朱振元，薛 婧，劉曉翠，孟 夢，唐亞麗，張 軍，郭 蓉

（食品營養(yǎng)與安全教育部重點實驗室，天津科技大學食品工程與生物技術學院，天津 300457）

葛根素及葛根異黃酮對小鼠急性醉酒預防和解酒效果的研究

朱振元，薛 婧，劉曉翠，孟 夢，唐亞麗，張 軍，郭 蓉

（食品營養(yǎng)與安全教育部重點實驗室，天津科技大學食品工程與生物技術學院，天津 300457）

目的：研究葛根素及葛根異黃酮對小鼠急性防醉解酒的效果。方法：將小鼠隨機分成5 組，標記為對照組、葛根粗提物組、葛根異黃酮組、60%葛根素組、99%葛根素組。禁食（不禁水）1 2 h后，每組灌胃等劑量的對應物50%丙二醇水溶液（對照組灌胃50%丙二醇水溶液），30 min后灌胃等劑量56°紅星二鍋頭，觀察其醉酒時間與醒酒時間以研究不同含量葛根素對小鼠急性防醉解酒的效果，并在給酒后持續(xù)檢測小鼠血液中的乙醇含量，以表征不同時段小鼠的醉酒程度。將另一批小鼠隨機分為4 組，禁食（不禁水）12 h后，分別按100、200、300、400 mg/kg（以體質量計，葛根異黃酮中葛根素含量約為22.13%）劑量灌胃，醉酒時間與醒酒時間以研究葛根素防醉解酒的最佳給藥量。結果：隨著所給藥物中葛根素含量的增高，小鼠急性醉酒的醉酒時間逐漸延長，醒酒時間逐漸縮短。隨著葛根素含量的增高，藥品解酒防醉的效果越好，但在300 mg/kg（以 體質量計）之后，變化趨于緩和。結論：葛根素對小鼠急性防 醉解酒有較好的預防效果，葛根中其他異黃酮類物質與葛根素有相似的防醉解酒功效。

葛根素；葛根異黃酮；小鼠；急性解酒防醉；醉酒時間；醒酒時間

葛根始載于《神農本草經》，歷代本草均有記載，今為常用生藥，被國家衛(wèi)生部列入“既是食品又是藥品”名錄。葛根含有多種有效成分，主要為異黃酮類化合物：大豆苷元（daidzein）、大豆苷（daidzin）、4,7-二葡萄糖大豆苷、3’-甲氧基葛根素、7-木糖一葛根素、4’,6’-二乙酞基一葛根素等[1]，但以葛根素的含量最高?！吨袊幍?010》中記載，葛根味甘辛，性涼，入脾、胃、肺經，有解肌退熱，生津止渴，透疹，升陽止瀉，通絡活絡，解酒毒之功能[2]。葛根作為中國傳統(tǒng)醫(yī)學中最具代表性的解酒藥物之一，具有解酒防醉、改善心腦血管循環(huán)、降低心肌耗氧量，降低血糖，防止高血壓及動脈硬化，抗肝臟毒，抗炎，祛痰，解熱，提高機體免疫力，抗菌，抗病毒等多種藥理作用[3],可有效提高肝臟乙醇脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）與乙醛脫氫酶（acetaldehyde dehydrogenase，ALDH）的活性，其解酒作用與增強乙醇的生物轉化有關，從乙醇的吸收、代謝、排泄3 個環(huán)節(jié)發(fā)揮解酒作用，對急、慢性酒精中毒均能發(fā)揮解酒作用。

目前為止，有關葛根解酒多偏向于急、慢性酒精中毒模型下葛根的保肝護肝及其他功效[4]，但是對于急性解酒防醉方面的研究卻鮮有成效。此外，有關葛根解酒防醉的功效成分的研究也很少，而市場對于功效明確、成分清楚的急性防醉解酒產品的需求卻與日俱增。基于此種現(xiàn)狀，本實驗研究了葛根對小鼠急性防醉解酒的效果及其功效成分。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

葛根 毫州市永剛飲片有限公司；廣西粉葛，批號：120715；酒（56°紅星二鍋頭） 北京紅星股份有限公司；60%葛根素（批號：121010，HPLC測試含量為60.73%）、99%葛根素（批號：120905，HPLC測試含量為99.08%） 陜西中鑫生物技術有限公司。

JR-2集熱式磁力加熱攪拌器 天津歐諾儀器儀表有限公司；ESJ205-4電子天平 沈陽龍騰電子稱量儀器有限公司；RE-52AA旋轉蒸發(fā)儀 上海亞榮生化儀器廠；LC-10ATVP高效液相色譜儀 日本島津公司。

1.2 動物

昆明小鼠，雄性，體質量25～30 g，天津市西青區(qū)博為生物制品經營部提供，動物許可證號：SYXK津2012- 0001。

1.3 方法

1.3.1 葛根素的提取

葛根粗提物：將葛根飲片粉碎過篩，加8 倍量體積分數(shù)為70%的乙醇加熱80 ℃回流并磁力攪拌，提取3 次，每次2 h，過濾，合并濾液，濃縮干燥，制得葛根粗提物。

葛根異黃酮：將制得的粗提物溶解后，過AB-8型大孔吸附樹脂柱：正確裝柱且用蒸餾水沖洗至平衡后上樣，吸附 0.5 h，然后用蒸餾水沖洗1 h，再用乙醇梯度洗脫，收集目標洗脫液，濃縮干燥，制得葛根異黃酮粉末[5]。

1.3.2 高效液相色譜法（high performance liquid chromatography，HPLC）法測定葛根素含量

參考GB/T22251—2008《保健食品中葛根素的測定》，采用HPLC法測定葛根粗提物、葛根異黃酮、60%葛根素、99%葛根素中葛根素的含量。

1.3.3 動物實驗處理

選用天津市西青區(qū)博為生物制品經營部提供的25～30 g雄性昆明鼠60 只，隨機分組。醉酒狀態(tài)判定：給酒后將小鼠背部朝下，四肢朝上觀察其翻正反射是否消失，消失且持續(xù)30 s即可判定為醉酒狀態(tài)。醒酒狀態(tài)判定：進入醉酒狀態(tài)后，觀察其翻正反射是否恢復，翻身時間短于30 s即可判定為醒酒狀態(tài)。

1.3.3.1 給酒量選擇實驗

禁食（不禁水）12 h后，分別按10、12.5、15、20 mL/kg劑量灌胃，觀察記錄未醉只數(shù)、死亡只數(shù)、醉酒時間與醒酒時間（醉酒時間：灌胃到翻正反射消失的時間，醒酒時間：翻正反射消失到恢復的時間。下同）。選擇未醉率與死亡率都較低，醉酒時間與醒酒時間適中的給酒量進行下述實驗。

1.3.3.2 葛根素梯度灌胃實驗

禁食（不禁水）12 h后[6]，分別用葛根粗提物、葛根異黃酮、60%葛根素、99%葛根素配制30 mg/mL的50%丙二醇水溶液，按給藥量為200 mg/kg灌胃（以體質量計，下同）[7]，30 min后灌胃12.5 mL/kg酒，觀察記錄醉酒時間與醒酒時間。

1.3.3.3 急性酒精中毒小鼠血液乙醇含量的測定

采用乙醇脫氫酶法[8]測定小鼠血液中乙醇的含量。

標準曲線的制備：將正常小鼠摘眼球取血，加肝素抗凝后，按全血與生理鹽水體積比1∶3混勻，得到稀釋血液。以上述血稀釋液配制乙醇質量濃度分別為500、1 000、1 500、2 000、2 500 mg/L的標準溶液各1.0 mL，加4%高氯酸4.0 mL，混勻，4 ℃、3 000 r/min離心5 min，吸取上清液各0.1 mL，各加乙醇脫氫酶-氧化型煙酞胺腺嚓吟二核昔酸（alcohol dehydrogenase-nicotinamide adenine dinucleotide，ADH-NAD）液4.9 mL，36 ℃水浴1 h，按紫外分光光度法在340 nm波長處，以蒸餾水為空白對照，測定各管吸光度。以吸光度（y）為縱坐標，相應乙醇質量濃度（x）為橫坐標繪制標準曲線，回歸方程為y=0.009 9x-0.036 7（R2=0.999 5）。

樣品測定：將小鼠按1.3.3.2節(jié)葛根素梯度灌胃實驗中的方法予以分組、灌胃（對照組灌胃等計量生理鹽水）。給酒后30、60、90、120、180、240、300、360 min對小鼠進行眼眶取血。加肝素后，取抗凝血0.25 mL，加生理鹽水0.75 mL，4%高氯酸4.0 mL后立即測定吸光度。從標準曲線上查得每一吸光度所對應的的乙醇質量濃度再乘以稀釋倍數(shù)即可得到樣品血液中的乙醇含量。

1.3.3.4 葛根素用藥量選擇實驗

禁食（不禁水）12 h后，分別用葛根異黃酮劑量為100、200、300、400 mg/kg灌胃[9]，30 min后灌胃12.5 mL/kg酒，觀察記錄醉酒時間與醒酒時間。

1.4 數(shù)據(jù)分析

2 結果與分析

2.1 HPLC法測定各灌胃藥品中葛根素含量

圖1 高效液相圖譜結果Fig.1 Results of HPLC

在HPLC法[10]測定的葛根素在各灌胃藥品中含量不一，葛根粗提物為1.895%，葛根異黃酮為11.012%，60%的葛根素為66.722%，99%的葛根素為98.552%，依次增高，梯度明顯。圖1為葛根素和葛根異黃酮的HPLC圖譜。

CBL組學員主要以病例講解為主，以小組形式開展討論式教學，由帶教教師課前將EUS下膽道胰腺正常解剖結構、典型圖例和經典EUS下病例圖像、患者病史及信息進行整理，在授課中采用先播放患者信息、病史、體格檢查等一般資料，然后將典型EUS下圖像逐一展示，鼓勵學員分組討論，擬定初步診斷結果以及列舉診斷依據(jù)，討論之后向學員講解診斷結果，并指出誤診原因以及診斷流程和診斷圖像特征。

2.2 給酒量選擇實驗結果

表1 不同給酒量對小鼠的影響Table 1 Effect of different amounts of Erguotou liquor on mice

由表1可知，20 mL/kg組有死亡現(xiàn)象，10 mL/kg有未醉現(xiàn)象，均不適合作為實驗的給酒劑量。12.5 mL/kg組與15 mL/kg組比較，12.5 mL/kg組的醉酒時間和醒酒時間的長度均比較適合，故選擇12.5 mL/k g為下述實驗的給酒量。

2.3 葛根素梯度灌胃實驗結果

表2 等劑量不同灌胃藥物對小鼠的影響Table 2 Effect of different drugs orally administered at the same dosage on mice

由表2可知，隨著葛根素含量的升高，醉酒時間逐漸延長、醒酒時間逐漸縮短，即可說明葛根素有明顯的解酒防醉功效。與此同時，也發(fā)現(xiàn)葛根異黃酮組與60%葛根素組的數(shù)據(jù)差距甚小，分析其原因，可能是葛根中有除葛根素以外的異黃酮類物質，與葛根素有相似的功效。由圖1d可知，除了在3.831 min處有明顯的葛根素吸收峰外，其周圍還有一些小而零散的異黃酮吸收峰，這些物質在結構上與葛根素高度相似，由此可推斷它們與葛根素有相似的功效。

2.4 急性酒精中毒小鼠血液乙醇含量的測定結果

圖2 不同含量葛根素對急性酒精中毒小鼠血液乙醇含量的影響Fig.2 Effects of different contents of puerarin on the concentrationof ethanol in blood of mice

2.5 葛根素用藥量的選擇實驗結果

表3 不同含量葛根異黃酮對小鼠的影響Table 3 Effect of different doses of pueraria on mice

由表3可知，隨著葛根素用藥量的增加，醉酒時間逐漸延長、醒酒時間逐漸縮短，之后則變化趨于緩和。因此，選擇葛根異黃酮300 mg/kg為最優(yōu)用藥量，折合葛根素33.039 mg/kg。

3 討 論

酒精進入人體后，主要通過以下4 個途徑進行代謝[11]：1）部分乙醇在胃黏膜氧化脫氫酶（alcohol dehydrogenase，ADH）作用下首過代謝（firstpassmetabolism，F(xiàn)PM），從而減少了進入機體的乙醇總量。2）肝細胞內的乙醇脫氫酶氧化途徑，可產生自由基，引起氧化應激。3）肝微粒體內的乙醇氧化酶系（microsomal ethanol oxidizing system，MEOS）系統(tǒng)。4）肝過氧化酶體內的觸酶（過氧化物酶）。

由本實驗結果可知，隨著灌胃藥品中葛根素濃度的不斷升高，小鼠的醉酒時間逐漸延長，醒酒時間逐漸縮短，說明葛根素在機體急性防醉解酒方面有出色的功效。宋浩亮等[12]經實驗證明了葛根素對飲酒后小鼠的異常行為的改變和肌體內氧化反應有明顯的拮抗作用，能起到保護機體細胞的作用。Zhang Rongrong等[13]經實驗證明了葛根提取物有抑制乙醇導致的腸道通透性增加，改善乙醇所導致的腸屏障功能紊亂的功能。Lee等[14]認為葛根水提物能通過促進脂質物質代謝和提高肝中抗氧化酶的活性，從而降低乙醇及其代謝物的危害。日本福岡大學的金城順英和熊本大學原野稔私認為葛根異黃酮可通過機體的內分泌系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)發(fā)揮協(xié)調作用，改善酒精引起的新陳代謝異常[15]。中島嘉次郎[16]通過實驗證明葛根異黃酮能保護胃黏膜以及激活消化管，促進小鼠消化道的輸送功能。與此同時，雖然葛根異黃酮中的葛根素含量明顯低于60%葛根素，但這兩組的數(shù)據(jù)卻并無太大差異，說明葛根中的其他異黃酮類物質與葛根素同有解酒防醉的功效，或者與葛根素有協(xié)同的作用。葛根中各種異黃酮的結構本就大體類似，在葛根異黃酮的HPLC圖譜中，葛根素的特征吸收峰附近存在幾個其他異黃酮的吸收峰，雖然小卻與葛根素吸收峰的位置接近，這說明有些異黃酮的結構與葛根素極為相似，因而才會具有相同或相似的功效。Yu Wenli等[17]采用了化學發(fā)光法比較葛根中總異黃酮和葛根素清除自由基的能力，結果表明兩者都有出色的抗氧化功能，但葛根總異黃酮要明顯優(yōu)于葛根素。周吉銀[18]、歐陽玉祝[19]等認為葛根總黃酮是葛根提取物中的主要有效成分，葛根素則是葛根總黃酮中的一種活性單體成分，兩者均具有防醉酒、治醉酒和對抗酒精肝損傷等作用。湯曉等[20]報道了多黃酮混合物抗氧化活性的協(xié)同與拮抗作用。葛根作為一種安全有效的傳統(tǒng)解酒藥物在中國已經有千年歷史，今后應從分子的角度深入探討其作用機制，將葛根異黃酮中的有效成分制成快捷、廉價而又適用于臨床的新型防醉解酒產品。

4 結 論

本實驗分析和評價了葛根中葛根異黃酮和葛根素的解酒防醉效果，通過醉酒時間、解酒時間以及小鼠給酒后血液乙醇含量等生理指標結合灌胃藥品中葛根素 的含量得出以下結論：1）葛根素對小鼠急性防醉解酒有一定功 效，能有效降低血液中乙醇的含量，從而延長小鼠醉酒時間，縮短小鼠醒酒時間。灌胃藥品中葛根素含量越高，防醉解酒的效果越明顯。2）葛根中除葛根素外，有其他的異黃酮類物質與葛根素有相似的防醉解酒功效，機制有待進一步研究。

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Puerarin and Isof l avones from Kudzu Root (Pueraria lobata Ohwi) Prevent Acute Drunkenness and Relieve Alcoholism in Mice

ZHU Zhen-yuan, XUE Jing, LIU Xiao-cui, MENG Meng, TANG Ya-li, ZHANG Jun, GUO Rong
(Key Laboratory of Food Nutrition and Safety, Ministry of Education, College of Food Engineering and Biotechnology, Tianjin University of Science and Technology, Tianjin 300457, China)

Objective: The present study aimed to evaluate the effects of puerarin and isof l avones from kudzu root (Pueraria lobata Ohwi) on preventing acute drunkenness and relieving alcoholism in mice. Method: Firstly, mice were divided randomly into five groups: control, crude kudzu root extract, kudzu root isoflavone, 60% puerarin, and 99% puerarin. After 12 hours of fasting but with access to water, the mice in each group were orally administered with an equal dose of the corresponding materials in 50% aqueous propylene glycol solution (the solvent alone for the control group). After 30 minutes, the mice from each group were administered by gavage with an identical volume of 56° red star Erguotou liquor. The preventive effect of different contents of puerarin on acute drunkenness was investigated by observing the drunk time and sober-up time. At the sam e time, the ethanol concentration in blood samples of mice was continuously detected to characterize the degree of intoxication in mice at different time points. Secondly, another batch of mice were divided into four groups, which were administered with kudzu root isof l avone containing approximately 22.13% puerarin at doses of 100, 200, 300 and 400 mg/kg bw after 12 hours of fasting with access to water, respectively. The optimal dose for preventing acute drunkenness and relieving alcoholism was selected based on the drunk time and sober-up time. Results: With increasing amount of puerarin in the materials administered to mice, the drunk time was increased and sober-up time was shortened. Hence, the effect of puerarin is positively proportional to its content. However, no obvious change was observed when the puerarin content exceeded 300 mg/kg bw. Conclusion: Puerarin is effective at preventing acute drunkenness and relieving alcoholism. Other isof l avones from kudzu root have similar effect to that of puerarin.

puerarin; kudzu root isoflavones; mice; anti-drunk; drunk time; sober-up time

TS201.1

A

1002-6630（2014）15-0247-04

10.7506/spkx1002-6630-201415050

2013-07-14

天津科技大學科學研究基金項目（20120106）；農業(yè)科技成果轉化資金項目（2011GB2A100009）

朱振元（1969—），男，教授，博士，研究方向為生物資源與功能食品。E-mail：zhyuanzhu@tust.edu.cn