 Hp、Ki67、MMP2 和Fas 在膽囊癌及對(duì)照組中的表達(dá)情況:膽囊癌組Hp、Ki67 和MMP2 陽(yáng)性率均顯著高于對(duì)照組(P＜0.01)、而Fas 陽(yáng)性率顯著低于對(duì)照組(P＜0.01)(表1)。

2.2 膽囊癌中Hp 感染與Ki67、MMP2 和Fas 抗原表達(dá)的相關(guān)性:膽囊癌患者中Hp 陽(yáng)性表達(dá)組的Ki67 陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于Hp 陰性組(P＜0.001)，膽囊癌中Hp 檢出率與Ki67 陽(yáng)性表達(dá)正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r=0.326，P＜0.01)。膽囊癌中Hp陽(yáng)性組的MMP2 陽(yáng)性表達(dá)率顯著高于Hp 陰性組(P＜0.001)，膽囊癌中Hp 檢出率與MMP2 陽(yáng)性表達(dá)正相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r =0.654，P＜0.01)。膽囊癌中Hp 陽(yáng)性表達(dá)組的Fas 陽(yáng)性表達(dá)率低于Hp 陰性組(P＜0.01)，膽囊癌中Hp 檢出率與Fas 陽(yáng)性表達(dá)負(fù)相關(guān)(相關(guān)系數(shù)r = －0.259，P＜0.01)(表2)。

3 討論

研究發(fā)現(xiàn)，在日本和泰國(guó)83%的膽管癌和膽囊癌患者膽汁中檢出Hp，而僅有29%膽囊炎患者檢測(cè)到Hp［2］。Ki67目前被認(rèn)為是可靠而全面地反映細(xì)胞群體增值活性的客觀指標(biāo)。在本研究中，Ki67 在膽囊癌中檢出的陽(yáng)性率明顯增高，且與Hp 感染呈正相關(guān);MMP2 在癌細(xì)胞的侵襲和轉(zhuǎn)移中起重要作用，本研究中MMP2 在膽囊癌中陽(yáng)性率明顯增高，且與Hp 感染呈正相關(guān)。國(guó)內(nèi)研究［3］顯示Fas 在正常宮頸組織中陽(yáng)性率較高，而在宮頸癌組織中Fas 的陽(yáng)性率顯著下降，與本研究結(jié)果一致，F(xiàn)as 在膽囊癌中陽(yáng)性率下調(diào)，與Hp感染呈負(fù)相關(guān)。以上研究結(jié)果提示Hp 感染與膽囊癌細(xì)胞增殖、凋亡及侵襲有關(guān)。

表1 膽囊癌及對(duì)照組中Hp 感染、Ki67、MMP2 及Fas 抗原檢測(cè)Table 1 The detection of Hp，Ki67，MMP2 and Fas antigen for gallbladder carcinoma and control group

表2 膽囊癌Hp 感染與Ki67、MMP2 及Fas 表達(dá)的關(guān)系Table 2 The relationship between Hp expression and Ki67，MMP2，F(xiàn)as expression in gallbladder carcinoma cells

［1］Wang L，Zollinger T，Zhang J.Association between Helicobacter pylori infection and liver cancer mortality in 67 rural Chinese counties［J］.Cancer Causes Control，2013，24:1331-1337.

［2］Matsukura N，Yokomuro S，Yamada S，et al.Association between Helicobacter bilis in bile and biliary tract malignancies:H.bilis in bile from Japanese and Thai patients with benign and malignant diseases in the biliary tract［J］.Cancer Sci，2002，93:842-847.

［3］張文淵，黃筱纮，平金良.Survivin、Fas 在宮頸癌中的表達(dá)及意義［J］.腫瘤學(xué)雜志，2013，19:605-609.