朱永琴，王志遠，楊東菁，王雪芹（.河南省食品藥品檢驗所，鄭州 45000；.河南大學藥學院，河南開封 47500；.河南大學醫(yī)學院，河南 開封 47500）

酒石酸羅格列酮屬噻唑烷二酮類衍生物，系胰島素增敏劑，用于治療2 型糖尿病，能在控制血糖的同時降低循環(huán)中的胰島素水平[1]。根據(jù)開封制藥股份有限公司提供的資料，酒石酸羅格列酮原料藥在合成過程中分別用到甲醇、乙醇、甲苯和N，N-二甲基甲酰胺（DMF）。有機溶劑如果殘留在原料藥中，不僅增加藥物的毒副作用，而且會影響藥物的穩(wěn)定性。雖然不同原料藥中各種殘留溶劑檢測的文獻報道[2-3]較多，但關(guān)于酒石酸羅格列酮原料藥中殘留溶劑的測定未見文獻報道。為有效控制該產(chǎn)品質(zhì)量，筆者采用頂空進樣毛細管氣相色譜法同時測定樣品中的甲醇、乙醇、甲苯和DMF。結(jié)果表明，建立的方法操作簡便，結(jié)果準確可靠。

1 材料

1.1 儀器

PE Clarus 500氣相色譜儀、氫火焰離子化檢測器、PE TurboMatrix 40 Trap 頂空進樣裝置和Chemstation 色譜工作站（美國PerkinElmer公司）。

1.2 藥品與試劑

樣品酒石酸羅格列酮原料藥（開封制藥股份有限公司，批號：20060501、20060502、20060503，純度：99.98%、99.97%、99.98%）；甲醇、乙醇、甲苯和DMF 均為優(yōu)級純（德國默克公司，含量：均≥99.8%）；二甲基亞砜（DMSO）為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗

色譜柱：INNOWAX 彈性石英毛細管柱（30 m×0.53 mm，0.25 μm）；柱溫：程序升溫：初始溫度50 ℃，保持2 min，以10 ℃/min 的速率升溫至200 ℃保持10 min；進樣口溫度：160 ℃；檢測器溫度：230 ℃；載氣：高純N2；流速：2.0 ml/min；分流比：5 ∶1；燃氣：H2，流速：45 ml/min；助燃氣：空氣，流速：450 ml/min。頂空平衡溫度：80 ℃；進樣針溫度：95 ℃；傳輸線溫度：105 ℃；平衡時間：30 min；進樣時間：0.06 min；加壓時間：3.0 min；進樣量：1.0 ml。

取“2.2”項下待測對照溶液、空白溶劑（DMSO）和批號為20060501 的樣品溶液進行分析，結(jié)果甲醇、乙醇、甲苯、DMF、DMSO各峰之間分離良好，分離度均＞5.8，理論板數(shù)均不小于65 592。色譜圖見圖1。

圖1 氣相色譜圖A.空白溶劑；B.對照溶液；C.樣品溶液；1.甲醇；2.乙醇；3.甲苯；4.DMF；5.DMSOFig 1 GC chromatogramsA.blank solvent；B.reference solution；C.sample solution；1.methanol；2.ethanol；3.toluene；4.DMF；5 DMSO

2.2 測定方法

在加有少量DMSO的50 ml量瓶中，分別精密稱取0.147 2 g 甲醇、0.248 0 g 乙醇、0.045 1 g 甲苯和0.046 2 g DMF，加DMSO 稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml 含甲醇2.944 mg、乙醇4.960 mg、甲苯0.902 mg和DMF 0.924 mg的溶液，作為對照貯備液；精密量取上述溶液5.0 ml，置于100 ml量瓶中，加DMSO稀釋至刻度，搖勻，制成每1 ml 含甲醇147.2 μg、乙醇248.0μg、甲苯45.1μg和DMF 46.2μg的溶液，作為對照溶液。精密量取上述對照溶液5 ml，置于20 ml頂空瓶中，加蓋密封，作為待測對照溶液。另精密稱取3批樣品各0.5 g，置于20 ml頂空瓶中，精密加入DMSO 5 ml，加蓋密封，振搖使溶解，作為樣品溶液。

2.3 線性范圍考察

分別精密量取“2.2”項下對照貯備液10、5、3、2、1、0.5 ml，置于100 ml量瓶中，用DMSO稀釋制成工作曲線系列溶液（其中取對照貯備液2 ml 制備的溶液作為中間濃度對照溶液）。精密量取上述溶液5 ml，置于20 ml 頂空瓶中，加蓋密封，按“2.1”項下色譜條件進樣分析，以對照溶液質(zhì)量濃度（c）為橫坐標、峰面積（A）為縱坐標繪制標準曲線，計算得回歸方程，結(jié)果見表1。

表1 4種溶劑線性關(guān)系考察結(jié)果（n＝6）Tab 1 Results of linear range of 4 solvents（n＝6）

2.4 精密度試驗

取“2.2”項下待測對照溶液，按“2.1”項下色譜條件，重復測定5次，記錄色譜圖，計算各峰面積及其RSD。結(jié)果，甲醇、乙醇、甲苯和DMF 峰面積的RSD 分別為0.76%、0.90%、1.17%和3.07%（n＝5）。

2.5 檢測限和定量限試驗

精密量取“2.2”項下中間濃度對照溶液，用DMSO 逐級稀釋，進樣測定，分析、記錄色譜圖，直至信噪比為3∶1和10∶1，即得檢測限和定量限。結(jié)果甲醇、乙醇、甲苯、DMF 的檢測限分別為2.944、4.960、0.902、0.924μg/ml；定量限分別為7.36、12.4、2.25、2.31μg/ml。

2.6 回收率試驗

采取加樣回收方法測定。精密稱取批號為20060501的樣品0.5 g，共9份，置于20 ml頂空瓶中，分別加入相當于中間濃度對照溶液質(zhì)量濃度80%、100%、120%（每個質(zhì)量濃度3 份）的對照溶液各5 ml，加蓋密封，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，根據(jù)峰面積計算回收率，結(jié)果見表2。

表2 回收率試驗結(jié)果（n＝3）Tab 2 Results of recovery tests（n＝3）

2.7 樣品中有機溶劑殘留量測定

取樣品照“2.2”項下方法制備待測對照溶液與樣品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，結(jié)果見表3。

表3 3批樣品中有機溶劑殘留量測定結(jié)果（n＝3）Tab 3 Content determination of residual organic solvent in 3 batches of samples（n＝3）

3 討論

3.1 色譜柱的選擇

取“2.2”項下待測對照溶液，分別選用不同極性的毛細管色譜柱（聚乙二醇2000 和DB-624 色譜柱）進行試驗，結(jié)果表明，前者分離效果（分離度均大于5.8）優(yōu)于后者（分離度均大于1.5）。故試驗中選擇了含聚乙二醇2000 固定相的INNOWAX彈性石英毛細管柱為分離柱。

3.2 進樣方式的選擇

與直接進樣相比，頂空進樣方式可大大降低對色譜柱的污染，且有利于延長色譜柱使用壽命，故選擇頂空進樣方式。

3.3 溶劑的選擇

在考察溶解樣品的溶劑時，雖然原料藥在水中易溶，但甲苯不溶于水，而在DMSO中具有很好的溶解性，故選擇DMSO作為溶劑，實現(xiàn)了樣品和各有機溶劑均能較好溶解的目的，且各有機溶劑分離完全，柱效、峰形良好，保留時間適宜。

3.4 頂空平衡溫度和時間的選擇

取“2.2”項下待測對照溶液，分別在70、75、80、85、90 ℃下加熱平衡30 min和頂空平衡溫度為80 ℃時加熱20、30、40 min后進樣測定，結(jié)果表明，頂空溫度為80 ℃、加熱時間為30 min時，4 種溶劑分離較好，且峰形均良好。故選擇頂空平衡溫度為80 ℃，平衡時間為30 min。

根據(jù)2010年版《中國藥典》規(guī)定[4]，本文所檢測的4種殘留溶劑分別屬于Ⅰ類（DMF）、Ⅱ類（甲醇、甲苯）和Ⅲ類（乙醇）溶劑，均需嚴格控制含量。本試驗中，3 批樣品僅檢出微量乙醇殘留，結(jié)果符合《中國藥典》規(guī)定。

本文選用極性的INNOWAX 彈性石英毛細管柱，用頂空進樣方法，采用程序升溫方式，對4種有機溶劑同時進行分析，在較短的分析時間內(nèi)4種有機溶劑達到了完全分離，故建立的方法可用于酒石酸羅格列酮原料藥的質(zhì)量控制。

[1]廖家榮，甘勇軍，嚴明志，等.羅格列酮氧釩配合物的合成及表征[J].中國藥房，2011，22（45）：4 253.

[2]馮光玲，馮愛國，丁文娟.毛細管氣相色譜法測定米鉑原料藥中5種有機溶劑殘留量[J].中國藥房，2013，24（41）：3 921.

[3]徐紅，楊釗，謝宜名，等.頂空氣相色譜法測定美洛昔康中的3種殘留溶劑[J].藥物分析雜志，2013，33（6）：1 021.

[4]國家藥典委員會.中華人民共和國藥典：二部[S].2010年版.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：附錄61-65.