劉金娜，賈東升，馬春英，劉銘，謝曉亮，*，楊太新，*，溫春秀

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，河北保定071000；2.河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，河北石家莊050051）

蒲公英黃酮及蛋白含量的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律研究

劉金娜1，2，賈東升2，馬春英1，劉銘2，謝曉亮2，*，楊太新1，*，溫春秀2

（1.河北農(nóng)業(yè)大學(xué)農(nóng)學(xué)院，河北保定071000；2.河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所，河北石家莊050051）

探討不同類型蒲公英總黃酮及可溶性蛋白的動(dòng)態(tài)變化規(guī)律。根據(jù)植物學(xué)特性及種質(zhì)來源不同將蒲公英分為栽培種質(zhì)1、栽培種質(zhì)2及野生3種類型，采用紫外-可見分光光度法，分別在波長(zhǎng)500 nm和595 nm下對(duì)蒲公英4個(gè)不同時(shí)期總黃酮和總蛋白的含量進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明：不同類型蒲公英中蛋白與黃酮含量隨時(shí)間均呈現(xiàn)先增后減的趨勢(shì)，180 d時(shí)含量均最高，其中栽培類型2中蛋白和黃酮的含量分別達(dá)（15.054 7±0.608 5）mg/g，（37.984 0± 0.735 6）mg/g顯著高于栽培類型1和野生類型。3種類型蒲公英黃酮與蛋白含量之間存在一定的正相關(guān)性。不同類型蒲公英中黃酮與蛋白的含量隨時(shí)間變化顯著。

蒲公英；黃酮；蛋白質(zhì)；紫外分光光度法

蒲公英為菊科植物蒲公英Taraxacum mongolicum Hand.-Mazz.、堿地蒲公英Taraxacum borealisinense Kitam.或同屬種植物的干燥全草，又稱蒲公草、婆婆丁、奶草汁等，味苦、甘、性寒，入肝胃二經(jīng)，富含三萜類、黃酮類、香豆精類、倍半萜內(nèi)酯類、乙酰乙酯類、植物甾醇、色素、揮發(fā)油等活性成分[1]，具有清熱解毒、消癰散結(jié)、利尿通淋治之功效，現(xiàn)代藥理研究還表明蒲公英具有抑菌、抗腫瘤、保肝利膽、促進(jìn)胃腸動(dòng)力、提高免疫力、清除自由基延緩衰老的作用[2]。除了藥用，蒲公英還可供食用，是一種營(yíng)養(yǎng)價(jià)值極高的野生蔬菜，也是開發(fā)天然綠色保健品的珍貴資源，目前市售的蒲公英花酒、蒲公英咖啡、蒲公英花粉、蒲公英根粉、蒲公英調(diào)味劑、糕點(diǎn)及各種飲料等保健食品，很受各界人士的青睞，在全國(guó)內(nèi)外市場(chǎng)很是走銷。因此加強(qiáng)蒲公英的基礎(chǔ)研究，并對(duì)其進(jìn)行深層次開發(fā)具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值。

蒲公英屬（Taraxacum）全世界約2 000余種，我國(guó)有70種，1變種品種繁雜，其中以蒲公英分布最廣，遍及全國(guó)，種質(zhì)資源豐富且較易獲得。目前對(duì)蒲公英的研究多側(cè)重于有效成分的提取及提取工藝方面的優(yōu)化上[3-4]，生理學(xué)指標(biāo)研究甚少[5]，目前關(guān)于蒲公英總黃酮與可溶性總蛋白隨時(shí)間變化的趨勢(shì)鮮有報(bào)道。

蒲公英黃酮具有廣譜抗菌性、還能抗病毒，延緩衰老；總蛋白不僅可以作為蒲公英食用價(jià)值的一個(gè)評(píng)判標(biāo)準(zhǔn)，在一定程度內(nèi)也可提高逆境脅迫下蒲公英對(duì)外界的抵抗能力。本試驗(yàn)以3種類型蒲公英為材料，測(cè)定分析了不同類型蒲公英4個(gè)不同時(shí)間段的黃酮及可溶性蛋白含量的變化，同時(shí)確定了蒲公英中黃酮與蛋白含量均較高時(shí)的最佳采收期及最宜藥食兩用的蒲公英種質(zhì)，為蒲公英的質(zhì)量分析及合理開發(fā)利用提供參考。

1 材料

1.1 材料

蒲公英均于2012年4月底播種在河北農(nóng)大標(biāo)本園，經(jīng)河北省農(nóng)林科學(xué)院藥用植物研究中心謝曉亮研究員鑒定為菊科植物蒲公英。

1.2 儀器與試劑

UV-2201型紫外可見分光光度計(jì)：日本島津；HANGPING JA1003A電子天平：上海精密科學(xué)儀器有限公司；3K18型高速離心機(jī)：德國(guó)Sigma公司；索氏提取器；電熱套；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)品：中國(guó)藥品生物制品檢定所，純度99.0%；考馬斯亮藍(lán)G-250、牛血清蛋白、甲醇、乙醚均為分析純。

2 方法

2.1 樣品處理

蒲公英栽培種1，葉翠綠，葉端長(zhǎng)圓狀披針形，外面的葉羽狀淺裂，葉緣較鈍，主根細(xì)長(zhǎng)，須根較多；栽培種2，葉泛紅，頂裂較大呈三角形狀，外面的葉呈波狀齒形，葉緣較尖且葉基生，主根粗壯，側(cè)根發(fā)達(dá)記為栽培2；標(biāo)本園空地散生的蒲公英標(biāo)記為野生類型，裂葉較深，泛紫色，主根明顯呈黃褐色，須根較少，斷面常有白色乳汁滲出。

實(shí)驗(yàn)所需蒲公英栽培類型1、栽培類型2均由河北省農(nóng)林科學(xué)院經(jīng)濟(jì)作物研究所提供，4月底播種于河北農(nóng)大標(biāo)本園，分別于2012年10月19日、10月28日、11月6日、11月16日取樣4次。樣品除去泥沙，趁鮮測(cè)定蒲公英中總蛋白的含量，剩余樣品60℃下烘干至恒重，粉碎后備用。

2.2 蛋白含量的測(cè)定

2.2.1 蛋白標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

取配制好的1 000μg/mL的牛血清蛋白溶液0、 0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL置6支試管中，依次加入蒸餾水1、0.8、0.6、0.4、0.2、0mL備用。準(zhǔn)確吸取上述所配各管溶液0.1mL，分別放入具塞試管中，加入5mL考馬斯亮藍(lán)G-250蛋白試劑，搖勻，并放置2min左右，以0號(hào)試管為空白對(duì)照，在595 nm下比色測(cè)定吸亮度。以蛋白質(zhì)含量為橫坐標(biāo)，以吸光度為縱坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線[6]，所得標(biāo)準(zhǔn)曲線為A=0.005x-0.002 4，R2=0.998 5。按下式計(jì)算含量C（μg/g）。

式中：A代表吸光值；V代表稀釋倍數(shù)；M代表蒲公英鮮重；x代表溶液中蛋白質(zhì)的濃度，（μg/mL）。

2.2.2 蛋白質(zhì)溶液的制備

將不同類型新鮮蒲公英根與葉剪碎混勻，分別取2.0 g，精密稱定，放入研缽中，加入2mL蒸餾水和少許石英砂，研磨成勻漿并轉(zhuǎn)入15mL離心管中，定容至10mL，并在4 000 r/min下離心10min，棄去沉淀，將上清液轉(zhuǎn)入容量瓶中，以蒸餾水定容至10mL，搖勻備用。

2.2.3 提取液中蛋白質(zhì)含量的測(cè)定

吸取上述提取液0.1mL，放入刻度試管中，重復(fù)3次，加入5mL考馬斯亮藍(lán)，充分混勻放置2min后，595 nm下比色，記錄吸光度值A(chǔ)。

2.3 總黃酮的測(cè)定

2.3.1 對(duì)照品液的制備

取盧丁對(duì)照品9.974mg，精密稱定，置25mL量瓶中，加甲醇適量，置水浴上微熱使溶解，放冷，加甲醇稀釋至刻度，精密吸取5mL置10mL容量瓶中，用甲醇定容，搖勻，即得0.199mg/mL的盧丁對(duì)照品溶液[4]。

2.3.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

精密量取對(duì)照品溶液1、2、3、4、5、6mL，置25mL量瓶中，各加水6.0mL，在加0.3mLNaNO2溶液，混勻，放置6min，加10%硝酸鋁溶液1mL，搖勻后放置6min，加NaOH試液10mL，再加水稀釋至刻度，搖勻，放置15min，以相應(yīng)試劑為空白，采用紫外-可見分光光度法，在500 nm波長(zhǎng)處測(cè)定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)（Y），濃度為橫坐標(biāo)（X）繪圖，得標(biāo)準(zhǔn)曲線。其回歸方程為Y=0.161 0x-0.002 5，r=0.998 3，在0.199mg/mL～1.197mg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.3.3 供試品液的制備

取蒲公英樣品干粉約1.10 g，精密稱定，分別置3個(gè)索氏提取器中，各加乙醚90mL，加熱回流至提取液無色，放冷，棄去乙醚液，加甲醇80mL，加熱回流至提取液無色，分別轉(zhuǎn)移至3個(gè)100mL容量瓶中，用少量甲醇洗滌容器，合并洗滌液，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，精密量取5mL置50mL容量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，備用。

3 結(jié)果與分析

3.1 蛋白含量比較

不同生長(zhǎng)時(shí)期蒲公英蛋白含量差異顯著，不同類型間蛋白含量亦差異顯著，蒲公英生長(zhǎng)180 d時(shí)，3種類型蒲公英中蛋白含量均達(dá)到最大值且分別高于170、190、200 d，其中栽培類型2蛋白含量最高可達(dá)（15.054 7±13.274 7）mg/g，顯著高于野生類型與栽培類型1，結(jié)果見表1。

表1 不同類型蒲公英蛋白的含量比較（mg/g，n=3）Table1 Comparation of protein content in different style of dandelions

3.2 黃酮含量比較

黃酮總含量隨時(shí)間的變化呈先增加后減少的趨勢(shì)，180 d最高，且顯著高于170、190、200 d時(shí)黃酮的含量。3類型蒲公英黃酮含量隨時(shí)間變化差異顯著，180 d時(shí)最高，其高低順序依次為：栽培2＞野生＞栽培1，結(jié)果見圖1。

圖1 不同類型蒲公英全株總黃酮的含量Fig.1 The content of flavonoid in different style of dandelions

3.3 蛋白含量與黃酮含量的相關(guān)性分析

蛋白含量與黃酮含量的相關(guān)性分析，見圖2。

圖2 不同類型蒲公英蛋白與黃酮含量的相關(guān)性比較Fig.2 The comparation of correlation between protein and flavonoid in different style of dandelions

由圖2可見，3種類型蒲公英隨時(shí)間的變化呈先增后減的趨勢(shì)，生長(zhǎng)到180 d時(shí)蛋白與黃酮含量均達(dá)到最大值。在一定程度上可反映蛋白含量的增加對(duì)黃酮的形成有促進(jìn)作用，這可能與蒲公英中黃酮的形成需要相關(guān)酶類物質(zhì)的催化有關(guān)，而自然界中大多數(shù)酶類物質(zhì)都是蛋白。

4 討論

蒲公英屬多年生草本，根宿存可越冬。葉可進(jìn)行光合作用，在條件適宜的情況下，合成的物質(zhì)可由葉（源）源源不斷地向根（庫）運(yùn)輸。因此有必要分別對(duì)蒲公英葉與根中的蛋白進(jìn)行測(cè)定，發(fā)現(xiàn)蒲公英葉中的蛋白含量較高是根中的1.90倍，葉中的蛋白隨時(shí)間呈先增后減的趨勢(shì)，而根中的蛋白呈現(xiàn)緩慢上升的趨勢(shì)，這可能與葉和根之間的源庫關(guān)系有關(guān)，進(jìn)入冬季，加上根部蓄積營(yíng)養(yǎng)安全過冬，以及寒冷環(huán)境的脅迫導(dǎo)致地上部分的枯萎，根中的蛋白含量不會(huì)一直增加，根中蛋白處于一種動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)。

黃酮類物質(zhì)相對(duì)比較穩(wěn)定，屬于蒲公英的有效成分之一，與蛋白存在著一定的相關(guān)性，這種相關(guān)性可能與黃酮合成所需酶的參與有關(guān)，而多數(shù)酶均是由蛋白質(zhì)所構(gòu)成，如果酶量加大，相應(yīng)地，合成黃酮的速率也加快，在某種意義上能夠反映出黃酮含量的增加。180 d蒲公英黃酮與蛋白的含量均最高，其抗菌消炎清除自由基的作用明顯，豐富的蛋白含量，供食用，營(yíng)養(yǎng)價(jià)值較高，因此建議在蒲公英生長(zhǎng)180 d地上部分未枯萎時(shí)采收可獲得較高的經(jīng)濟(jì)效益。蒲公英蛋白與黃酮隨時(shí)間變化差異顯著，第180天其含量均最高，不同類型蒲公英蛋白與黃酮含量亦差異顯著，其中栽培2顯著高于其他兩種類型。因此為了獲得藥食兩用帶來的很大經(jīng)濟(jì)效益，生產(chǎn)上建議種植蒲公英栽培類型2。

但蒲公英中蒲公英甾醇等其他藥用成分與蛋白質(zhì)之間是否存在相應(yīng)的關(guān)系，以及蒲公英全生育周期內(nèi)蛋白與黃酮的變化規(guī)律有待進(jìn)一步的探究。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:331

[2]李喜鳳,郝哲,杜云峰.蒲公英的生物活性研究進(jìn)展[J].中藥材, 2009(5):823-826

[3]李喜鳳,郝哲,邱天寶,等.蒲公英中有機(jī)酸類成分的提取工藝研究[J].中成藥,2011(2):262-265

[4]李喜鳳,郝哲,杜云峰.蒲公英中總黃酮提取工藝的研究[J].時(shí)珍國(guó)醫(yī)國(guó)藥,2009,7(20):1695-1696

[5]趙英明,范文麗.光照強(qiáng)度對(duì)蒲公英光合特性的影響[J].遼寧農(nóng)業(yè)科學(xué),2009(5):28-31

[6]郝建軍,康宗利.植物生理學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)[M].北京:化學(xué)工業(yè)出版社, 2007:107-110

Research on the Dynamic Changes of Total Protein Content and Flavonoids Content after Flowering in the Dandelion

LIU Jin-na1，2，JIA Dong-sheng2，MA Chun-ying1，LIU Ming2，XIE Xiao-liang2，*，YANG Tai-xin1，*，WEN Chun-xiu2
（1.Agricultural University of Hebei Province，Baoding 071000，Hebei，China；2.Hebei Academy of Agriculture and Forestry Science，Shijiazhuang050051，Hebei，China）

Exploring the dynamic changes of total protein content and flavonoids content，and analysing the correlation between protein and flavonoids.According to the botany characteristic and germplasm sources，dandelions were divided into three style denoted by cultivated germplasm 1，cultivated germplasm 2 and dandelion agriotype.Utilizing the method of ultraviolet-visible spectrophotometry，the content of total flavonoids was measured in the wavelength of 500 nm，and the content of total protein was measured in 595 nm.Results showed that both the content of total protein and total flavonoids in dandelion tended to increase then keeping a trend of decline，cultivated germplasm 2 approached the highest level in growth for 180 days and was higher than other types，there existed a positive correlation of protein and flavonoid in three types of dandelion.the contents of protein and flavonoid changed significantly in different times.

dandelion；lavonoids；protein；UV spectrophotometry

10.3969/j.issn.1005-6521.2014.03.001

2013-11-17

河北省現(xiàn)代農(nóng)產(chǎn)業(yè)技術(shù)體系中藥材產(chǎn)業(yè)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)建設(shè)項(xiàng)目資助

劉金娜（1988—），女（漢），碩士研究生，研究方向：藥用植物栽培。

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