毛志剛，馮景輝

（煙臺大洋制藥有限公司，山東煙臺265500）

頭痛寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準研究

毛志剛，馮景輝

（煙臺大洋制藥有限公司，山東煙臺265500）

目的建立頭痛寧顆粒質(zhì)量標(biāo)準。方法采用薄層色譜法對制劑中的天麻、當(dāng)歸、防風(fēng)進行薄層鑒別；采用高效液相色譜法對制劑中的天麻素進行含量測定。結(jié)果在薄層色譜圖中可檢出天麻、當(dāng)歸、防風(fēng)；天麻素在0.113 6～2.272μg范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系（r＝0.999 6），平均回收率為98.9%，RSD為1.48%。結(jié)論所建立的方法可靠、準確、專屬性強，可有效控制頭痛寧顆粒的質(zhì)量。

質(zhì)量標(biāo)準；頭痛寧顆粒；薄層色譜法；高效液相色譜法；天麻素

頭痛寧顆粒是煙臺大洋制藥有限公司自行研制品種，由頭痛寧膠囊（收載于國家藥品監(jiān)督管理局《國家中成藥標(biāo)準匯編》中成藥地方標(biāo)準上升國家標(biāo)準部分經(jīng)絡(luò)肢體、腦系分冊［1］）改變劑型而來，由土茯苓、天麻、制何首烏、當(dāng)歸、防風(fēng)、全蝎等六味中藥組成，具有熄風(fēng)滌痰，逐瘀止痛的功效。用于偏頭痛，緊張性頭痛屬痰淤阻絡(luò)證，證見：痛勢甚劇，或攻沖作痛，或痛如錐刺，或連及目齒，或目眩畏光，胸悶脘脹，惡心嘔吐，急躁易怒，反復(fù)發(fā)作。本試驗對原標(biāo)準進行了提高性研究，對方中天麻、當(dāng)歸、防風(fēng)進行薄層色譜鑒別，并建立了頭痛寧顆粒中天麻素的含量測定方法。

1 儀器與試藥

島津LC－10ATvp液相色譜儀；硅膠G薄層板（煙臺市化學(xué)工業(yè)研究所）；天麻素對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號：110807－200205，供含量測定用）、防風(fēng)對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120947－200405，供鑒別用）、當(dāng)歸對照藥材（中國食品藥品檢定研究院，批號：120927－200411，供鑒別用）；頭痛寧顆粒自制（批號：120802、120803、120804），每袋裝3 g；乙腈為色譜純；其他試劑為分析純。

2 頭痛寧顆粒的薄層色譜鑒別

2.1 天麻的薄層鑒別 取本品4 g，研細，加乙醇20 mL，超聲處理30 min，濾過，濾液作為供試品溶液。另取天麻素對照品，加甲醇制成每1 mL含1.0 mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法［2］［《中國藥典》2010年版（一部）附錄ⅥB］試驗，吸取供試品溶液5μL，對照品溶液4μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以乙酸乙酯－甲醇－水（9∶1∶0.2）為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10%磷鉬酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應(yīng)的位置上，顯相同的淡棕色斑點。缺天麻的陰性樣品無干擾（見圖1）。

2.2 防風(fēng)的薄層鑒別 取本品內(nèi)容物4 g，研細，加乙醇30 mL，加熱回流1 h，濾過，濾液濃縮至適量，加于中性氧化鋁柱（內(nèi)徑1.5 cm，長5 cm）上，用丙酮20 mL洗脫，收集洗脫液，揮干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取防風(fēng)對照藥材1 g，加氯仿20 mL，濃氨溶液1 mL，回流提取1 h，濾過，濾液蒸干，殘渣加乙醇2 mL使溶解，作為對照藥材溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版（一部）附錄ⅥB］試驗，吸取上述兩種溶液各5μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚（60～90℃）－乙酸乙酯（7∶3）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯4個相同顏色的熒光斑點。防風(fēng)的陰性樣品無干擾（見圖2）。

2.3 當(dāng)歸的薄層鑒別 取本品4 g，研細，加甲醇20 mL，超聲處理20 min，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20 mL使溶解，用乙醚振搖提取3次，每次15mL，合并乙醚液，揮干，殘渣加甲醇2 mL使溶解，作為供試品溶液。另取當(dāng)歸對照藥材1 g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法［《中國藥典》2010年版（一部）附錄ⅥB］試驗，吸取上述兩種溶液各7μL，分別點于同一硅膠G薄層板上，以正己烷－乙酸乙酯（9∶1）為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈（365 nm）下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應(yīng)的位置上，顯3個相同顏色的熒光斑點。缺當(dāng)歸的陰性樣品無干擾（見圖3）

圖1 天麻薄層色譜圖

圖2 防風(fēng)薄層色譜圖

3 天麻素的含量測定

3.1 色譜條件 色譜柱：Sinochrom ODS－BPC18柱（4.6 mm×250 mm，5μm），乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97）為流動相，流速1.0 mL·min－1，檢測波長為220 nm，進樣量：20μL，理論板數(shù)按天麻素峰計算應(yīng)不低于3 000。

圖3 當(dāng)歸薄層色譜圖

3.2 對照品溶液的制備 取天麻素對照品，加甲醇制成每1 mL含30μg的溶液，即得。

3.3 供試品溶液的制備 取裝量差異項下的本品內(nèi)容物20 g，研細，取約1 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入稀乙醇50 mL，密塞，稱定重量，加熱回流2 h，放冷，再稱定重量，用稀乙醇補足減失的重量，濾過，精密量取續(xù)濾液10 mL，濃縮至近干，殘渣加乙腈－水（3∶97）混合溶液使溶解，轉(zhuǎn)移至10 mL量瓶中，并用乙腈－水（3∶97）混合溶液稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

3.4 干擾試驗 按處方取不含天麻的陰性樣品，同法制備陰性樣品溶液。精密吸取對照品溶液、供試品溶液及陰性樣品溶液各20μL注入液相色譜儀，記錄色譜圖。陰性樣品不干擾測定，見圖4。

3.5 線性關(guān)系考察 精密稱取天麻素對照品適量，加乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97）使完全溶解，配制成0.113 6 mg·mL－1的對照品儲備液。精密移取儲備液加乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97）稀釋，制成0.113 6、0.056 8、0.034 08、0.017 04、0.005 68 mg ·mL－1的對照品溶液。精密吸取各濃度的對照品溶液20μL，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，以進樣量為橫坐標(biāo)（X），峰面積積分值為縱坐標(biāo)（Y）繪制標(biāo)準曲線，經(jīng)線性回歸，得回歸方程：Y＝1 917.0X＋274.95，r＝0.999 6，表明天麻素進樣量在0.113 6～2.272μg之間與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.6 精密度試驗 取濃度為0.028 4 mg·mL－1的對照品溶液20μL，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進樣6次，結(jié)果對照品峰面積的RSD為0.24%，表明儀器精密度良好。

3.7 穩(wěn)定性試驗 取供試品溶液，分別于0、2、4、6、8 h精密吸取20μL，注入液相色譜儀，測定峰面積。RSD＝1.1%（n＝5），表明方法穩(wěn)定性良好。

圖4 HPLC色譜圖A.天麻素對照品溶液；B.供試品溶液；C.陰性樣品溶液

3.8 重復(fù)性試驗 取同批號（120802）樣品6份，“3.3”項下方法制備供試品溶液，進樣測定，平均含量為3.80 mg／袋，RSD為0.84%（n＝6）。

3.9 加樣回收率試驗 取已知含量的同批號（120802）樣品適量，共5份約0.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，分別精密加入天麻素對照品0.75 mg（精密稱取天麻素對照品15 mg，置10 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，作為對照品母液，分別精密量取0.5 mL對照品母液，加入5份供試品中），照“3.3”項下方法制備供試液，進樣20μL，測定天麻素的含量，計算回收率，結(jié)果平均回收率98.9%，RSD（%）為1.48，結(jié)果顯示，所建立方法加樣回收率良好。

3.10 樣品含量測定 取頭痛寧顆粒，照“3.3”項下方法制備供試品溶液。分別精密吸取對照品溶液和供試品供試液各20μL，注入液相色譜儀，記錄峰面積，按外標(biāo)（峰面積）法計算樣品中的天麻素含量，結(jié)果見表1。

表1 樣品測定結(jié)果（n＝3）

4 討論

4.1 測定波長的選擇 參考文獻［3～5］中天麻素的檢測波長，用紫外分光光度計對天麻素對照品甲醇溶液進行掃描，結(jié)果天麻素在220 nm處有最大吸收，故采用220 nm作為測定波長。

4.2 流動相的選擇 《中國藥典》2010年版（一部）天麻含量測定流動相為乙腈－0.05%磷酸溶液（3∶97），經(jīng)試驗，該流動相適合本品的測定。

采用TLC法對防風(fēng)、當(dāng)歸、天麻進行了薄層色譜研究，同時采用HPLC法測定本品中的天麻素含量，方法簡便，專屬性強，陰性對照未見干擾，可用于控制頭痛寧顆粒的質(zhì)量，同時也提高了該制劑的質(zhì)量標(biāo)準。

［1］國家食品藥品監(jiān)督管理局.國家中成藥標(biāo)準匯編（中成藥地方標(biāo)準上升國家標(biāo)準部分經(jīng)絡(luò)肢體、腦系分冊）［S］.北京：人民衛(wèi)生出版社，2005.

［2］國家藥典委員會.中華人民共和國藥典2010年版（一部）［S］.北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010.

［3］謝敏，吳春敏，高佳玲.HPLC法測定風(fēng)痛定片中天麻素的含量［J］.海峽藥學(xué)，2000，12（3）：47－48.

［4］張震，張長林.正交試驗優(yōu)選天麻的提取工藝［J］.齊魯藥事，2011，30（6）：311－313.

［5］張永林，鮑燕燕，凌云，等.HPLC法測定頭痛安沖劑中天麻素的含量［J］.中草藥，2001，32（7）：612－613.

Study on quality standard for Toutongning Granules

MAO Zhi-gang，F(xiàn)ENG Jing-hui
（Yantai Dayang Pharmaceutical Co.，Ltd.，Yantai265500，China）

ObjectiveTo establish the quality standard for Toutongning Granules.M ethodsThe Gastrodia elata，Angelica sinensis（Oliv）Diels，Saposhnikovia divaricata（Turcz）Schischk.were identified by TLC；The content of Gastrodin was dentermined by HPLC.ResultsThe Gastrodia elata，Angelica sinensis（Oliv），Saposhnikovia divaricata（Turcz）were detected by TLC.The linear range of Gastrodin was 0.113 6～2.272μg（r＝0.999 6），and the average recovery was 98.9%with RSD 1.48%.Conclusions The method was reliable，specifie and accurate，and can effectively control the quality of Toutongning Granules.

Quality standard；Toutongning Granules；TLC；HPLC；Gastrodin

R927.1

A

2095－5375（2014）12－0702－003

毛志剛，男，研究方向：藥品質(zhì)量管理，E－mail：maozhigang370285＠163.com

馮景輝，男，研究方向：中藥制劑，Tel：13054565470，E－mail：416286567＠qq.com