羅方利，郭力，貝圓，許莉

·品種品質(zhì)·

延齡草鞣質(zhì)的含量測定

羅方利，郭力，貝圓，許莉

目的：建立延齡草中鞣質(zhì)的含量測定方法。方法：以磷鉬鎢酸法作為顯色方法，采用紫外-可見分光光度法進(jìn)行測定。結(jié)果：在0.0755～0.2012mg范圍內(nèi)吸光度與鞣質(zhì)含量呈良好的線性關(guān)系(r2=0.9991，n=9)，平均回收率為100.10 %，RSD= 2.51%，n=9。結(jié)論：該法精密度、重現(xiàn)性良好，可作為延齡草中鞣質(zhì)的含量測定方法。

延齡草；鞣質(zhì)；含量測定

頭頂一顆珠系百合科延齡草屬植物頭頂一顆珠(Trillium tschonoskii Maxim.)的干燥根狀莖及根，其味甘性溫，有小毒，有止血、解毒、接骨續(xù)筋等功效，主治頭痛眩暈、跌打損傷、神經(jīng)衰弱、疔瘡腫毒等[1]。傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)認(rèn)為，含鞣質(zhì)的中草藥具有收斂、止血、止瀉的作用[2,3]?，F(xiàn)代藥理研究表明，鞣質(zhì)具有抗脂過氧化、抗腫瘤、抗病毒、抑菌、抗炎、抗過敏、解毒、生發(fā)、增強(qiáng)腎功能等方面的作用[4]。目前，對延齡草植物中皂苷類成分研究較多，但未見延齡草中鞣質(zhì)的相應(yīng)報(bào)道，本實(shí)驗(yàn)參照2010年版《中華人民共和國藥典》（一部）附錄ⅩB鞣質(zhì)含量測定方法，對延齡草中鞣質(zhì)含量進(jìn)行了檢測。以期為延齡草藥材的規(guī)范化和進(jìn)一步的開發(fā)利用提供科

1 儀器與試藥

紫外-可見分光光度儀（UV-1100，上海天美科學(xué)儀器有限公司），Sartorius系列電子分析天平，KQ3200E型超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司），優(yōu)普系列超純水器（成都超純科技有限公司）等。

沒食子酸對照品(中國藥品生物制品檢定所,批號：110831-200302，供含量測定用) ;實(shí)驗(yàn)所用試劑均為分析純，延齡草藥材來自四川省南江縣，經(jīng)成都中醫(yī)藥大學(xué)中藥鑒定教研室李敏教授鑒定確認(rèn)為百合科延齡草屬植物延齡草( Trillium tschonoskii Maxim.)的干燥根莖。

2 方法與結(jié)果

2.1 溶液的制備

2.1.1 對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品5.03 mg，置100 mL 棕色容量瓶中，加水溶解并稀釋至刻度，得濃度為0.0503mg/mL的對照品溶液。

2.1.2 磷鉬鎢酸試液的制備 取鎢酸鈉100g、鉬酸鈉25g，加水700mL使溶解，加鹽酸100mL、磷酸50mL，加熱回流10h，放冷，再加硫酸鋰150g、水50mL和溴0.5mL，煮沸除去殘余的溴（約15分鐘），除去殘留的溴，冷卻，加水稀釋到 1000 mL，過濾，收集濾液即得。

2.1.3 供試品溶液的制備 取延齡草藥材0.5 g，精密稱定，置25 mL棕色量瓶中，加入純水15 mL，放置過夜，超聲處理10分鐘，放冷，加水稀釋至刻度，搖勻，靜置，濾過，即得。

2.2 最大吸收波長的確定

分別取對照品溶液和供試品溶液適量，置25mL棕色量瓶中，加入磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加水至溶液總量為12mL，再用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，在400nm～800nm范圍內(nèi)進(jìn)行全波長掃描，沒食子酸對照品溶液和供試品溶液的最大吸收波長均在760nm處，故確定其為測定波長。

2.3 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制

精密量取沒食子酸對照品溶液1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0mL，分別置25mL棕色量瓶中，各精密加入磷鉬鎢酸試液1mL，再分別加水補(bǔ)足12mL，用29%碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)試劑為空白，照紫外-可見分光光度法，在761nm波長處測定吸光度，以濃度為橫坐標(biāo)，吸光度為縱坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。進(jìn)行線性回歸，得回歸方程：Y=3.8171X-0.0500，r2=0.9991，表明沒食子酸在0.0755～0.2012mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 測定方法

2.4.1 總酚的測定 取上述供試品溶液0.5 mL，置25 mL棕色量瓶中，照“2.3”項(xiàng)下方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1mL”起，依法測定，計(jì)算含量，即得。

2.4.2 不被吸附多酚的測定 取上述供試品溶液1 mL，加至盛有0.6 g干酪素的具塞錐形瓶中，密塞，置30 ℃水浴中保溫1小時(shí)，時(shí)時(shí)振搖，取出，放冷，搖勻，濾過，棄去初濾液，精密量取續(xù)濾液1.2 mL，置25 mL棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入磷鎢酸試液1ml”起，依法測定吸光度，計(jì)算，即得。

總酚量減去不被吸附的多酚量，即得鞣質(zhì)含量。

2.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一沒食子酸對照品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法連續(xù)測定其吸光度A，重復(fù)5次，RSD為0.73%，表明該測定方法精密度良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法分別于0、30、60、90、120min，測定其吸光度，RSD=1.18%，結(jié)果表明供試品溶液在2 h內(nèi)穩(wěn)定。

2.7 重復(fù)性試驗(yàn)

分別稱取同一批延齡草樣品5份，每份約1g，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備，按“2.3”項(xiàng)下方法測定吸光度。總酚RSD=0.75%，不被吸附多酚RSD=1.20%，表明該測定方法重復(fù)性良好。

2.8 加樣回收率試驗(yàn)

精密稱取已知含量的延齡草粉末0.5 g（9份），分別精密加入1.01mg/mL的沒食子酸對照品0.7，0.85，1mL，按“2.1.3”項(xiàng)下方法制備樣品溶液。按照“2.3”項(xiàng)下方法測定吸光度，計(jì)算回收率為100.10%，RSD=2.51%，結(jié)果見表1。

表1 沒食子酸加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果表

2.9 樣品含量測定

按照“2.1.3”項(xiàng)下操作方法，制備5批供試品溶液，按“2.3”項(xiàng)下方法測定吸光度，結(jié)果見表2。

表2 樣品含量測定結(jié)果

3 討論

鞣質(zhì)的含量測定方法主要有比色法、高錳酸鉀法、皮粉法、干酪素法、絡(luò)合滴定法、分光光度法等。本實(shí)驗(yàn)采用的磷鉬鎢酸-干酪素比色法具有靈敏、快速、操作簡便、成本低廉、方便實(shí)用、精密度高、專屬性強(qiáng)等特點(diǎn)[5]。

磷鉬鎢酸-干酪素法的原理為：在堿性溶液中，酚類化合物可以將鎢鉬酸還原(使W6+變?yōu)閃5+)，生成藍(lán)色的化合物，顏色的深淺與酚含量呈正相關(guān)，且在760nm處有最大吸收。以干酪素作為鞣質(zhì)吸附劑，進(jìn)而消除樣品中其它含多酚羥基成分的干擾，可以選擇性地吸附有生理活性的鞣質(zhì)，因此測出的是有療效的鞣質(zhì)，而無療效的鞣質(zhì)如鞣酐等則不被測定[6,7]。本方法中，鞣質(zhì)含有的多酚羥基與磷鉬鎢酸試液反應(yīng)生成的藍(lán)色產(chǎn)物遇光不穩(wěn)定，強(qiáng)光照射會使顯色體系吸光度下降，因此顯色反應(yīng)應(yīng)該避光操作，使用棕色容器。延齡草中鞣質(zhì)的含量測定對其質(zhì)量控制具有參考價(jià)值，延齡草中鞣質(zhì)與其傳統(tǒng)功效的相關(guān)性有待進(jìn)一步研究。

[1] 謝宗萬等.全國中草藥匯編[M].上冊.第二版.北京:人民衛(wèi)生出版社, 2000: 225.

[2] 陳佳江,郭力,許莉.疊鞘石斛與藥典收載石斛品種鞣質(zhì)含量對比研究[J].中國實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志,2013,19(2):64.

[3] 王宗偉.植物鞣質(zhì)的藥理作用及結(jié)構(gòu)特征.國外醫(yī)學(xué).中醫(yī)中藥分冊,1997,19(2):22.

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[5] 劉若霞,郭巧玲,田素英.金櫻莖鞣質(zhì)的含量測定[J].現(xiàn)代中藥研究與實(shí)踐,2011,25(6):73.

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（責(zé)任編輯: 胡慧玲）

Content determination of tannin in Trillium tschonoskii Maxim.

LUO Fang-li, GUO Li, BEI Yuan, XU Li//(Pharmacy College, Chengdu University of Traditional Chinese Medicine; The Ministry of Education Key Laboratory of Standardization of Chinese Herbal Medicine; State Key Laboratory Breeding Base of Systematic Research, Development and Utilization of Chinese Medicine Resources, Chengdu 611137, China)

Objective:To establish a method for the content determination of tannin in Trillium tschonoskii Maxim.Method:The content of tannin in Trillium tschonoskii Maxim. was detected by molybdophosphate colorimetric method.Result:The absorbance with the tannin was linear within the range of 0.0755 mg ～ 0.2012 mg(r2=0.9991，n=9). The average recovery was 100.10% and RSD was 2.51% (n=9).Conclusion:This method can be used for the quality control of Trillium tschonoskii Maxim. with good precision and reproducibility.

Trillium tschonoskii Maxim.; tannin; content determination

R 282.6

A

1674-926X(2014)01-003-02

成都中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院 中藥材標(biāo)準(zhǔn)化教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室 中藥資源系統(tǒng)研究與開發(fā)利用省部共建國家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室培育基地，四川 成都 611137

羅方利，碩士在讀，主要從事中藥有效成分分析研究 Email:870905012@qq.com

郭力，教授，博士生導(dǎo)師，主要從事中藥藥效物質(zhì)基礎(chǔ)及質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)化研究 Email:gli64@sina.com

2013-06-08學(xué)依據(jù)。