段愛紅 孫志強(qiáng) 楊麗萍 胡志強(qiáng)

1.河北省邯鄲市中心醫(yī)院婦科，河北邯鄲056001；2.河北省邯鄲市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，河北邯鄲056001；3.河北省邯鄲市中心醫(yī)院放射科，河北邯鄲056001

Nestin 和Ki67在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及臨床意義

段愛紅1孫志強(qiáng)2楊麗萍1胡志強(qiáng)3

1.河北省邯鄲市中心醫(yī)院婦科，河北邯鄲056001；2.河北省邯鄲市中心醫(yī)院神經(jīng)外科，河北邯鄲056001；3.河北省邯鄲市中心醫(yī)院放射科，河北邯鄲056001

目的探討Nestin及Ki67在卵巢上皮性癌組織中的表達(dá)及其與臨床病理特征的關(guān)系。方法對(duì)2007年1月～2009年1月邯鄲市中心醫(yī)院婦科60例卵巢癌患者及20例卵巢正?；颊叩牟±碣Y料進(jìn)行回顧性分析，采用免疫組化SP法檢測(cè)卵巢上皮性癌標(biāo)本及正常組織中Nestin及Ki67的表達(dá)，分析并比較正常卵巢組織及不同病理類型、FIGO分期、殘余腫瘤直徑的卵巢組織中Nestin及Ki67的表達(dá)情況。結(jié)果①卵巢上皮性癌標(biāo)本中Nestin和Ki67陽(yáng)性表達(dá)率（38.5%、76.7%）明顯高于正常卵巢組織（5.0%、15.0%），兩者相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。②組織分化程度高級(jí)別的卵巢癌組織中Nestin及Ki67陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于低級(jí)別者（P＜0.05）；FIGO分期越高、殘余腫瘤直徑越大，Nestin、Ki67陽(yáng)性表達(dá)率越高（均P＜0.05）。③Nestin與Ki67在卵巢癌中的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性（r=0.176，P=0.13）。結(jié)論Nestin與Ki67的表達(dá)與卵巢癌的發(fā)生、發(fā)展有密切關(guān)系，對(duì)Nestin與Ki67的檢測(cè)可用于判斷卵巢上皮性腫瘤的惡性程度及其預(yù)后。

卵巢癌；Nestin；Ki67；免疫組化

卵巢上皮性癌（epithelial ovaian cance，EOC）簡(jiǎn)稱卵巢癌，占卵巢惡性腫瘤的90%，是病死率最高的生殖道惡性腫瘤，卵巢癌屬于對(duì)化療中-高度敏感腫瘤，目前的標(biāo)準(zhǔn)治療是腫瘤細(xì)胞減滅術(shù)輔以鉑類為基礎(chǔ)的6～8個(gè)療程的聯(lián)合化療。70%的患者停止化療后會(huì)復(fù)發(fā)，復(fù)發(fā)患者的治療仍以化療為主，但多數(shù)患者表現(xiàn)為化療耐藥，5年生存率為30%左右[1]。迄今，卵巢癌的病死率仍位于婦科惡性腫瘤之首。本研究采用免疫組化SP法檢測(cè)原發(fā)性卵巢癌中Nestin與Ki67的表達(dá)情況，并分析其與卵巢癌臨床病理的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

對(duì)2007年1月～2009年1月邯鄲市中心醫(yī)院婦科60例卵巢癌患者的病理資料進(jìn)行回顧性分析，所以卵巢癌患者術(shù)前均未接受化療或放療，術(shù)后均經(jīng)病理確診，病歷資料完整。年齡31～66歲；漿液性腺癌25例，宮內(nèi)膜樣癌24例，黏液性腺癌11例；2009年國(guó)際婦產(chǎn)科聯(lián)盟（FIGO）[2]手術(shù)-病理分期：Ⅰ期8例，Ⅱ期5例，Ⅲ期40例，Ⅳ期7例；組織分化程度低級(jí)別相當(dāng)于FIGO高中分化（G1/G2）者38例、高級(jí)別相當(dāng)于低分化（G3）者22例；術(shù)后殘余腫瘤直徑＜1 cm者48例，≥1 cm者12例。同時(shí)選擇同期20例因子宮肌瘤等子宮良性病變行手術(shù)治療的正常卵巢組織進(jìn)行對(duì)照研究。

1.2 主要試劑

鼠抗人單克隆抗體及免疫組化S-P試劑盒購(gòu)自福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司。免疫組化方法采用S-P，以PBS代替一抗為陰性對(duì)照，陽(yáng)性對(duì)照片由福州邁新生物技術(shù)開發(fā)公司提供。

1.3 方法

采用免疫組化SP法檢測(cè)卵巢上皮性癌標(biāo)本及正常卵巢組織中Nestin及Ki67的表達(dá)，具體方法按試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

1.4 判斷標(biāo)準(zhǔn)

Nestin陽(yáng)性細(xì)胞為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，Ki67以細(xì)胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽(yáng)性。判定標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)棕黃色顆粒為（-）；染色弱、染色范圍＞50%或染色強(qiáng)、染色范圍25%～50%者為（＋）；染色強(qiáng)，染色范圍＞75%者為（+++）；介于（+）和（+++）之間為（++），（+）及以上者為陽(yáng)性表達(dá)[3]。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

采用SPSS 14.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)數(shù)資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗(yàn)；Spearman相關(guān)性檢驗(yàn)分析Nestin與Ki67在卵巢癌中表達(dá)的相關(guān)性，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Nestin與Ki67在正常卵巢及卵巢癌組織中的表達(dá)情況

Nestin的染色陽(yáng)性為細(xì)胞質(zhì)內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒，Ki67的染色陽(yáng)性為胞核內(nèi)出現(xiàn)棕黃色顆粒（圖1、2）。Nestin及Ki67在正常卵巢組織中的陽(yáng)性表達(dá)率（5.0%、15.0%）低于卵巢癌組織中（38.5%、76.7%），兩者相比，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05）。見表1。

圖1 卵巢癌組織中Nestin的表達(dá)（DAB×400）

圖2 卵巢癌組織中Ki67的表達(dá)（DAB×400）

表1 不同卵巢組織中Nestin和Ki67的表達(dá)情況

2.2 卵巢癌組織中Nestin、Ki67的表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系

Nestin及Ki67在漿液性、黏液性、子宮內(nèi)膜樣卵巢癌組織中的陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。在不同的卵巢癌組織分化程度中，高級(jí)別者Nestin及Ki67的陽(yáng)性表達(dá)率明顯高于低級(jí)別者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；在FIGOⅠ～Ⅱ期卵巢癌中Nestin及Ki67表達(dá)的陽(yáng)性率明顯低于FIGOⅢ～Ⅳ期，兩者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），殘余腫瘤＜1 cm與≥1 cm者Nestin陽(yáng)性表達(dá)率分別為37.5%、75.0%，Ki67陽(yáng)性表達(dá)分別為56.3%、91.7%，兩種殘余腫瘤相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

表2 不同臨床病理卵巢癌組織與Nestin和Ki67表達(dá)的關(guān)系

2.3 Nestin與Ki67在卵巢癌中表達(dá)的相關(guān)性

31例卵巢癌組織中，Nestin和Ki67均為陽(yáng)性表達(dá)，Ki67表達(dá)陽(yáng)性而Nestin陰性表達(dá)者23例，Nestin陽(yáng)性表達(dá)而Ki67陰性表達(dá)者17例；采用計(jì)數(shù)資料的相關(guān)分析顯示，Nestin與Ki67在卵巢癌中的表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性（r=0.176，P=0.13）。

3 討論

腫瘤的發(fā)生、發(fā)展是多階段、多步驟演變的過(guò)程，最終在生物學(xué)方面表現(xiàn)為失控性生長(zhǎng)，即過(guò)度增殖。腫瘤細(xì)胞的過(guò)度惡性增殖又為進(jìn)一步侵入脈管發(fā)生遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移奠定了基礎(chǔ)，而后者也正是導(dǎo)致死亡的最主要因素，在腫瘤研究中發(fā)現(xiàn)，Nestin是第Ⅳ類中間絲蛋白，目前被廣泛應(yīng)用于神經(jīng)干細(xì)胞的鑒定，最新研究發(fā)現(xiàn)Nestin在多種惡性腫瘤細(xì)胞中均有表達(dá)，如惡性膠質(zhì)瘤、胃腸道間質(zhì)腫瘤、睪丸間質(zhì)腫瘤、惡性黑色素瘤，Nestin表達(dá)強(qiáng)度和腫瘤惡性程度和預(yù)后呈正相關(guān)，如在黑色素瘤中，惡性度越高Nestin表達(dá)越強(qiáng)，在遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移的腫瘤中Nestin表達(dá)更強(qiáng)；惡性度低的大腦膠質(zhì)瘤Nestin表達(dá)強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于惡性度高者[4-7]。

本研究應(yīng)用免疫組織化學(xué)方法首次檢測(cè)了Nestin在不同惡性程度卵巢癌中的表達(dá)，研究結(jié)果顯示，Nestin表達(dá)于部分卵巢癌標(biāo)本中，在卵巢癌組織中Nestin的陽(yáng)性表達(dá)率與組織類型無(wú)關(guān)（P＞0.05）；Nestin陽(yáng)性表達(dá)率隨FIGO分期的進(jìn)展而升高，Ⅲ～Ⅳ期與Ⅰ～Ⅱ期相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），殘余腫瘤＞1 cm組和殘余腫瘤＜1 cm組中陽(yáng)性表達(dá)率分別為75.0%、37.5%，二者相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。徐亮等[8]通過(guò)將Nestin和CD133作為干細(xì)胞標(biāo)志物檢測(cè)其在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)，其結(jié)果顯示隨著膠質(zhì)瘤腫瘤級(jí)別的增高，腫瘤標(biāo)志物Nestin表達(dá)也增加，Kaplan-Meier生存曲線分析表明，Nestin高表達(dá)組患者生存率低，低表達(dá)組生存率高。

本研究提示Nestin可作為判斷卵巢癌惡性程度及預(yù)后的一種指標(biāo)，Nestin表達(dá)越高，腫瘤組織中CSCs的數(shù)量越多，腫瘤的惡性程度就越高，在卵巢癌疾病發(fā)展過(guò)程中表現(xiàn)出耐藥，其預(yù)后越差，生存率越低，從而預(yù)測(cè)腫瘤的惡性程度及患者的生存率，為卵巢癌的診斷和預(yù)后判斷提供幫助。

Ki67是反映惡性腫瘤細(xì)胞增殖活性的一項(xiàng)重要分子標(biāo)志，其表達(dá)范圍覆蓋了除G0期以外的各增殖周期細(xì)胞，是目前檢測(cè)腫瘤增殖活性和增殖速率最可靠的指標(biāo)[9-11]。有研究認(rèn)為Ki67可能是具有蛋白結(jié)合特性的重要結(jié)構(gòu)，在細(xì)胞有絲分裂中起著維持規(guī)則DNA結(jié)構(gòu)的重要作用，Ki67對(duì)于預(yù)見腫瘤生物學(xué)行為，評(píng)估預(yù)后和選擇適當(dāng)?shù)闹委煷胧┚哂兄卮笠饬x[12-15]。Ki67在漿液性腺癌、內(nèi)膜樣癌、黏液性腺癌中的陽(yáng)性表達(dá)差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05），說(shuō)明Ki67表達(dá)與細(xì)胞類型無(wú)關(guān)。Ki67陽(yáng)性表達(dá)率隨FIGO分期的進(jìn)展而升高，Ⅲ期～Ⅳ期與Ⅰ期～Ⅱ期相比，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；殘余腫瘤＜1 cm與殘余腫瘤≥1 cm的陽(yáng)性表達(dá)相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），這表明晚期及高級(jí)別卵巢癌具有更高的增殖活性，Ki67的表達(dá)可用于判斷卵巢癌惡性程度與與腫瘤的侵襲性，這與國(guó)內(nèi)外學(xué)者的研究結(jié)果一致[16]。

綜上所述，腫瘤的生物學(xué)行為包括增殖、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)等涉及到許多生物因子和蛋白的表達(dá)，本研究顯示，卵巢組織中Nestin和Ki67表達(dá)無(wú)明顯相關(guān)性，二者表達(dá)上調(diào)可能與卵巢癌的發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移過(guò)程相關(guān)，與患者的組織學(xué)類型無(wú)關(guān)。因此，本研究認(rèn)為聯(lián)合檢測(cè)Nestin和Ki67有利于闡明二者在卵巢腫瘤發(fā)生發(fā)展、浸潤(rùn)、轉(zhuǎn)移中的演變規(guī)律，為卵巢癌早期診斷提供參考依據(jù)。

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Expression and clinical significance of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer

DUAN Aihong1SUN Zhiqiang2YANG Liping1HU Zhiqiang31.Department of Gynecology,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China;2.Department of Neurosurgery,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China;3.Department of Radiology,Central Hospital of Handan City,Hebei Province,Handan056001,China

Objective To investigate the expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer and the relationship between their expression and clinicopathologic characteristics.Methods pathological files of 60 patients with epithelial ovarian carcinoma and 20 patients with nomal ovarian tissues from January 2007 to January 2009 in Gynecology Department of Central Hospital of Handan City were retrospective analyzed,the Nestin and Ki67 were detected by immunohistochemistry(SP method),the expression of Nestin and Ki67 in nomal ovarian and epithelial ovarian cancer tissues with different pathological pattern,FIGO stages and residual tumor size were analyzed and compared.Results①The positive expression rate of Nestin Ki67 in ovarian epithelial carcinomas(38.5%,76.7%)were higher than those in normal ovarian tissues(5.0%，15.0%),the differences were statistically significant(all P＜0.05).②The positive expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer tissues with high differentiation degree was higher than those in with low differentiation degree(all P＜0.05).The higher FIGO stage and larger residual tumor size,the higher positive expression of Nestin and Ki67 in epithelial ovarian cancer tissues.③There was no significant correlation between Nestin and Ki67 expression(r=0.176,P=0.13).Conclusion The expressions of Nestin and Ki67 are associated with the development and progression of the ovarian epithelial neoplasm,the detection of Nestin and Ki67 may be helpful to estimate the malignant degree and prognosis of the epithelial ovarian carcinoma.

Ovarian cancer;Nestin;Ki67;Immunohistochemistry

R737.31

A

1673-7210（2014）02（b）-0024-04

2013-10-12本文編輯：任念）

段愛紅（1974.9-），女，碩士研究生，副主任醫(yī)師；研究方向：婦科腫瘤。