李丹，謝曉芳，彭成，熊亮，趙小梅

·藥理毒理·

益母草不同提取物調(diào)經(jīng)作用研究

李丹，謝曉芳，彭成，熊亮，趙小梅

目的：探討益母草不同提取物對正常大鼠離體子宮平滑肌收縮功能的影響，尋找調(diào)經(jīng)活性部位。方法：從益母草中提取分離3個不同提取物，分別為益母草水部位（W1）、乙酸乙酯部位（Et）和正丁醇部位（Bu）；采用未孕大鼠離體子宮模型觀察3種提取物對子宮收縮的活動力、張力和頻率的影響，用BL-420E生物機能系統(tǒng)記錄子宮收縮曲線。結果：W1、Bu均使子宮活動力、收縮張力均值和最小值明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），且呈一定量效關系；3種提取物均可抑制縮宮素對子宮的收縮作用，使子宮活動力、收縮張力的均值和最大值顯著降低（P＜0.05或P＜0.01）。結論：提取物對未孕大鼠正常子宮具有興奮作用，而對縮宮素所致痙攣子宮具有舒張作用；提示益母草對子宮活動具有雙向調(diào)節(jié)作用，活性物質主要是益母草水部位和正丁醇部位。

益母草；離體子宮；活性部位；雙向調(diào)節(jié)

益母草為唇形科一年生或二年生草本植物益母草（Leonurus japonicus Houtt.）的地上部分，具有活血調(diào)經(jīng)、利水消腫的功效，臨床主要用于治療月經(jīng)不調(diào)、產(chǎn)后腹痛、小便不利、水腫等[1]。目前臨床使用的益母草制劑品種較多，大多采用水煎醇提為基礎的制備工藝[2]。本實驗從益母草藥材中提取乙酸乙酯部位（Et）、正丁醇部位（Bu）、水部位（W1），采用離體子宮模型觀察3種不同提取物對子宮活動的影響，明確益母草的調(diào)經(jīng)作用及活性物質基礎。

1 實驗材料

1.1 提取物制備

取益母草藥材2 kg，加入10倍量95%乙醇回流提取3次，合并過濾，濾液濃縮得到浸膏500 g，將浸膏用乙酸乙酯萃取得到乙酸乙酯部位提取物（Et，每g相當于40 g生藥），再將萃取后浸膏加入正丁醇萃取得到正丁醇部位提取物（Bu，每g相當于100 g生藥），剩余的為水部位提取物（W1，每g相當于25 g生藥）。試驗前將3種提取物用蒸餾水配成6 g生藥/ mL，備用。

1.2 實驗動物

SD大鼠，普通級，全雌，體重180～220 g，由成都中醫(yī)藥大學實驗動物研究中心提供，質量合格證號：SCXK（川）2008-11，檢疫后用。

1.3 主要試劑及儀器

縮宮素注射液（河南輔仁懷慶堂制藥有限公司，批號1204021），苯甲酸雌二醇注射液（天津金耀氨基酸有限公司，批號1005051）；NaCl、KCl、CaCl2、NaHCO3、葡萄糖試劑，均由成都市科龍化工試劑公司生產(chǎn)，采用去離子水配置洛氏液（配置方法：1000 mL含NaCl 9.2 g、KC1 0.42 g、CaCl20.24 g、NaHCO30.15 g、葡萄糖1.0 g)；BL-420E生物機能系統(tǒng)，JH-2型張力換能器，HW-400E型恒溫水浴平滑肌槽，均由成都泰盟科技有限公司生產(chǎn)。

2 實驗方法

2.1 離體子宮的制備[3]

取健康、成年雌性未孕大鼠，實驗前2 d每日肌肉注射苯甲酸雌二醇1 mg﹒kg-1造成動情期。于第3 d頸椎脫臼處死動物，迅速剪開腹腔剖取子宮置于盛有洛氏液的玻璃皿中，輕輕剝離子宮上附有的結締組織和脂肪組織。取子宮中間段2～3 cm，一端固定于盛有洛氏液20 mL的浴槽，另一端連接張力換能器，浴槽中營養(yǎng)液保持（37±0.5）℃，并通以（95% O2+5% CO2）的混合氣體，速度1～2個小氣泡/s，前負荷1 g。用BL-420E生物機能系統(tǒng)記錄子宮收縮曲線。

2.2 給藥方法

待曲線穩(wěn)定30 min，采用累積加藥方式給藥，加入提取物W1、Et、Bu藥液，采用累加給藥方式（劑量均為5、5、10 μL，相當于生藥量0.0015、0.003、0.006 g﹒mL-1），每次加藥后記錄10 min離體子宮收縮活動，三次加完后用洛氏液沖洗3次，再加入等量的洛氏液，待曲線穩(wěn)定后，用同樣的加藥方式加入下一組藥物；加入1 U﹒mL-1縮宮素160 μL，記錄曲線10 min后再加入高劑量的藥液記錄10 min，觀察離體子宮肌收縮活動的變化。

2.3 統(tǒng)計學方法

用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件進行配對t檢驗統(tǒng)計分析給藥前后的變化，以（）表示，P ＜ 0.05 為顯著性差異，P＜0.01為極顯著性差異。

3 實驗結果

3.1 對正常大鼠離體子宮活動的影響

與給藥前相比，W1高劑量使子宮活動力、收縮頻率、收縮張力均值和最小值均明顯增加（P＜0.05或P＜0.01），中劑量組使子宮收縮張力均值和最小值均明顯增大（P＜0.05或P＜0.01）；Et中、高劑量使子宮收縮張力最小值增大（P＜0.05或P＜0.01）；Bu低、中、高劑量均可使子宮活動力、收縮張力平均值和最小值均明顯增加（P＜0.01），其中高劑量組收縮張力最大值下降（P＜0.05）。由此可見，在三個提取部位中以W1、Bu具有興奮正常子宮平滑肌活動的作用，Et作用不顯著。結果見表1～表5，圖1。

表1 益母草藥材不同部位對正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

表1 益母草藥材不同部位對正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 N 給藥前 低劑量 中劑量 高劑量空白對照 10 1682.90±358.30 1653.70±271.38 1702.50±284.26 1710.10±233.53 W1 9 1264.33±389.97 1281.78±351.32 1331.11±339.09 1373.44±362.78** Et 8 1697.00±376.97 1696.13±361.25 1717.75±352.87 1744.50±346.35 Bu 10 1604.70±318.69 1794.40±375.73** 1819.60±316.31** 1910.80±359.38**

表2 益母草藥材不同部位對正常大鼠離體子宮收縮頻率的影響（x ±s）

表3 益母草藥材不同部位對正常大鼠離體子宮收縮平均值的影響（）

表3 益母草藥材不同部位對正常大鼠離體子宮收縮平均值的影響（）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 N 給藥前 低劑量 中劑量 高劑量空白對照 10 2.80±0.59 2.75±0.45 2.83±0.47 2.85±0.39 W1 9 2.10±0.65 2.13±0.58 2.21±0.57* 2.28±0.60** Et 8 2.92±0.73 2.82±0.61 2.85±0.59 2.78±0.75 Bu 10 2.67±0.53 2.98±0.62** 3.01±0.54** 3.18±0.59**

表5 益母草藥材不同部位對正常大鼠離體子宮收縮最小值的影響（）

注：與給藥前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

組別 N 給藥前 低劑量 中劑量 高劑量空白對照 10 1.66±0.37 1.67±0.34 1.68±0.36 1.69±0.37 W1 9 1.48±0.45 1.54±0.44* 1.62±0.47** 1.69±0.51** Et 8 1.73±0.56 1.78±0.55 1.77±0.56* 1.81±0.58** Bu 10 1.80±0.46 1.89±0.45** 1.98±0.44** 2.14±0.51**

圖1 益母草不同提物對大鼠子宮收縮的影響

3.2 對縮宮素致子宮痙攣的影響

與造模前比較，給予縮宮素后大鼠離體子宮平滑肌條強烈收縮，活動力明顯增加，收縮張力均值和最小值明顯升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。給予益母草藥材不同提取物后，3個提取物均使子宮活動力和收縮張力的均值、最大值降低，表現(xiàn)為抑制縮宮素對子宮的興奮作用。結果詳見表6～表10、圖2。

表6 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

表6 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮活力的影響（）

注：與造模前比較， **P＜0.01；與造模后比較，▲▲P＜0.01

劑量組別 N 造模前 造模后 給藥后（g﹒mL-1）空白對照 8 — 1668.75±320.07 2714.88±411.84** 2661.38±421.18 W1 8 0.006 1671.25±532.25 2380.25±378.61** 2101.25±452.86▲▲Et 8 0.006 1925.25±247.24 2574.50±346.96** 2279.38±330.48▲▲Bu 8 0.006 1721.75±319.69 2360.25±533.98** 2122.00±418.33▲▲

表7 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮頻率的影響（）

表7 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮頻率的影響（）

劑量組別 N 造模前 造模后 給藥后（g﹒mL-1）空白對照 8 — 8.00±2.51 8.13±4.09 9.13±3.76 W1 8 0.006 6.38±1.60 5.75±3.06 7.00±3.25 Et 8 0.006 5.88±1.13 4.88±3.87 4.88±3.27 Bu 8 0.006 5.88±1.73 4.63±3.11 4.50±3.46

表8 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力均值的影響（）

表8 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力均值的影響（）

注：與造模前比較，**P＜0.01；與造模后比較，▲▲P＜0.01

N 劑量造   （次）（g﹒mL-1）空白對照 8 — 2.78±0.53 4.52±0.69** 4.43±0.70 W1 8 0.006 2.77±0.88 3.96±0.63** 3.50±0.76▲▲Et 8 0.006 3.20±0.42 4.28±0.58** 3.79±0.55▲▲Bu 8 0.006 2.86±0.53 3.93±0.89** 3.53±0.70▲▲組別 模前 造模后 給藥后

表9 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最大值的影響（）

表9 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最大值的影響（）

注：與造模后比較，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01

N 劑量造   （次）（g﹒mL-1）空白對照 8 — 5.66±0.97 5.94±0.52 5.80±0.59 W1 8 0.006 5.52±1.23 5.51±0.99 5.06±1.34▲Et 8 0.006 5.48±0.52 5.54±0.73 4.97±0.67▲▲Bu 8 0.006 5.21±1.15 5.30±1.12 4.76±0.92▲組別 模前 造模后 給藥后

表10 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最小值的影響（）

表10 益母草藥材不同部位對縮宮素致痙攣正常大鼠離體子宮收縮張力最小值的影響（）

注：與造模前比較，*P＜0.05，**P＜0.01

N 劑量造   （次）（g﹒mL-1）空白對照 8 — 1.69±0.33 2.00±0.35* 2.38±0.74 W1 8 0.006 1.71±0.58 2.57±0.67* 2.33±0.61 Et 8 0.006 1.93±0.23 2.38±0.53** 2.75±0.59 Bu 8 0.006 1.79±0.42 2.26±0.72* 2.50±0.69組別 模前 造模后 給藥后

圖2 益母草不同提取物對縮宮素所致痙攣子宮收縮的影響

4 討論

現(xiàn)代研究表明，益母草藥理作用相當廣泛，其對子宮有雙向調(diào)節(jié)作用，即當子宮在正常狀態(tài)下用藥引起子宮興奮收縮，而當子宮在痙攣狀態(tài)時用藥則引起松弛[4～6]。

本試驗結果顯示，益母草的3種不同提取物中W1、Bu均具有一定興奮大鼠離體子宮平滑肌的作用，其中以W1、Bu較為明顯，均使子宮活動力、收縮張力均值和最小值明顯增加，并呈一定的量效關系?？s宮素又名催產(chǎn)素，是垂體后葉素的主要成分，其主要作用為促進子宮平滑肌收縮[7]。本實驗結果表明縮宮素對大鼠離體子宮平滑肌有興奮作用，主要體現(xiàn)在增加子宮活動力、收縮張力均值和最小值。此興奮作用可以被3種提取物對抗，均使子宮活動力和收縮張力的均值、最大值降低。以上實驗結果與相關報道[2,8～9]一致。據(jù)本試驗結果可知，益母草對子宮的調(diào)節(jié)作用與子宮狀態(tài)有關，對正常子宮主要表現(xiàn)為興奮作用，其中以正丁醇部位最明顯；對縮宮素所致痙攣離體子宮主要表現(xiàn)為舒張作用，以乙酸乙酯部位作用較為明顯。結果提示益母草水部位和正丁醇部位為其縮宮的主要活性物質，而乙酸乙酯部位可作為研發(fā)治療痛經(jīng)藥物的潛在活性部位。

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（責任編輯：陳思敏）

Effects of different extracts from Leonurus japonicus Houtt. on isolated smooth muscle of uterus

LI Dan, XIE Xiaofang, PENG Cheng, XIONG Liang, ZHAO Xiao-mei//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources Co-founded by Sichuan Province and MOST, Chengdu 611137, China)

Objective:To investigate the effects of extracts from Leonurus japonicus Houtt. on uterine smooth muscle in rats and to fnd the active extract.Method:There were three different extracts from Leonurus japonicus Houtt. including the water part(W1), ethyl acetate part(Et) and n-butano part( Bu). The effects of different extracts decoction on the spontaneous activity of uterine smooth muscle was observed with BL-420E biological signaling system and the activities of isolated uterus smooth muscle were recorded. The indexes included the amplitude, frequency and mobility in rat’s uterine smooth muscle movement track.Result:W1 and Bu had effect on rat uterus, and the activity, average and minimum values of uterus were signifcantly increased (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01). And all three kinds of extract could inhibit oxytocin effect on the contraction of the uterus, which could signifcantly decrease uterine activity, average and maximum (P ＜ 0.05 or P ＜ 0.01).Conclusion:Leonurus japonicus Houtt. has a two-way adjustment function of uterine activity. It stimulates the normal uterus of rats and inhibits the convulsive uterus. The water extraction part and n-butanol part may have the main active components.

Leonurus japonicus Houtt.；isolated uterus；active extract；dual-directional regulation

R 285.5

A

1674-926X(2014)03-008-04

國家“十一五”重點科技支撐計劃項目（項目編號：2009BAI84B00）

成都中醫(yī)藥大學藥學院 中藥材標準化教育部重點實驗室 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點實驗室培育基地，四川 成都 611137

李丹，在讀碩士研究生，主要從事中藥復方藥理毒理研究Tel:13558661832 Email:fdqlidan@163.com

彭成，教授，博導，主要從事中藥復方藥理與疾病動物模型研究Tel:028-61800018 Email:pengchengchengdu@126.com

2013-09-04